細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法王思理2000版較95版藥典修改要點(diǎn)新增加三個(gè)定義1.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水2.鱟試劑靈敏度3.反應(yīng)終點(diǎn)濃度其他增加內(nèi)容前言：細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的用途增加了復(fù)核鱟試劑靈敏度。試驗(yàn)準(zhǔn)備：增加了試驗(yàn)所和器皿應(yīng)確證無(wú)干擾細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。鱟試劑靈敏度復(fù)核:增加了2管陰性對(duì)照。供試品干擾試驗(yàn):增加了標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照檢查法:鱟試劑的支數(shù)由原來(lái)4支增加為5支結(jié)果判斷:

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則

1.細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定：L=K/M2.干擾實(shí)驗(yàn)3.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)4.鱟試劑5.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水細(xì)菌內(nèi)毒素定量測(cè)定法

（比濁法和顯色基質(zhì)法）

1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)2.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水3.鱟試劑：應(yīng)符合定量測(cè)定要求。4.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：同細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。細(xì)菌內(nèi)毒素定量實(shí)驗(yàn)方法1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的可靠性實(shí)驗(yàn):r<-0.982.供試品的干擾實(shí)驗(yàn):MVD=L.C/λ1 3.測(cè)定及判斷:回收率50%-200%4.供試品的定量測(cè)定：測(cè)定結(jié)果與L比較細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的指導(dǎo)意義

1.明確指明了制訂指導(dǎo)原則的目的是“為了將細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法廣泛應(yīng)用于藥品、生物制品的質(zhì)量控制”講的非常明確。2.首次從官方文件中肯定了細(xì)菌內(nèi)毒素定量測(cè)定法，這對(duì)促進(jìn)“定量法”在我國(guó)應(yīng)用將起重大的促進(jìn)作用。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的指導(dǎo)意義

3.指導(dǎo)原則對(duì)細(xì)菌內(nèi)素限值作出了非常明確的規(guī)定：1、細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定藥品、生物制品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值(L)一般按以下公式確定：L=K/M4.在這次指導(dǎo)原則中只字未提熱源與細(xì)菌內(nèi)毒素兩法改變中的對(duì)比試驗(yàn)，即今后在兩法改換中不必再做對(duì)比試驗(yàn)。這樣必將大大加速我國(guó)兩法的改換進(jìn)程。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則的指導(dǎo)意義

5.指導(dǎo)原則中明確規(guī)定：“標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)試驗(yàn)中所用細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)應(yīng)使用由中國(guó)藥品生物制品檢定所研制、標(biāo)定和分發(fā)的細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和工作標(biāo)準(zhǔn)品。”6.隨著定量法在我國(guó)得到肯定、應(yīng)用和推廣，它還將有力地推動(dòng)促進(jìn)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法在我國(guó)的新進(jìn)展。細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品981的研制

概況1.我國(guó)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品從1979年研制成功并正式建立至今共研制分發(fā)了六批。2.現(xiàn)行細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品981的研制與考核時(shí)間3.研制分四個(gè)階段細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品981的特點(diǎn)

1.細(xì)菌內(nèi)毒素精品的提取2.細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的賦形劑3.候選品的生產(chǎn)4.候選品的考核5.協(xié)作標(biāo)定---新的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品IS2為基準(zhǔn)細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品981的特點(diǎn)6.標(biāo)定方法---凝膠法和定量法7.協(xié)作標(biāo)定后結(jié)果經(jīng)數(shù)據(jù)處理和專家討論8.報(bào)中檢所學(xué)術(shù)委員會(huì)審定9.長(zhǎng)期穩(wěn)定性考核與分裝后的穩(wěn)定性考核10.標(biāo)準(zhǔn)品的有效期細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法考察報(bào)告

1.王思理等一行4人于1998年1月16日-27日首次赴美國(guó)進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的專題考察。2.我們這次考察作了充分準(zhǔn)備,是帶著問(wèn)題而去的,在出訪前又集中討論了要了解的重點(diǎn)問(wèn)題.3.這次考察將對(duì)我國(guó)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的發(fā)展起到良好的作用.考察主要收獲

一.鱟試劑的生產(chǎn)與管理1.鱟試劑生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的試劑均須按照美國(guó)聯(lián)邦法律的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行質(zhì)量控制并送FDA檢驗(yàn)通過(guò)后方可銷售。2.生產(chǎn)企業(yè)在批批送檢時(shí)須呈交所有質(zhì)量控制和原始記錄。3.在對(duì)鱟試劑的靈敏度進(jìn)行標(biāo)定時(shí)需同進(jìn)使用美國(guó)內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和鱟試劑參考標(biāo)準(zhǔn)品?？疾熘饕斋@

二.內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品的管理1.美國(guó)FDA負(fù)責(zé)管理內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品(EC系列)和鱟試劑參考品,政府免費(fèi)提供內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和鱟試劑參考品給鱟試劑生產(chǎn)廠家用于靈敏度標(biāo)定。2.工作標(biāo)準(zhǔn)品(CSE)由廠家自行生產(chǎn)和發(fā)放,政府不核發(fā)有關(guān)執(zhí)照。

考察主要收獲

三.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法用于藥品生產(chǎn)過(guò)程及最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制考察主要收獲

四.由熱原檢查法改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法

1.細(xì)菌內(nèi)毒素限值的計(jì)算2.由熱原檢查法轉(zhuǎn)換為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的條件是供試品在一定條件下不干擾鱟試驗(yàn)，每個(gè)廠家每個(gè)品種做3批供試品的干擾試驗(yàn)即可，不必進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)?？疾熘饕斋@

五.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法1.鱟試劑靈敏度復(fù)核的目的不是考察靈敏度是否準(zhǔn)確，而且考察操作是否準(zhǔn)確，以及工作標(biāo)準(zhǔn)品是否準(zhǔn)確。2.0.1ml規(guī)格的鱟試劑的生產(chǎn)與使用應(yīng)與國(guó)際接軌。3.對(duì)供試品進(jìn)行常規(guī)檢查時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照對(duì)4個(gè)濃度，至少有兩個(gè)濃度，即2λ和0.25λ。同時(shí)供試品陽(yáng)性對(duì)照不可缺少。每個(gè)濃度平等做兩管。4.．用于配制調(diào)節(jié)供試品酸堿度的氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液、緩沖溶液等均嚴(yán)格要求細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水?？疾熘饕斋@

六.其他1．在計(jì)算大輸液的內(nèi)毒素限值時(shí)，M一般定為10ml/kg/hr。2.FDA的關(guān)于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的Guldeline(指南)不具有法律效應(yīng)，它不是Regulation。3.美國(guó)藥典收裁的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的法定方法為凝膠法，其它兩種方法可以采用，但需做比較試驗(yàn)。4.新藥在生產(chǎn)過(guò)程中和最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制均須要求采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。幾點(diǎn)建議1.抓緊修訂和完善中國(guó)藥典2000年版附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。2.制訂細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則，統(tǒng)一規(guī)范檢查中的有關(guān)問(wèn)題。3.對(duì)鱟試劑實(shí)行批批檢定或統(tǒng)一發(fā)放細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品，建議中檢所研究解決。4.擴(kuò)大品種的應(yīng)用，建議藥典會(huì)制定原則，宜先將中國(guó)藥典95年版中要求進(jìn)行熱原檢查法的品種改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，新藥應(yīng)積極推廣使用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。關(guān)于如何在我國(guó)將熱原檢查法改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的記得建議建議一.首先應(yīng)該明確將熱原檢查法改為細(xì)內(nèi)菌毒素檢查法不要做“兔法”與“鱟試驗(yàn)法”的對(duì)比試驗(yàn)。對(duì)比實(shí)驗(yàn)嚴(yán)重地影響了我國(guó)在藥品熱原檢查中改為細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的進(jìn)度，大大的落后了美國(guó)，這個(gè)歷史才識(shí)必須吸取。建議二.要在我國(guó)大量品種實(shí)施細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的一個(gè)重要任務(wù)是必須要作好細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系統(tǒng)工程的標(biāo)準(zhǔn)化工作。

細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系統(tǒng)工程標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)容1.《細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法》的修訂2.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法擴(kuò)大應(yīng)用指導(dǎo)原則的制定3.細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)范(SOP)的制訂4.細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的研制5.鱟試劑內(nèi)在質(zhì)量的研究細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法系統(tǒng)工程標(biāo)準(zhǔn)化的內(nèi)容6.鱟試劑部頒標(biāo)準(zhǔn)的修訂7.鱟試劑國(guó)家對(duì)照品的研制8.細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品的研制