靈龜八法傳受開穴灸對豚鼠衰老的影響

靈龜八法傳受開穴灸對豚鼠衰老的影響

“靈寶八法”是針灸時間學習的重要組成部分。它是古代九谷理論運用人體奇經(jīng)八脈氣血循環(huán)而成的八經(jīng)八脈。將十二經(jīng)脈和奇經(jīng)八脈的八個穴位（孫子兵法、內(nèi)關(guān)、手足出血、外關(guān)、列海、后溪和申脈）進行針灸，并根據(jù)日時干點的發(fā)展及時取穴。這是針灸和莫哈布西翁的具體應(yīng)用。這是基于時間和制度的原則的例子。謝感共導師研究靈龜八法20余載,從理論上證實了靈龜八法自古就是養(yǎng)生保健的方法。同時,筆者在臨床中發(fā)現(xiàn),采用靈龜八法針刺治療的老年人患者群體中,除對多種老年性疾病獲得良好的治療效果外,還具有抗衰老作用。為進一步探索靈龜八法抗衰老的機理,筆者以腎陽虛模型豚鼠為研究對象,運用靈龜八法按時開穴灸治,觀察靈龜八法對腎陽虛模型豚鼠自由基代謝的影響,現(xiàn)將實驗結(jié)果報告如下。1材料和方法1.1材料表面(1)動物驅(qū)動行為本實驗選用健康成年豚鼠50只,月齡4～5月,雌雄各半,體重180～280g,動物由廣西中醫(yī)學院動物中心提供[動物合格證號為桂動許字(1999)第11004號]。(2)自由的飼養(yǎng)實驗前,所有動物都在實驗室條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)2w,自由進食和飲水。實驗室要求每天光照與黑暗各12h(光照時間為7∶00～19∶00),室溫23℃。(3)主要試劑及藥品造模藥品選用醋酸潑尼松龍注射液(由浙江仙居制藥股份有限公司生產(chǎn),仙樂牌,國藥準字H33020824,規(guī)格為5mL:0.125g/支,生產(chǎn)批號050405),主要試劑為SOD、MDA試劑盒(由南京建成生物工程研究所提供,批號分別為20050715及20050607)。(4)紫外分光比色計蘇州醫(yī)療用品廠的華佗牌針灸針,美國Beckman公司的DU640型紫外分光比色計,美國Beckman公司的Microfuge22R型臺式冷凍離心機,德國Eppendorf公司的各式加樣槍等。(5)愛俄將細軟艾絨捻緊成為直徑約0.2cm、高0.4cm的圓錐狀艾炷。1.2約束肌注醋酸參照劉氏法進行造模。將75%酒精棉球常規(guī)消毒大腿部皮膚,以4.5號注射針頭肌注醋酸潑尼松龍注射液6mg/100g(0.24mL),每日1次,連續(xù)用藥12d。模型豚鼠出現(xiàn)活動遲緩、神態(tài)萎靡、踡臥、弓背、畏寒肢冷、體毛枯疏起球、尿多、下利清谷等腎陽虛征象,即造模成功。1.3穴的定位方法按體重大小和性別作隨機區(qū)組設(shè)計,分為腎陽虛模型靈龜八法預防組(Ⅰ組)、腎陽虛模型命門灸預防組(Ⅱ組)、腎陽虛模型靈龜八法治療組(Ⅲ組)、腎陽虛模型命門灸治療組(Ⅳ組)、腎陽虛模型對照組(Ⅴ組)等5組,每組10只。實驗于每日上午的8∶00～12∶00進行,各組處理方法如下。Ⅰ組:每日進行醋酸潑尼松龍注射液注射后,將豚鼠取仰臥位,四肢固定于實驗臺上,靈龜八法的開穴方法按謝氏“靈龜八法開穴簡表”進行,每日按當時所開的穴位進行艾炷灸,12日所開的穴位依次為公孫、外關(guān)、公孫、后溪、照海、列缺、公孫、列缺、照海、申脈、申脈、公孫,每日取一側(cè)穴位,左右交替進行。腧穴定位方法按李辭蓉等著的《豚鼠針灸穴位圖譜的研制》的標準進行。艾炷施灸方法:先將施灸部位的體毛剪去,再涂以少量蘆薈汁(起粘貼艾炷及預防起泡作用),放上艾炷,無瘢痕直接灸,每次連續(xù)灸3壯,每壯以豚鼠全身掙扎為度,每日1次。造模結(jié)束后次日采血,本組實驗結(jié)束。Ⅱ組:每日進行醋酸潑尼松龍注射液注射后,將豚鼠取仰臥位,四肢固定于實驗臺上,在“命門”穴上進行艾炷灸。腧穴定位方法及艾炷施灸方法同Ⅰ組。造模結(jié)束后次日采血,本組實驗結(jié)束。Ⅲ組:造模期間不進行治療,造模結(jié)束豚鼠出現(xiàn)腎陽虛征象后開始每天按靈龜八法所開的穴位進行艾炷灸,12日所開的穴位依次為“照?！薄傲腥薄薄罢蘸！薄傲腥薄薄吧昝}”“照?！薄巴怅P(guān)”“照?！薄白闩R泣”“外關(guān)”“外關(guān)”“外關(guān)”,每日取一側(cè)穴位,左右交替進行。腧穴的定位及施灸方法同Ⅰ組,共治療12d。Ⅳ組:造模期間不進行治療,造模結(jié)束豚鼠出現(xiàn)腎陽虛征象后開始每天在“命門”穴上進行艾炷灸。腧穴定位及艾炷施灸方法同Ⅰ組,共治療12d。Ⅴ組:造模期間不進行治療,造模結(jié)束豚鼠出現(xiàn)腎陽虛征象后也不作任何處理,繼續(xù)常規(guī)喂養(yǎng)12d。1.4主題4、實驗結(jié)束開發(fā)階段采血Ⅰ組及Ⅱ組動物在實驗前1d及造模結(jié)束次日采血,Ⅲ組、Ⅳ組及Ⅴ組則在實驗前1d、造模結(jié)束次日及實驗結(jié)束次日采血。采血方法:用毛細玻璃管從目內(nèi)眥或外眥刺入,刺中眶底靜脈叢后,取血1mL,按照試劑盒說明書檢測血清的SOD和MDA含量。SOD測定方法為羥胺比色法,MDA測定方法為TBA比色法。1.5數(shù)據(jù)計數(shù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用華西醫(yī)科大學衛(wèi)生統(tǒng)計教研室開發(fā)的PEMS軟件進行,所有數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差(x—±s)表示,進行樣本均數(shù)比較的方差分析。2結(jié)果2.1a的變化不顯著p、0.05造模結(jié)束后Ⅰ組及Ⅱ組未出現(xiàn)腎陽虛征象,SOD、MDA的改變不明顯(P>0.05);Ⅲ組、Ⅳ組及Ⅴ組出現(xiàn)明顯的腎陽虛征象,SOD降低(P<0.01)、MDA升高(P<0.01或P<0.05)。見表1、表2。2.2腎陽虛癥狀改善在整個實驗中,Ⅲ組、Ⅳ組及Ⅴ組經(jīng)過造模后SOD降低(P<0.01)、MDA升高(P<0.01或P<0.05),見表1、表2。Ⅲ組經(jīng)靈龜八法按時開穴灸治后腎陽虛癥狀基本消失,SOD明顯升高(P<0.01)、MDA明顯降低(P<0.01),與造模前相比差異無顯著性意義(P>0.05);Ⅳ組經(jīng)“命門”灸后腎陽虛癥狀明顯改善,SOD升高(P<0.05),但與造模前相比仍有差異(P<0.05),MDA降低(P<0.05),與造模前相比差異無顯著性意義(P>0.05);而V組的腎陽虛癥狀、SOD、MDA均無明顯變化(P>0.05),與造模前相比差異有顯著性意義(P<0.05)。見表3、表4。3討論3.1靈龜八法對腎陽虛模型豬鼠血清sod、mda的影響衰老的原因是復雜的,自由基學說是現(xiàn)代衰老學說中最重要的一個。在自由基代謝中,SOD活力的高低間接應(yīng)映了機體清除氧自由基的能力,而MDA的高低間接應(yīng)映了機體細胞受自由基攻擊的嚴重程度。目前兩者已經(jīng)成為衡量機體的氧化和抗氧化平衡的重要的檢測指標,而抗氧化水平又是衡量機體衰老的一個關(guān)鍵因素。從中醫(yī)的角度來看,腎虛與衰老的關(guān)系最為密切,現(xiàn)代在對60歲以上的老年人的中醫(yī)四診調(diào)查中發(fā)現(xiàn)腎虛者占43.2%,可以認為衰老即是生理性腎虛,衰老是腎虛的一種特殊狀態(tài)。故本實驗以腎陽虛模型豚鼠為研究對象,以血清SOD、MDA為客觀指標。在實驗中,以靈龜八法按時開穴灸為施加因素,并與“命門”灸作對照觀察。用醋酸潑尼松龍注射液對健康豚鼠肌注進行造模,連續(xù)用藥12d,模型豚鼠即出現(xiàn)活動遲緩、神態(tài)萎靡、踡臥、弓背、畏寒肢冷、體毛枯疏起球、尿多、下利清谷等腎陽虛征象,且其血清SOD降低、MDA增高,與造模前相比差異具有顯著性意義。而在造模的同時進行靈龜八法按時開穴灸或“命門”灸,造模結(jié)束后則沒有出現(xiàn)腎陽虛癥狀,其血清SOD及MDA亦無顯著性變化(見表1、表2),說明靈龜八法按時開穴灸或“命門”灸可以預防醋酸潑尼松龍所致的腎陽虛發(fā)生。在對腎陽虛模型豚鼠的治療中,靈龜八法治療組經(jīng)靈龜八法按時開穴灸治后腎陽虛癥狀基本消失,SOD、MDA恢復到造模前水平;命門灸治療組經(jīng)“命門”灸后腎陽虛癥狀明顯改善,SOD升高,但與造模前相比仍有顯著性差異,MDA恢復到造模前水平;而腎陽虛模型對照組的腎陽虛癥狀、SOD、MDA均無明顯變化,與造模前相比差異有顯著性意義(見表3、表4)。說明靈龜八法按時開穴灸、“命門”灸均對腎陽虛模型豚鼠有顯著的的治療作用,靈龜八法按時開穴灸對腎陽虛模型豚鼠血清SOD的調(diào)整作用略優(yōu)于“命門”灸。命門為督脈穴,是補腎壯陽的要穴,命門灸可以防治腎陽虛是針灸界所公認的。而靈龜八法是按時針灸的一種重要方法,未見有靈龜八法按時開穴灸防治腎陽虛的報道,故以“命門”灸作為對照組,觀察靈龜八法對腎陽虛模型豚鼠的防治作用,結(jié)果顯示靈龜八法按時開穴灸、“命門”灸均可以有效調(diào)整腎陽虛模型豚鼠的自由基代謝,對腎陽虛模型豚鼠具有顯著的預防及治療作用,且靈龜八法按時開穴灸對腎陽虛模型豚鼠的治療作用略優(yōu)于“命門”灸。從實驗結(jié)果可以推斷,靈龜八法的抗衰老作用與調(diào)節(jié)自由基代謝密切相關(guān)。3.2靈龜八法選用穴位以養(yǎng)老血氣為中心的原因分析“靈龜”一詞來源于《易經(jīng)》的“頤卦”:“初九,舍爾靈龜”。其卦辭為:觀頤,自求口實?！断蟆吩?“頤,君子以慎言語,節(jié)飲食”;《爾雅·釋詁》曰:“頤,養(yǎng)也?！薄邦U卦”中所講的皆為養(yǎng)生延年之道,而“靈龜”即為神龜,民間有“千年王八萬年龜”之稱,龜為長壽之物,故“靈龜”隱含著“養(yǎng)生長壽”之意?？梢婌`龜八法從“頤卦”中取“靈龜”而命名,旨在于養(yǎng)生防病以達長壽之目的。靈龜八法所選用的穴位是奇經(jīng)八脈與十二經(jīng)脈之氣相交會的八穴,即八脈交會穴。八脈交會穴的重要性古代醫(yī)家早有論述。如:元代竇漢卿在《針經(jīng)指南》中明確提出“交經(jīng)八穴,針道之要也”,稱八穴為“起危篤患,隨手應(yīng)者,豈勝數(shù)哉……一一精捷,疾莫不瘳……如會王師,擒微奸,捕細盜,雖有不獲者,寡矣”。《醫(yī)學入門》亦闡述了八穴的重要性“周身三百六十六穴,統(tǒng)于六十六穴,六十六穴又統(tǒng)于八穴”,又曰:“八法者,奇經(jīng)八穴為要,乃十二經(jīng)穴之大會也”?？梢姲嗣}交會穴在人體中的重要地位。靈龜八法是時間醫(yī)學的范疇,是人體生物鐘調(diào)節(jié)的有效途徑和方法。中醫(yī)學認為,節(jié)律紊亂,陰陽失調(diào)