卷柏化學成分的研究

卷柏化學成分的研究

中藥卷柏是蕨類植物柏樹科的一種植物卷柏?；蛘呤莝.pularis戚繼光（hook.ethyl.）的薄葉跳蚤。具有破血逐瘀、活血止血、止咳、腹痛、閉經(jīng)、小便、止血、止血、尿血等癥狀。現(xiàn)代藥理及臨床研究表明:卷柏具有防癌、治癌、抗炎、抗病毒、鎮(zhèn)痛、降血壓、降血糖和增強人體免疫功能等作用。我國民間多用其降血壓及治療癌癥。作者對卷柏體積分數(shù)為75%的乙醇溶液提取物中的化學成分進行研究,共分離得到13個化合物,分別鑒定為3β-羥基-7α-甲氧基-24β-乙基-膽甾-5-烯(3β-hydroxy-7α-methoxy-24β-ethyl-cholest-5-ene,1)、膽甾醇(cholesterol,2)、β-谷甾醇(β-sitosterol,3)、海棠果酸(canophyllicacid,4)、白樺脂酸(betulinicacid,5)、5,4′-二羥基-7-甲氧基黃酮(6)、3-methoxychrysazin(7)、穗花杉雙黃酮(amentoflavone,8)、異柳杉雙黃酮(isocryptomerin,9)、香草酸(vanillicacid,10)、對甲氧基苯甲醛(p-anisaldehyde,11)、對羥基苯甲酸(p-hydroxybenzoicacid,12)和胡蘿卜苷(daucosterol,13)。其中化合物1-2、4-7、10、13為本屬植物中首次分離得到的化合物。1色譜材料、試劑ARX-300型核磁共振光譜儀(TMS內(nèi)標,瑞士Bruker公司)。薄層硅膠、柱色譜硅膠(青島海洋化工廠)、SephadexLH-20(美國GEHealthcare公司),ODS柱色譜材料(100μm,日本YMC公司),其他所用試劑、溶劑均為分析純。卷柏藥材購自遼寧省沈陽市同仁堂藥房,由沈陽藥科大學中藥學院孫啟時教授鑒定為卷柏[Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring]的干燥全草。2化合物3的合成卷柏干燥全草20kg,用體積分數(shù)為75%的乙醇溶液加熱回流提取3次,每次2h,提取液合并,濃縮得到浸膏。將浸膏混懸于適量水中,依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,各萃取3次,殘渣部分依次以氯仿、甲醇超聲提取。將石油醚萃取物19.5g、氯仿萃取物15.5g和氯仿超聲提取物221.5g合并進行硅膠柱色譜,石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng)梯度洗脫。其中石油醚-丙酮(體積比為100∶5)洗脫流份經(jīng)重結(jié)晶得到化合物3(2mg);石油醚-丙酮(體積比為100∶7)得到的流份,經(jīng)SephadexLH-20凝膠柱色譜、硅膠柱色譜、ODS柱色譜分離得到化合物2(5mg)、10(3mg)、5(2mg);石油醚-丙酮(體積比為100∶9)得到的流份,經(jīng)硅膠柱色譜得到化合物4(2g)、11(5mg);石油醚-丙酮(體積比為100∶15)和石油醚-丙酮(體積比為100∶25)洗脫的流份經(jīng)SephadexLH-20凝膠柱色譜、硅膠柱色譜和ODS開放柱色譜得到化合物7(8mg)、6(3mg)、1(4mg);石油醚-丙酮(體積比為100∶50)洗脫的流份經(jīng)硅膠柱色譜得到化合物13(8mg);乙酸乙酯萃取物54g和正丁醇萃取物142g合并進行硅膠柱色譜,氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng)梯度洗脫,其中氯仿-甲醇(體積比為100∶3)洗脫流份經(jīng)硅膠柱色譜,SephadexLH-20凝膠柱色譜得到化合物5(2mg)、9(4g)、8(7g)、12(5mg)。3化合物3的合成化合物1:白色粉末,體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈藍色,Liebermann-Burchard反應陽性,提示可能為甾體類成分。1H-NMR(300MHz,CDCl3)譜中δ5.74(1H,d,J=4.1Hz)為雙鍵上的烯氫質(zhì)子信號;δ3.36(3H,s)處給出甲氧基質(zhì)子信號;δ0.94(3H,d,J=6.4Hz)為與次甲基相連的甲基質(zhì)子信號;δ0.83(3H,d,J=6.5Hz)和δ0.88(3H,d,J=7.3Hz)為異丙基信號;δ0.85(3H,t)為與亞甲基相連的甲基質(zhì)子信號,δ:0.99(3H,s)、0.67(3H,s)為2個角甲基質(zhì)子信號。將氫譜數(shù)據(jù)與文獻中數(shù)據(jù)對照基本一致,又將該化合物與對照品共TLC,3種溶劑系統(tǒng)展開Rf均一致,故鑒定化合物1為3β-羥基-7α-甲氧基-24β-乙基-膽甾-5烯(3β-hydroxy-7α-methoxy-24β-ethyl-cholest-5-ene)?；衔?:白色針狀結(jié)晶(氯仿),體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈紫色,Liebermann-Burchard反應陽性,提示可能為甾體類成分。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:5.37(1H,t,J=3.0Hz,H-6)、3.54(1H,m,H-3)、1.03(3H,s,19-Me)、0.94(3H,d,J=1.8Hz,21-Me)、0.88(6H,d,J=6.7Hz,26,27-Me)、0.70(3H,s,18-Me)。13C-NMR(75MHz,CDCl3)δ:140.8(C-5)、121.7(C-6)、71.8(C-3)、56.8(C-14)、56.1(C-17)、50.1(C-9)、42.3(C-13)、42.3(C-4)、39.8(C-12)、39.5(C-24)、37.2(C-1)、36.5(C-10)、36.2(C-22)、35.8(C-20)、31.9(C-7)、31.9(C-8)、31.7(C-2)、28.2(C-25)、27.9(C-16)、24.3(C-15)、23.8(C-23)、22.8(C-27)、22.5(C-26)、21.1(C-11)、19.4(C-19)、18.7(C-21)、11.8(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻中膽甾醇數(shù)據(jù)對照基本一致,故鑒定化合物2為膽甾醇(cholesterol)?；衔?:無色針狀結(jié)晶(氯仿),體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯紫紅色,Liebermann-Burchard反應陽性,將該化合物與對照品β-谷甾醇共TLC,3種溶劑系統(tǒng)展開Rf均一致,故鑒定化合物3為β-谷甾醇(β-sitosterol)?；衔?:無色針狀結(jié)晶(氯仿-甲醇),體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈紫紅色,Liebermann-Burchard反應陽性,推測該化合物為甾體或三萜類成分。1H-NMR(300MHz,CDCl3)譜中δ3.73(1H,brs)為1個連氧碳上的質(zhì)子信號,δ1.16(3H,d,J=6.9Hz)為叔碳甲基質(zhì)子信號;δ:1.34、1.24、1.03、1.00、0.85、0.80(each3H,s,6×CH3)為季碳上甲基質(zhì)子信號;13C-NMR(75MHz,CDCl3)給出30個碳信號,其中δ182.3為羧基碳信號,δ72.7為連氧碳信號,結(jié)合1H-NMR數(shù)據(jù),推測其為木栓烷型三萜類化合物。以上數(shù)據(jù)與文獻中海棠果酸數(shù)據(jù)對照基本一致,將該化合物與海棠果酸對照品共TLC,3種溶劑系統(tǒng)展開Rf均一致,故鑒定化合物4為海棠果酸(canophyllicacid)。化合物5:無色針狀結(jié)晶(丙酮),體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈顯紫色。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:4.74(1H,brs,H-29a)、4.61(1H,brs,H-29b)、3.19(1H,m,H-3)、1.69(3H,s,30-CH3)、1.27(3H,s)、0.96(3H,s)、0.94(3H,s)、0.82(3H,s)、0.75(3H,s)。其氫譜數(shù)據(jù)與文獻中數(shù)據(jù)對照基本一致,將該化合物與白樺脂酸對照品共TLC,3種溶劑系統(tǒng)展開Rf一致,故鑒定化合物5為白樺脂酸(betulinicacid)。化合物6:黃色針狀結(jié)晶(甲醇),體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈黃色,鹽酸-鎂粉反應陽性,提示可能為黃酮類成分。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.97(1H,s,5-OH)、7.97(2H,d,J=8.7Hz,H-2′,6′)、6.94(2H,d,J=8.7Hz,H-3′,5′)、6.78(1H,d,J=2.1Hz,H-8)、6.38(1H,d,J=2.1Hz,H-6)、6.86(1H,s,H-3)、3.87(3H,s,7-OCH3)。將以上氫譜數(shù)據(jù)與文獻中數(shù)據(jù)對照基本一致,故鑒定化合物6為5,4′-二羥基-7-甲氧基黃酮。化合物7:橙紅色針狀結(jié)晶(氯仿),體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈橙黃色,NaOH溶液顯色為紫色,提示可能為羥基蒽醌類成分。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.06(2H,1,8-OH)、7.76(1H,d,J=8.1Hz,H-5)、7.73(1H,t,J=8.1Hz,H-6)、7.55(1H,brs,H-4)、7.45(1H,d,J=8.1Hz,H-7)、7.20(1H,brs,H-2)、3.57(3H,s,3-OCH3)。將以上數(shù)據(jù)與文獻中數(shù)據(jù)對照基本一致,故鑒定化合物7為3-methoxychrysazin。化合物8:淺黃色粉末,UV365nm下呈黃色熒光,254nm下呈暗斑,體積分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈淺黃色。1H-NMR(300MHz,acetone-d6)δ:8.14(1H,d,J=2.4Hz,H-2′)、8.05(1H,dd,J=2.4,8.7Hz,H-6′)、7.67(2H,d,J=9.0Hz,H-2?andH-6?)、7.25(1H,d,J=8.7Hz,H-5′)、6.84(2H,d,J=9.0Hz,H-3?andH-5?)、6.74(1H,s,H-3orH-3″)、6.68(1H,s,H-3″orH-3)、6.52(1H,d,J=2.1Hz,H-8)、6.45(1H,s,H-6″)、6.25(1H,d,J=2.1Hz,H-6)。將以上數(shù)據(jù)與文獻中穗花杉雙黃酮數(shù)據(jù)對照基本一致,故鑒定化合物8為穗花杉雙黃酮(amentoflavone)?；衔?:淺黃色粉末,UV365nm下呈黃色熒光,254nm下呈暗斑,質(zhì)量分數(shù)為10%的硫酸-乙醇溶液顯色呈淺黃色,碘熏顯黃色,難溶于氯仿、甲醇,熱溶于丙酮,易溶于DMSO。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:8.02(2H,d,J=8.7Hz,H-2′andH-6′)、8.02(2H,d,J=9.0Hz,H-2?andH-6?)、7.14(1H,s,H-8″)、7.04(2H,d,J=8.7Hz,H-3′andH-5′)、6.97(2H,d,J=9.0Hz,H-3?andH-5?)、6.95(1H,s,H-3orH-3″)、6.87(1H,s,H-3″orH-3)、6.49(1H,brs,H-8)、6.21(1H,brs,H-6)、3.90(3H,s,7″-OMe)。與文獻中中異柳杉雙黃酮(isocryptomerin)數(shù)據(jù)對照基本一致,故鑒定化合物9為異柳杉雙黃酮。化合物10:無色針狀結(jié)晶(甲醇),碘熏顯色,三氯化鐵-鐵氰化鉀反應陽性,溴甲酚綠反應陽性,示化合物10中含酚羥基和羧基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.52(1H,s,-COOH)、9.85(1H,s,4-OH)、7.45(1H,brd,J=8.7Hz,H-6)、7.42(1H,brs,H-2)、6.84(1H,d,J=8.7Hz,H-5)、3.80(3H,s,3-OCH3)推測其為香草酸。將該化合物與香草酸對照品共TLC,3種溶劑系統(tǒng)展開Rf均一致,故鑒定化合物10為香草酸(vanillicacid)?；衔?1:白色針狀結(jié)晶(氯仿),UV254nm下呈暗斑。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.32(1H,s,-CHO)、7.80(2H,d,J=6.7Hz,H-2,6)、6.83(2H,d,J=6.7Hz,H-3,5)、3.77(3H,s,-OCH3)。將以上的氫譜數(shù)據(jù)和文獻對照基本一致,故鑒定化合物11為對甲氧基苯甲醛(p-anisaldehyde)。化合物12:白色針狀結(jié)晶(丙酮),溴甲酚綠和三氯化鐵-鐵氰化鉀反應均為陽性,顯示其含有羧基和酚羥基。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.76(2H,d,J=8.8Hz)、6.93(2H,d,J=8.8Hz)為典型的AA′BB′系統(tǒng)的質(zhì)子