大黃4種炮制品提取物瀉下作用比較

大黃4種炮制品提取物瀉下作用比較

大黃藥歷史悠久。它是中醫(yī)臨床上最古老、最常用、最重要的中藥之一。通常由各種加工產(chǎn)品制成，以發(fā)揮他們的獨(dú)特治療作用。生大黃苦寒沉降,瀉下作用峻烈,具有攻積導(dǎo)滯、瀉火解毒的功能;大黃酒炙后其苦寒瀉下作用稍緩,并借酒升提之性,引藥上行,善清上焦血分熱毒;熟大黃瀉下作用緩和,減輕腹痛、惡心、嘔吐等不良反應(yīng),并能增強(qiáng)活血祛瘀之功;大黃炭瀉下作用極微,并有涼血化瘀止血作用。大黃化學(xué)成分復(fù)雜,主要含有蒽醌苷及苷元,蒽酮類成分,二苯乙烯苷及其苷元、以及鞣質(zhì)類等多種化學(xué)成分。大黃不同炮制品所具有的功效特點(diǎn),與其內(nèi)在物質(zhì)基礎(chǔ)的變化有著密切的關(guān)系。前期我們課題組以大黃炮制品粉末為對象,進(jìn)行了藥效學(xué)的比對分析研究,本文進(jìn)一步針對大黃的4種常用炮制品乙醇提取物的瀉下作用進(jìn)行藥效學(xué)及機(jī)制研究,為挖掘大黃的物質(zhì)基礎(chǔ)以及進(jìn)一步的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。1材料表面1.1實(shí)驗(yàn)動物及專利信息健康昆明種小鼠,雌雄各半,體重(20~22)g;健康SD大鼠,雄性,體重(180~200)g,均由中國人民解放軍醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號SCXK(軍)2007-004;均飼喂于中國中醫(yī)科學(xué)院基礎(chǔ)理論研究所實(shí)驗(yàn)動物中心。1.2篩選、制備大黃片掌葉大黃RheumpalmatumL.的根及根莖,按照《中國藥典》規(guī)定的炮制方法制備成生大黃、熟大黃及大黃炭飲片。大黃生、酒、熟、炭飲片粗粉各5kg,以75%乙醇15倍量滲漉提取,低溫減壓回收溶劑,得到各飲片提取物(由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所炮制室肖永慶研究員提供),臨用前用溫水配制成所需濃度。1.3蛋白分光光度計(jì)和測定電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司);小鼠代謝籠(意大利TECNIPLAST公司);3k15高速冷凍離心機(jī)(美國Sigma公司);unic7200型可見分光光度計(jì)(龍尼柯上海儀器有限公司);考馬斯亮藍(lán)蛋白測定試劑盒(南京建成生物工程研究所);Na+-K+-ATP酶測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)。2方法2.1小鼠糞便致瀉試驗(yàn)小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2d后,隨機(jī)分組,每組10只。瀉下試驗(yàn)當(dāng)日小鼠禁食4h,除空白組給予蒸餾水外,其余給藥組均給予相應(yīng)的藥物高劑量(5g·kg-1),低劑量(3g·kg-1),容積20mL·kg-1,然后將小鼠單個(gè)放入代謝籠中(底下鋪有濾紙)觀察致瀉作用。按糞便性狀分為:正常、軟便、溏便、水便。我們指定溏便和水便為瀉下的陽性反應(yīng),分別觀察5h內(nèi)各組瀉下只數(shù)、各小鼠首次瀉下時(shí)間、5h內(nèi)瀉下次數(shù)及總排便次數(shù)。為了進(jìn)一步比較生大黃和酒大黃提取物瀉下效力,增加了劑量后,比較生大黃與酒大黃瀉下的ED50,觀察各劑量下5h內(nèi)的瀉下只數(shù)。2.2炭末推進(jìn)率測定采用炭末推進(jìn)方法。小鼠禁食24h(不禁水),按劑量(高劑量5g·kg-1,低劑量3g·kg-1)給藥30min后,ig5%炭末與10%的阿拉伯凝膠(0.2mL/只)作指示劑,20min后脫頸椎處死,打開腹腔,取出自幽門至回盲部的小腸,不加牽引地平鋪于玻璃板上,測其全長和炭末前沿至幽門的距離,計(jì)算其與全長的百分比,即推進(jìn)率。炭末推進(jìn)率=炭末在腸內(nèi)推進(jìn)距離(cm)/小腸全長(cm)×100%2.3大鼠ig水平雄性大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)2d,隨機(jī)分成9組,每組10只。除空白組蒸餾水ig外,其余各實(shí)驗(yàn)組按劑量連續(xù)ig5d,ig體積20mL·kg-1。于第6天末次給藥30min后,大鼠斷頭處死打開腹腔,取全段結(jié)腸,矢狀剖開,生理鹽水沖洗干凈,濾紙吸干,用消毒鋁箔包好迅速放入液氮10min中,然后保存于-20℃冰箱中。按試劑盒操作方法,取0.2g結(jié)腸用于Na+-K+-ATP酶的測定。2.4統(tǒng)計(jì)方法結(jié)果以SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,數(shù)據(jù)以x珋±s表示,組與組之間的比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3結(jié)果3.1酒突出對生天麻的瀉作用只有生大黃和酒大黃提取物產(chǎn)生瀉下作用,而熟大黃和大黃炭提取物即使在生大黃提取物全致瀉量(2ED50)的20倍下也無致瀉作用。生大黃和酒大黃提取物兩者均在給藥后3h左右產(chǎn)生瀉下作用,但生大黃多在160min,而酒大黃從瀉下時(shí)間和排稀便次數(shù)上都稍有所延遲和減少(P<0.05)。從排便性狀上比較,生大黃和酒大黃瀉下時(shí)多為溏便(略成形或不成形呈糊狀),而熟大黃與大黃炭有稀便產(chǎn)生,但多為正常便,同時(shí)也有黑便產(chǎn)生(體積小,干癟,圓形)。見表1。3.2解酒天麻提取物結(jié)果單次ig小鼠生大黃提取物瀉下ED50為1.26g·kg-1,95%可信區(qū)間為0.96~1.58g·kg-1;酒大黃提取物瀉下ED50為1.43g·kg-1,95%可信區(qū)間為1.05~1.83g·kg-1;效價(jià)強(qiáng)度之比為1.14∶1,瀉下效應(yīng)大致相當(dāng)。熟大黃和大黃炭提取物瀉下效力較弱,沒有求出ED50。3.3對小鼠小鼠小鼠小鼠推進(jìn)率的影響生大黃提取物高劑量組,酒大黃提取物高、低劑量組以及大黃炭提取物低劑量組均能明顯提高小鼠的小腸推進(jìn)率,與空白組比較差異顯著(P<0.01,或P<0.05)。見表2。3.4物降低大鼠結(jié)腸na+-k+-atp酶活性的影響生大黃、酒大黃、熟大黃、大黃炭提取物高低劑量對大鼠結(jié)腸Na+-K+-ATP酶的活性都有顯著的抑制作用(P<0.01,或P<0.05)。見表3。4突出天麻與突出提取物的瀉下作用本研究采用首次瀉下時(shí)間、瀉下只數(shù)、5h內(nèi)瀉下次數(shù)、總排便次數(shù)、半數(shù)瀉下量、小腸推進(jìn)率及Na+-K+-ATP酶活力等不同指標(biāo)和參數(shù),分別對大黃各炮制品提取物瀉下環(huán)節(jié)的作用強(qiáng)度進(jìn)行了分析和比較?？傮w看,生大黃與酒大黃提取物瀉下作用明顯,兩者相比,后者的首次瀉下時(shí)間明顯延長,瀉下次數(shù)也減少,但從總排便次數(shù)、腸推進(jìn)率及Na+-K+-ATP酶活力來看,后者瀉下效力又強(qiáng)于前者;熟大黃和大黃炭提取物的瀉下作用較弱,且表現(xiàn)出抑制腸推進(jìn)的作用?，F(xiàn)代研究表明,大黃致瀉的主要成分為蒽醌類化合物,其中以番瀉苷的作用最強(qiáng),游離型蒽醌瀉下作用較弱。大黃經(jīng)不同工藝炮