顯微鑒定的基本操作技能課件

第三章顯微鑒定的基本操作技能顯微鑒定的基本操作技能第一節(jié)顯微標(biāo)本片的制作顯微鑒定的基本操作技能一、組織透化劑及應(yīng)用：1、組織透化劑：使細(xì)胞組織內(nèi)含物溶解除去或透明清晰、色素氧化退色、皺縮細(xì)胞壁膨脹透明的試劑。2、作用：（1）浸潤(rùn)作用。（2）溶解、分解或氧化作用

顯微鑒定的基本操作技能3、常見(jiàn)的透化劑：（1）水合氯醛的特點(diǎn)：①能滲入組織細(xì)胞內(nèi)，使干燥而皺縮的細(xì)胞發(fā)生膨脹；②能溶解多數(shù)組織內(nèi)含物；③對(duì)觀察草酸鈣結(jié)晶極為適宜；④不加熱可立刻觀察菊糖。（2）氫氧化鉀（氫氧化鈉）溶液的特點(diǎn)：（1）5%水溶液為強(qiáng)力透化劑；②能迅速溶解除去淀粉和蛋白質(zhì)，且能使細(xì)胞壁膨脹，作用持久；③對(duì)纖維素性細(xì)胞壁組織有解離作用；④透化后需將其洗去；⑤常用于解離組織標(biāo)本片。顯微鑒定的基本操作技能二、組織封藏劑及應(yīng)用：1、組織封藏劑：能保持原制片要求，利于組織和細(xì)胞形狀、顏色和內(nèi)含物觀察的溶液。2、作用：保持原制片要求。3、常見(jiàn)的封藏劑：（1）蒸餾水加酚、苯甲酸、樟腦等防霉。特點(diǎn)：①能保持原形、原色，對(duì)皺縮的細(xì)胞壁可恢復(fù)原狀態(tài)；②用蒸餾水裝片可觀察淀粉粒；③可使黏液溶解，并破壞糊粉粒。顯微鑒定的基本操作技能（2）稀甘油加入酚等防霉。特點(diǎn)：①保持2～3天；②用稀甘油裝片可觀察糊粉粒、淀粉粒、油滴、樹脂等；③可在透化后滴加，以防水合氯醛析出結(jié)晶。顯微鑒定的基本操作技能三、顯微標(biāo)本片：1、粉末標(biāo)本片：以粉末裝片，粉末有細(xì)度要求。2、表面標(biāo)本片：3、切片標(biāo)本片：中藥鑒定中最多的一類。4、解離組織標(biāo)本片。四、粉末標(biāo)本裝片：1、暫時(shí)性粉末標(biāo)本片：暫時(shí)性的，用完之后就洗掉的，載玻片、蓋玻片可重復(fù)使用。過(guò)程：（1）粉末加封藏劑、蓋蓋玻片、清潔、觀察。顯微鑒定的基本操作技能（2）粉末加水合氯醛溶液加熱透化三次，加稀甘油封藏、蓋蓋玻片、清潔、觀察。2、永久性粉末標(biāo)本片：做法較復(fù)雜，一般我們?cè)谕饷尜?gòu)買的就是永久性裝片，只要不損壞，可以一直看。顯微鑒定的基本操作技能五、表面標(biāo)本片：主要用于葉片、萼片、花瓣和雄蕊等表皮的表面特征觀察。1、整體封藏法：取材料剪取正反2小片，加水合氯醛加熱透化3次，加稀甘油封藏，蓋蓋玻片，清潔，觀察。2、表皮撕離法：適用于較厚的葉片、萼片、花瓣等。顯微鑒定的基本操作技能六、切片制片法：此類與粉末裝片用得最多，有橫切和縱切。1、機(jī)器切片法：生活中很少用，只有生產(chǎn)廠家大量生產(chǎn)時(shí)運(yùn)用。2、徒手切片法：實(shí)驗(yàn)室常用此法。（1）材料的預(yù)處理：清潔，（除去非藥用部分，選取合適切片部分。）切成適當(dāng)大小的塊，軟化。顯微鑒定的基本操作技能軟化方法：①在吸濕器中放置12～24h。②過(guò)硬，水浸或煮12h。③特硬，高壓鍋煮20min。如天麻。④過(guò)軟，浸入高濃度乙醇中20min。顯微鑒定的基本操作技能軟化注意事項(xiàng)：①需觀察糊粉粒、黏液、菊糖等水可溶性的物質(zhì)的，不可與水接觸。②需觀察揮發(fā)油、樹脂等，不能與高濃度乙醇或其他有機(jī)溶劑接觸。顯微鑒定的基本操作技能（2）材料的分割：切薄片。（3）材料的挾持：方便切片，常用胡蘿卜、馬鈴薯。（4）徒手切片刀：雙面和單面，雙面切較柔軟，單面切較硬，單面應(yīng)用較多。顯微鑒定的基本操作技能（5）持刀方法：右手持刀，刀身放平，刀口向切片者。（6）切片：材料和刀口蘸水，切掉不整齊一段，同左前外方向右內(nèi)方迅速拉切，臂用力。（7）取片：合乎需要的立即浸入水中。（8）透化：置載玻片中央加水合氯醛加熱透化。（9）封藏：加稀甘油封藏，蓋蓋玻片。（10）清潔觀察。顯微鑒定的基本操作技能七、解離組織標(biāo)本片：薄壁組織點(diǎn)大部分的用氫氧化鉀法；質(zhì)地堅(jiān)硬，木化組織較多用硝鉻酸法。1、氫氧化鉀法：供試樣置試管中加氫氧化鉀，加熱，傾去堿液，用水洗，放于載玻片上，用解剖針?biāo)洪_(kāi)，加稀甘油，蓋上蓋玻片。顯微鑒定的基本操作技能2、供試樣置于試管中，加硝鉻酸試液適量，放置，傾去酸液，加水洗，放于載玻片上，用解剖針?biāo)洪_(kāi)，加稀甘油，蓋上蓋玻片。顯微鑒定的基本操作技能第二節(jié)顯微測(cè)量法顯微測(cè)量：應(yīng)用顯微鏡測(cè)量尺在顯微鏡下測(cè)量微細(xì)物體的大小。顯微測(cè)量尺分為目鏡測(cè)微尺和載物臺(tái)測(cè)微尺。1、目鏡測(cè)量尺：安裝在目鏡內(nèi)的一個(gè)測(cè)量尺。2、載物臺(tái)測(cè)量尺：載玻片中央粘貼的測(cè)量尺。顯微鑒定的基本操作技能3、兩尺的關(guān)系及應(yīng)用：臺(tái)微尺是不變的，每小格10um；目微尺隨目鏡和物鏡的變化而變化。4、目微尺的標(biāo)定：（1）將臺(tái)微尺放置在載物臺(tái)上，目微尺放入目鏡鏡筒內(nèi)。（2）先低倍鏡，將目微尺刻度移至視野中央。（3）旋轉(zhuǎn)目鏡，使兩尺平行。顯微鑒定的基本操作技能（4）移動(dòng)臺(tái)微尺，使目微尺零端與臺(tái)微尺刻度的某刻度線相重合。（5）再找兩尺的第二條重合刻度線，數(shù)兩條重合線間兩尺的小格數(shù)，記錄。（6）計(jì)算出目微尺每一格在該物鏡條件下相當(dāng)?shù)拈L(zhǎng)度（um）標(biāo)定值=臺(tái)微尺小格數(shù)×10um/目微尺小格數(shù)。顯微鑒定的基本操作技能5、測(cè)量方法：（1）將需測(cè)量的載玻片放于載物臺(tái)上。（2）用目微尺測(cè)量目的物的小格數(shù)，記錄。（3）計(jì)算：實(shí)際長(zhǎng)度um=測(cè)得小格數(shù)×標(biāo)定值顯微鑒定的基本操作技能第三節(jié)顯微繪圖法顯微繪圖法的方法又分為平描和應(yīng)用顯微描繪器描繪。一、平描：只憑肉眼描繪1、根據(jù)觀察到的實(shí)物進(jìn)行繪圖。2、繪圖的要求：（1）要排列整齊、部位適中、比例恰當(dāng)。（2）要做到形狀、比例、倍數(shù)正確。（3）以點(diǎn)、線表示。顯微鑒定的基本操作技能（4）圖中各部分用阿拉伯?dāng)?shù)字表示，在圖下端注明標(biāo)號(hào)名稱。3、繪圖用具：16開(kāi)白紙或A4白紙。鉛筆。顯微鑒定的基本操作技能4、繪圖：圖的類型一般分粉末圖及組織圖。（1）粉末圖：繪出其粉末特征。（2）組織詳圖：較詳細(xì)，需要所有組織全部繪出，較難，一般不繪此種圖。（3）組織簡(jiǎn)圖：以線條表示，清晰，一目了然。實(shí)驗(yàn)室常繪出的圖，但不實(shí)用于出版、做研究等。二、顯微描繪器描繪：分放映裝置和描繪器。顯微鑒定的基本操作技能第四節(jié)常用顯微化學(xué)分析一、細(xì)胞壁性質(zhì)的鑒別：1、木質(zhì)化細(xì)胞壁：加間苯三酚試液，放置，加鹽酸，顯紅色或紫紅色。2、木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁：加蘇丹Ⅲ試液或紫草試液，微熱，顯橘紅色至紫色。3、纖維素細(xì)胞壁：（1）加氯化鋅碘試液濕潤(rùn)，放置，再加硫酸溶液，顯藍(lán)色或紫色。4、硅質(zhì)化細(xì)胞壁：顯微鑒定的基本操作技能二、細(xì)胞內(nèi)含物質(zhì)性質(zhì)的鑒別：1、淀粉粒：（1）加碘試液顯藍(lán)色或紫色。（2）用甘油醋酸試液裝片，末糊化的在顯微鏡下顯偏光。2、菊糖：加a-萘酚乙醇溶液，再加硫酸，顯紫紅色并溶解。3、脂肪油、揮發(fā)油、樹脂：（1）加蘇丹Ⅲ試液或紫草試液，均顯橘紅色到紫紅色。顯微鑒定的基本操作技能（2）加90%乙醇，脂肪油和樹脂不溶解，揮發(fā)油溶解。4、糊粉粒：（1）加碘試液，顯棕色或黃棕色。（2）加三硝基苯酚試液，顯黃色。（3）加硝酸汞試液，顯磚紅色。5、黏液：（1）加墨汁，黏液呈無(wú)色透明塊狀。（2）加釕紅試液，顯紅色。顯微鑒定的基本操作技能

6、草酸鈣結(jié)晶：（1）加稀鹽酸溶解而無(wú)氣泡產(chǎn)生。（2）加硫酸逐漸溶解，片刻后析出針狀硫酸鈣結(jié)晶。