地榆、白芷、白對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清il-1、il-10及腸組織中nf-b表達(dá)的影響

地榆、白芷、白對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清il-1、il-10及腸組織中nf-b表達(dá)的影響

潰瘍性胃炎（iu）是一種常見的非特異性腸炎，發(fā)病率和發(fā)病率日益增加。UC病變部位主要在結(jié)腸黏膜層。本病的病因與發(fā)病機(jī)制尚未完全明確,但研究表明發(fā)病機(jī)制與宿主遺傳易感性、機(jī)體免疫應(yīng)答及腸黏膜免疫識(shí)別失調(diào)密切相關(guān)。由于環(huán)境始發(fā)因素在一定程度上破壞了腸上皮屏障,可以導(dǎo)致體內(nèi)細(xì)胞因子水平異常,炎性細(xì)胞活化數(shù)量增加,進(jìn)而導(dǎo)致機(jī)體免疫系統(tǒng)的失調(diào),釋放更多的炎性因子,造成組織損傷。在細(xì)胞凋亡、腫瘤、炎癥及自身免疫性疾病的發(fā)生過程中,核因子kB(NF-kB)作為調(diào)節(jié)基因表達(dá)的核轉(zhuǎn)錄因子參與了上述過程。有學(xué)者提出,NF-kB活化可以促進(jìn)TNF-α、IL-1β等多種炎性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)錄過程,這種活化作用會(huì)在一定程度上影響UC的發(fā)生發(fā)展。本研究旨在探討地榆、白芷、白蘞對(duì)慢性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織中NF-KB及血清中IL-1β、IL-10含量的影響。1材料和方法1.1體質(zhì)量,飼養(yǎng)成年雄性SD大鼠(購自江蘇省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)48只,體質(zhì)量(250±50)g,常規(guī)飼養(yǎng),自由飲水、飲食。隨機(jī)分為正常組、模型組、地榆組、白芷組、白蘞組及巴柳氮鈉組,每組各8只。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1大鼠麻醉前處理除正常組外,其余各組均參考文獻(xiàn)方法建立結(jié)腸炎大鼠模型:d1,禁食24h;d2,4%的戊巴比妥鈉1mL/100g腹腔注射麻醉,灌胃針插入大鼠肛門8cm處注入三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液;d4,正常組及模型組給予生理鹽水2mL灌胃,地榆組、白芷組、白蘞組分別予以1g/mL的地榆、白芷、白蘞(4g/kg)灌胃;巴柳氮鈉組給予巴柳氮鈉水溶液(0.16g/kg)灌胃;d5～d10每日給藥1次。1.2.2離心血樣,取血液液相d15,將各組大鼠麻醉后,打開胸腔暴露心臟,剪開右心耳,一次性離心管取血5mL左右,1500r/min離心15min后取上清液,-20℃冰箱中保存。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)血清中IL-1β、IL-10濃度。具體方法及操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。1.2.3結(jié)腸典型損傷情況采血后打開大鼠腹腔,取遠(yuǎn)端結(jié)腸10cm左右,沿縱軸剪開腸管并用生理鹽水沖洗干凈,根據(jù)參考文獻(xiàn)所述標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)腸大體形態(tài)損傷評(píng)分:0分,無損傷;1分,黏膜充血;2分,潰瘍面積≤受損面積25%;3分,潰瘍面積為受損面積25%～50%;4分,潰瘍面積≥損面積50%。1.2.4蘇木精-伊紅染色h取大鼠病變結(jié)腸標(biāo)本經(jīng)4%多聚甲醛固定(4℃)4h以上,石蠟包埋切片,片厚3～5μm,進(jìn)行HE染色,光鏡下觀察。1.2.5蛋白免疫印跡法檢測(cè)鮮腸組織蛋白表達(dá)各組大鼠打開腹腔后,稱取50mg新鮮腸組織放入勻漿器中,冰浴勻漿后,12000r/min離心10min,取上清液,蛋白免疫印跡法測(cè)定蛋白含量。1.3納片、if-基于nf-基于pmb的藥物地榆、白芷、白蘞為自燕興中藥飲片有限公司產(chǎn)品。巴柳氮鈉納片為山西安特生物制藥股份有限公司產(chǎn)品。I抗NF-kBp65為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品;IL-1β、IL-10ELISA試劑盒由北京中山金橋試劑有限公司進(jìn)口分裝。2結(jié)果2.1各組大鼠腸道粘連、腸道水腫及體質(zhì)量的比較造模后,大鼠均出現(xiàn)食量下降、稀便等消化系癥狀以及毛發(fā)無光澤、慵懶嗜睡、體重下降等改變,提示造模成功。地榆組、白芷組、白蘞組及巴柳氮鈉組經(jīng)治療后上述表現(xiàn)明顯好轉(zhuǎn)。打開腹腔后,可見正常組大鼠結(jié)腸黏膜組織形態(tài)基本正常,無明顯潰瘍。模型組大鼠可見腸道粘連,局部充血、糜爛、潰瘍等潰瘍性結(jié)腸炎表現(xiàn)。地榆、巴柳氮鈉組大鼠結(jié)腸病變明顯減輕,僅局部見輕度充血水腫,未見明顯潰瘍。白芷組大鼠腸壁無明顯增厚,皺褶較正常,但少數(shù)大鼠腸黏膜可見明顯充血、水腫,其中1只大鼠結(jié)腸可見明顯潰瘍。白蘞組部分大鼠腸壁輕度增厚、皺褶部分消失,有1只大鼠可見腸組織小面積壞死,腸黏膜充血、水腫,潰瘍面積較模型組有所縮小。由表1可見,與正常組比較,其余各組大鼠的體質(zhì)量增加比均有不同程度的下降;經(jīng)過藥物治療后,地榆組、白蘞組及巴柳氮鈉組大鼠體質(zhì)量明顯增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。大體形態(tài)評(píng)分顯示,與模型組比較,地榆組、白芷組、白蘞組及巴柳氮鈉組的病變程度明顯減輕,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.2各組大鼠腸黏膜組織的變化經(jīng)HE染色,光鏡下可見正常組大鼠結(jié)腸壁各層結(jié)構(gòu)清晰,無水腫、糜爛及潰瘍形成。模型組大鼠結(jié)腸黏膜組織可見黏膜層、黏膜下層廣泛潰瘍形成,大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。經(jīng)藥物干預(yù)后,各治療組大鼠結(jié)腸黏膜組織均有不同程度的修復(fù)。地榆組、巴柳氮鈉組大鼠腸黏膜組織較模型組病變明顯減輕,潰瘍愈合,隱窩膿腫消失,黏膜表現(xiàn)為輕度慢性炎癥,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。白芷組大鼠腸黏膜組織主要表現(xiàn)為中度慢性炎癥,部分黏膜及黏膜下層仍有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),壞死的黏膜上皮基本修復(fù),腺體杯狀細(xì)胞增多,隱窩膿腫消失,1/10只仍有節(jié)段性潰瘍存在,潰瘍處黏膜上皮缺損,肉芽組織增生明顯,較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),肌層水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn),漿膜層仍可見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。白蘞組少數(shù)大鼠結(jié)腸黏膜存在部分缺失,腺體部分不完整,杯狀細(xì)胞中度變形,黏膜及黏膜下層有較多炎性細(xì)胞浸潤(rùn),有1只大鼠腸組織仍可見明顯潰瘍,潰瘍處黏膜上皮缺損,肉芽組織增生明顯,有較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)(圖1)。2.3各組大鼠血清中il-10含量比較與模型組比較,地榆組、白芷組、巴柳氮鈉組大鼠血清中IL-1β水平明顯降低(P<0.01);地榆組、白芷組、白蘞組、巴柳氮鈉氮組大鼠血清中IL-10含量顯著升高(P<0.01)。與正常對(duì)照組相比,地榆組、白芷組、巴柳鈉組大鼠血清中IL-10水平均明顯升高(P<0.01)(表2)。2.4蛋白表達(dá)水平模型組與其余各組相比,腸組織中NF-κBp65蛋白表達(dá)水平顯著升高(P<0.01)。與白蘞組相比,地榆組、巴柳氮鈉組、白芷組下調(diào)NF-κBp65蛋白表達(dá)更明顯(P<0.01),見表3,圖2。3不同途徑分離人體內(nèi)il-1和nf-東南角,表達(dá)對(duì)資金、局部的作用潰瘍性結(jié)腸炎是一種局限于結(jié)腸黏膜及黏膜下層的炎癥過程。病變部位多位于乙狀結(jié)腸和直腸,也可延伸至降結(jié)腸,甚至整個(gè)結(jié)腸。組織病理過程漫長(zhǎng),常反復(fù)發(fā)作,近幾年為基礎(chǔ)和臨床研究的熱點(diǎn)。潰瘍性結(jié)腸炎的病因至今仍不明確。雖有多種學(xué)說,但目前還沒有肯定的結(jié)論。研究發(fā)現(xiàn),UC的一個(gè)重要發(fā)病機(jī)制源于各種細(xì)胞因子之間的相互作用,這種錯(cuò)綜復(fù)雜的細(xì)胞因子間的網(wǎng)絡(luò)作用能夠在一定程度上促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展,導(dǎo)致黏膜損傷。根據(jù)細(xì)胞因子在炎癥發(fā)生中的作用效果,可以分為促炎細(xì)胞因子和抑炎細(xì)胞因子,這兩者間的平衡失調(diào)也被認(rèn)為是UC發(fā)病的重要機(jī)制之一。IL-1β能刺激其他細(xì)胞因子和炎性細(xì)胞產(chǎn)生大量的炎癥遞質(zhì),還可以在一定程度上誘發(fā)抗原呈遞細(xì)胞(APC)表面免疫分子表達(dá)增加,還能促進(jìn)血管內(nèi)皮-白細(xì)胞黏附分子的表達(dá),趨化炎性細(xì)胞進(jìn)入腸道病變部位,引起一系列腸道炎癥反應(yīng)和組織破壞。IL-10可以在mRNA水平上抑制激活的免疫細(xì)胞,下調(diào)活化的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)錄分泌相關(guān)細(xì)胞因子。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在模型組中IL-1β的表達(dá)顯著高于其他各組,而抑炎性細(xì)胞因子IL-10表達(dá)水平在模型組中明顯降低。NF-KB作為調(diào)節(jié)細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵因子,在機(jī)體免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等方面發(fā)揮著重要作用。筆者在探討潰瘍性結(jié)腸炎大鼠血清中IL-1β、IL-10水平、腸組織中NE-KB蛋白表達(dá)情況