甘薯中 13 種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測定-征求意見稿

1T/GDNBXXXX—2023甘薯中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量的測定本文件規(guī)定了甘薯及其制品中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)含量測定原理、試劑和材料、儀器設(shè)備、樣品制備、提取方法、檢測條件、精密度、檢出限和定量限。本文件適用于甘薯、甘薯粉、甘薯干制品中13種類胡蘿卜素單體物質(zhì)（紫黃質(zhì)，新黃質(zhì)，環(huán)氧玉米黃質(zhì)，葉黃素，玉米黃質(zhì)，α-隱黃質(zhì)，ε-胡蘿卜素，β-隱黃質(zhì)，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素，δ-胡蘿卜素，γ-胡蘿卜素，番茄紅素）含量檢測。2規(guī)范性引用文件本文沒有規(guī)范性引用文件。3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理試樣冷凍干燥打粉之后，用乙醇-丙酮-正己烷混合液提取其中的13種類胡蘿卜素，干燥后用甲基叔丁基醚溶液復(fù)溶，超高效液相色譜法測定，外標(biāo)法定量。5試劑和材料(正文標(biāo)題)5.1試劑5.1.1甲醇（CH4O）:色譜純。5.1.2乙腈（C2H3N）:色譜純。5.1.3甲基叔丁基醚[CH3OC(CH3)3,MTBE]:色譜純。5.1.42,6-二叔丁基對甲酚（C15H24O，BHT）:色譜純。5.1.5甲酸（CH2O2）:色譜純。5.1.6無水乙醇（C2H5OH）:分析純。5.1.7丙酮（C3H6O）:分析純5.1.8正己烷（C6H14）:色譜純。5.2標(biāo)準(zhǔn)品5.2.1α-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：7488-99-5）：純度≥97%。5.2.2β-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：7235-40-7）：純度≥95%。5.2.3γ-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：472-93-5）：純度≥96%。5.2.4δ-胡蘿卜素（C40H56，CAS號：472-92-4）：純度≥95%。5.2.5β-隱黃質(zhì)（C40H56O，CAS號：472-70-8）：純度≥98%。5.2.6α-隱黃質(zhì)（C40H56O，CAS號：24480-38-4）：純度≥98%。5.2.7葉黃素（C40H56O2，CAS號：172-40-2）：純度≥96%。5.2.8番茄紅素（C40H56，CAS號：502-65-8）：純度≥95%。5.2.9新黃質(zhì)（C40H56O4，CAS號：14660-91-4）：純度≥97%。5.2.10紫黃質(zhì)（C40H56O4，CAS號：126-29-4）：純度≥95%。2T/GDNBXXXX—20235.2.11玉米黃質(zhì)（C40H56O2，CAS號：144-68-3）：純度≥97%。5.2.12ε-胡蘿卜素（C40H56O4，CAS號：472-89-9）：純度≥98%。5.2.13環(huán)氧玉米黃質(zhì)（C40H56O3，CAS號：640-03-9）：純度≥95%。5.3儀器與設(shè)備5.3.1超高效液相色譜：配有DAD二極管陣列檢測器。5.3.2旋渦混合器。5.3.3離心機。5.3.4電子天平：感量0.00001g。5.3.5冷凍干燥機。5.3.6超聲清洗儀。5.3.7粉碎機。5.3.8氮吹儀。5.4材料微孔濾膜：0.22μm，有機系。6分析步驟6.1通用要求所有分析操作均應(yīng)室內(nèi)避光進行。6.2樣品制備甘薯和甘薯干切碎，液氮速凍后冷凍干燥，并用粉碎機打粉，樣品儲存在-20℃暗光環(huán)境。甘薯粉試樣無需處理。6.3試劑配制6.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（200μg/mL）分別準(zhǔn)確稱取類胡蘿卜素單體標(biāo)準(zhǔn)品2g（精確至0.01mg），加入1mgBHT，轉(zhuǎn)移至10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚稀釋并定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為200μg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，置于-20℃避光保存，保存期3個月。6.3.2標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100μg/mL）準(zhǔn)確移取上述標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.1）5.0mL于10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚定容至刻度，搖勻，配制成質(zhì)量濃度為100μg/mL標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，4℃避光保存，保存期1周。6.3.3標(biāo)準(zhǔn)系列溶液分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（1.2）0.00mL，0.01mL，0.05mL，0.10mL，0.50mL，1.00mL于10mL棕色容量瓶中，用甲基叔丁基醚稀釋并定容配成濃度范圍0.0μg/mL~10.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。臨用現(xiàn)配。6.3.4正己烷-丙酮-乙醇提取液分別準(zhǔn)確移取正己烷10.0mL、丙酮10.0mL、乙醇10.0mL于棕色磨口瓶中，混合均勻獲得體積比為1：1：1的正己烷-丙酮-乙醇提取液。6.4試樣提取稱取0.5g已充分混勻的試樣粉末至15mL離心管中，加入5mL含0.01%BHT(gmL-1)的乙醇-丙酮-正己烷提取液（6.3.4）進行提取，并于室溫下充分震蕩混勻。室溫下漩渦振蕩2min，于4℃條件下，2500g3T/GDNBXXXX—2023離心5min，然后將上清液轉(zhuǎn)移至新的15mL離心管中；重復(fù)以上提取步驟2次，將離心后上清液合并；用氮吹儀氮吹至干，得到類胡蘿卜素。再用1mL含有0.01%BHT(gmL-1)的甲基叔丁基醚溶液復(fù)溶，超聲震蕩10min使其完全溶解，用0.22μm濾膜過濾后，保存在棕色進樣瓶中，用于液相色譜分析。6.5色譜條件超高效液相色譜（5.3.1）色譜條件如下：a)色譜柱：YMCCarotenoidC30色譜柱，柱長250mm，內(nèi)徑2mm，粒徑3μm；b)流動相A相：甲醇和乙腈(1∶3)，加入0.01%BHT)(gmL-1)和0.1%甲酸，流動相B相為甲基叔丁基醚加入0.01%BHT(gmL-1)，洗脫梯度按表1進行；c)流速為0.8mLmin-1；d)檢測波長為450nm；e)柱溫為23℃;f)進樣體積為1μL。表1梯度洗脫條件06.6標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將13種類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（6.3.3）注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，以類胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制不同類胡蘿卜素的標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.7試樣測定將待測液（6.4）注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測液中13種類胡蘿卜素單體濃度。以甘薯塊根為例的樣品高效液相色譜圖見附錄B。7數(shù)據(jù)處理試樣中13種類胡蘿卜素單體的含量Xi的計算按式（1）進行：xi=式中:????????(1)4T/GDNBXXXX—2023Xi——為甘薯塊根中類胡蘿卜素的含量，單位為微克每克(μg/g）;C——為通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算的到的類胡蘿卜素含量，單位為微克每毫升(μg/mLV——為塊根類胡蘿卜素提取時復(fù)溶液的體積；M——為塊根類胡蘿卜素提取時所使用到的樣品重量。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的三次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示。8精密度在重復(fù)性條件下獲得的三次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。9檢出限和定量限當(dāng)取樣量為0.5g、復(fù)溶體積為1mL，13種類胡蘿卜素單體的檢出限、定量限和加標(biāo)回收率如表2所示：表213種類胡蘿卜素單體檢出限、定量限和加標(biāo)回收率檢出限(μgmL-)5T/GDNBXXXX—2023（規(guī)范性）標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的校正A.1試驗步驟使用前，應(yīng)對葉黃素、玉米黃質(zhì)、α-隱黃質(zhì)、β-隱黃質(zhì)、α-胡蘿卜素、β-胡蘿卜素、番茄紅素的標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度進行校正，具體操作如下：分別取葉黃素、β-隱黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl,注入含10ml乙醇的1cm比色皿中。以乙醇為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定三次，取平均值。取玉米黃質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl，注入含10ml甲醇的1cm比色皿中。以甲醇為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定3次，取平均值。分別取α-隱黃質(zhì)，α-胡蘿卜素，β-胡蘿卜素和番茄紅素標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（濃度約為200μg/ml）50μl，注入含10ml正己烷的1cm比色皿中。以正己烷為空白，按表A.1中檢測波長測定其吸光度值，平行測定三次，取平均值。表A.1各類胡蘿卜素測定波長及比吸光系數(shù)EA.2結(jié)果計算按（A.1）計算標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度：X=×式中：XAE10.050.05——標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度，單位為微克每毫升(μg/ml——標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光值；——各物質(zhì)的比吸光系數(shù)（見表A.1）；——測定過程中稀釋倍數(shù)的換算系數(shù)。????????(A.1)6T/GDNBXXXX—2023（資料性）甘薯塊根中13種類胡蘿卜素單體