常見致病菌檢驗-葡萄球菌檢驗

病原學特性簡介金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是人類的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的別稱，是革蘭氏陽性菌，可引起許多嚴重感染。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37°C，最適生長pH7.4，干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑0.5~1.0mm。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物、青霉素、紅霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但易產(chǎn)生耐藥性，對堿性染料敏感。流行病學美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生難題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒，占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則占到45%。中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時有發(fā)生。2002年，澳大利亞一次公眾活動因前一天準備的食物貯存不當導致250人出現(xiàn)惡心、嘔吐、胃痙攣的癥狀，其中100多人因為脫水需要進醫(yī)院治療。2001年4月12日，無錫市錫山區(qū)所轄小學、幼兒園因課間加餐飲用袋裝牛奶飲料導致食物中毒事件。2000年6月底到7月中，日本有14555人被感染，感染源來自日本當時最大的牛奶生產(chǎn)商雪印乳業(yè)。1997年，美國佛羅里達31人食用被污染的火腿片被感染，癥狀持續(xù)了大約24小時。金黃色葡萄球菌流行病一般多見于春夏季。中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位，常成為污染源。金黃色葡萄球菌可引起局部化膿感染、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌為侵襲性細菌，能產(chǎn)生毒素，對腸道破壞性大，金黃色葡萄球菌腸炎起病急，中毒癥狀嚴重，主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹瀉。金黃色葡萄球菌流行病一般多見于春夏季。中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位，常成為污染源。金黃色葡萄球菌可引起局部化膿感染、肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌為侵襲性細菌，能產(chǎn)生毒素，對腸道破壞性大，金黃色葡萄球菌腸炎起病急，中毒癥狀嚴重，主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹瀉。d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產(chǎn)生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質(zhì)性腸毒素，分為A、B、C1、C2、C3、D、E及F八種血清型。腸毒素可耐受100°C煮沸30分鐘而不被破壞。它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產(chǎn)生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。檢測與診斷標本采集采自不同感染部位的各種標本，包括血液、腦脊液、穿刺液；痰液、膿液、創(chuàng)傷分泌物、尿液、糞便和嘔吐物等。直接涂片鏡檢

直接涂片檢查在正常情況下呈無菌狀態(tài)的體液標本如血液、腦脊液、穿刺液等，若有檢出革蘭氏陽性，顯微鏡下呈葡萄狀排列、無芽胞、莢膜，直徑0.5-1μm的球菌。即具有重要的臨床價值。分離培養(yǎng)

可以選用普通營養(yǎng)瓊脂平板、血平板和高鹽甘露醇平板，血平板用葡萄糖肉湯增菌培養(yǎng)基。該菌在普通肉湯中呈均勻迅速混濁生長；若接種于瓊脂平板上35℃過夜后可形成直徑約2~3mm的厚菌落、濕潤有光澤、呈金黃色不透明圓形凸起。若接種于血平板，菌落周圍可形成明顯的透明的β—溶血環(huán)。在高甘露醇平板上金黃色葡萄球菌生成淡橙黃色菌落，以此可與其他凝固酶陰性的葡萄球菌相鑒別。鑒別實驗一、血漿凝固酶試驗血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌所產(chǎn)生的，與其致病力有關(guān)的一種侵襲性酶，其作用是使血漿中的纖維蛋白在菌體表面沉積和凝固以阻礙吞噬細胞的吞噬。血漿凝固酶分為結(jié)合型和游離型。前者結(jié)合在細菌的細胞壁上，能直接作用于血漿中的纖維蛋白原，使之轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，環(huán)繞菌體而形成凝塊。而游離型血漿凝固酶則在產(chǎn)生后被分泌到菌體外，不能直接作用于纖維蛋白原，但可以激活血漿凝血酶原，使之轉(zhuǎn)化成凝血酶，后者再作用于纖維蛋白原使其轉(zhuǎn)化為纖維蛋白。具體的測量方法也因此分為玻片法和試管法兩種。1、玻片法：將待試菌落乳化于玻片上的鹽水中，經(jīng)10~20S證實無自凝后，用接種環(huán)取人或兔血漿一環(huán)，與乳化菌液混合，出現(xiàn)凝集者為陽性，另設(shè)生理鹽水為陰性對照。2、試管法：吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養(yǎng)物充分混勻，置37℃培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試管傾斜或倒置時，內(nèi)容物不流動，判為陽性。二、耐熱核酸酶試驗將24小時肉湯培養(yǎng)物沸水浴處理15min，用接種環(huán)劃線刺種于甲苯胺蘭-DNA平板，35℃培養(yǎng)24小時，在刺種線周圍出現(xiàn)淡粉色者為陽性。本試驗金黃色葡萄球菌為陽性。三、甘露醇發(fā)酵實驗金黃色葡萄球菌可發(fā)酵甘露醇。四、Staphaurex膠乳凝集實驗是鑒定金黃色葡萄球菌的一種快速、簡便的商品化直接凝集試驗。其基本原理是在紙片上滴加包被有纖維蛋白原和IgG抗體的聚苯乙烯膠乳，然后用接種環(huán)挑取待鑒定菌株的新鮮培養(yǎng)物加入混勻，若出現(xiàn)凝集塊現(xiàn)象即為陽性。生化鑒定

如上述，注意與其他凝固酶陽性的葡萄球菌的鑒別要點：PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺試驗陰性；VP試驗陽性；鳥氨酸脫羧酶試驗陰性。免疫學方法

用酶聯(lián)免疫吸附試驗和對流免疫電泳方法可檢測金葡菌的磷壁酸抗體。分子生物學方法

包括PFGE脈沖場凝膠電泳以及酶切圖譜分析等。定量檢測方法目前關(guān)于食品中金黃色葡萄球菌的定量檢測方法主要有Baird-Parker平板計數(shù)法、顯色培養(yǎng)基計數(shù)法、PetrifilmTM測試片計數(shù)法、MPN計數(shù)法、酶聯(lián)免疫吸附法、反相被動乳膠凝集法、放射免疫測量法、反相血凝實驗、纖維玻片凝膠雙擴散法、聚合酶鏈式反應(yīng)技術(shù)等。顯色培養(yǎng)基A計數(shù)法：稀釋好的菌液0.2mL涂布接種培養(yǎng)基平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h，按說明書判讀，可疑菌落做補充實驗（血漿凝固酶試驗，目標菌落血漿凝固酶試驗為陽性）。顯色培養(yǎng)基B計數(shù)法：稀釋好的菌液0.2mL涂布接種培養(yǎng)基平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h，按說明書判讀，可疑菌落做補充實驗（滴加1mol/L鹽酸，目標菌落有透明圈）。PetrifilmTM測試片計數(shù)法：稀釋好的菌液1mL接入測試片，靜置測試片1min，36℃±1℃培養(yǎng)24h，按說明書判讀，必要時對可疑菌落用確認反應(yīng)片做補充實驗。金黃色葡萄球菌在顯色培養(yǎng)基A上的生長率最高，PetrifilmTM測試片的選擇性最強，4種計數(shù)方法的檢出限相當，檢出結(jié)果與實際含菌量無顯著差異。結(jié)論：選擇顯色培養(yǎng)基作為日常檢驗的輔助手段可大大提高檢測靈敏度、縮短檢驗周期、節(jié)約檢驗成本，值得在日常檢驗中推廣應(yīng)用。檢驗方法金黃色葡萄球菌檢驗概況葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個菌種，從人體上可檢出12個種。葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動物的粘膜相關(guān)系，有些種是人及動物的條件致病菌。金黃色葡萄球菌對人類有致病性，通常被稱為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱為化膿性球菌。金黃色葡萄球菌的生物學特性形態(tài)與染色：金黃色葡萄球菌的典型形態(tài)呈球形，直徑0.4～1.2μm，大小不一，平均直徑約為0.8μm。革蘭氏染色陽性，呈葡萄串狀排列。無鞭毛、無芽胞。在陳舊培養(yǎng)物中，衰老的菌體常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。培養(yǎng)特性：易培養(yǎng)，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長良好。需氧或兼性厭氧。最適生長溫度37℃，最適生長pH7.4。耐鹽性強，在含10～15%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長，可用于篩選菌種。在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落。可產(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內(nèi)，不滲至培養(yǎng)中。在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為β型溶血。可產(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、VP試驗多為陽性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽性。金黃色葡萄球菌的酶金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生血漿凝固酶和耐熱DNA酶。這兩種酶均與金黃色葡萄球菌的致病性有關(guān)。血漿凝固酶：與金黃色葡萄球菌的致病力密切相關(guān)。一般認為，血漿凝固陽性的金黃色葡萄球菌菌株有致病力。否則為無力的菌株。血漿凝固酶對熱穩(wěn)定，能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大部分活性。耐熱DNA酶作為除血漿凝固酶外鑒定金黃色葡萄球菌致病力的指標之一。該酶的最適pH為9.0。金黃色葡萄球菌腸毒素：是金黃色葡萄球菌一種重要的致病物質(zhì)。本菌引起的食物中毒是因為食品污染了金黃葡萄球菌后，由細菌產(chǎn)生大量腸毒素而導致的。近年報導表明，50%以上的金黃色葡萄球菌菌株在實驗室條件下可產(chǎn)生腸毒素，并且1個菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素。腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，由單個無分枝的肽鏈組成。分子量約為3000左右。易溶于水，難溶于有機溶劑。金黃色葡萄球菌的腸毒素耐熱，經(jīng)100℃煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。食物中的腸毒素耐熱性更強，一般烹調(diào)溫度不能將其破壞。218~248℃的油中需30min才能被破壞。可引起急性胃腸炎。根據(jù)腸毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E5個型。A型腸毒素引起的食物中毒較多，約占50%左右。其他依次為D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。A型腸毒素毒力較強，攝入1μg即可引起中毒；B型毒力較弱攝入25μg，才引起中毒。一般認為引起人中毒的最小劑量是1.0~7.2μg/kg。金黃色葡萄球菌的檢測程序檢樣25g(mL)＋225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯36±1℃Baird-Parker平板，血平板涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告血平板18~24h，Baird-Parker平板18~24h或45~48h。BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面36±1℃18~24h增菌培養(yǎng)基7.5%氯化鈉肉湯：為葡萄球菌選擇性增菌培養(yǎng)基，因金黃色葡萄球有耐受高鹽的特性，因而能在此增菌液中生長，除某些嗜高鹽的海洋菌外，大多數(shù)細菌都被增菌液中的高鹽所抑制。胰酪胨大豆肉湯：含氯化鈉達10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氫二鉀和葡萄糖促進葡萄球菌的生長。樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25g樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。增菌與分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)：吸取5mL上述樣品勻液，接種于50mL7.5%氯化鈉肉湯或10%胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長，污染嚴重時在10%胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長。將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h或45h～48h。分離培養(yǎng)基Baird-Parker瓊脂：培養(yǎng)基中含有卵黃亞碲酸鉀，能抑制大多數(shù)細菌的繁殖，并能促進金黃色葡萄球菌的生長使其產(chǎn)生黑色和暈圈。培養(yǎng)基中的丙酮酸鈉和甘氨酸也能促進金黃色葡萄球菌的生長。金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤，直徑約2~3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶而可見無混濁帶和透明圈的非典型菌落。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。分離培養(yǎng)基血瓊脂：是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有5%的脫纖維血(羊血或兔血)。用于觀察金黃色葡萄球菌的溶血現(xiàn)象。金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上呈β溶血。金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的β溶血環(huán)。革蘭氏染色血漿凝固酶試驗試驗原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w蛋白，附著于細菌表面，產(chǎn)生凝固。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細胞壁結(jié)合的凝固酶，為結(jié)合凝固酶；另一種是菌細胞釋放于培養(yǎng)基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。血漿凝固酶試驗挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽性結(jié)果。同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。結(jié)果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復實驗。

結(jié)果報告如血漿凝固酶試驗陽性，可判定為金黃色葡萄球菌。報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌檢驗概況葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個菌種，從人體上可檢出12個種。葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血動物的粘膜相關(guān)系，有些種是人及動物的條件致病菌。金黃色葡萄球菌對人類有致病性，通常被稱為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱為化膿性球菌。金黃色葡萄球菌的生物學特性形態(tài)與染色：金黃色葡萄球菌的典型形態(tài)呈球形，直徑0.4～1.2μm，大小不一，平均直徑約為0.8μm。革蘭氏染色陽性，呈葡萄串狀排列。無鞭毛、無芽胞。在陳舊培養(yǎng)物中，衰老的菌體常轉(zhuǎn)為革蘭氏陰性。培養(yǎng)特性：易培養(yǎng)，對營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中生長良好。需氧或兼性厭氧。最適生長溫度37℃，最適生長pH7.4。耐鹽性強，在含10～15%的氯化鈉培養(yǎng)基中仍能生長，可用于篩選菌種。在普通營養(yǎng)瓊脂平板上培養(yǎng)18～24ｈ，可形成圓形、表面光滑、不透明的菌落?？僧a(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內(nèi)，不滲至培養(yǎng)中。在血平板上可形成明顯透明的溶血環(huán)。為β型溶血?？僧a(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培養(yǎng)基上形成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅試驗、VP試驗多為陽性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽性。金黃色葡萄球菌的酶金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生血漿凝固酶和耐熱DNA酶。這兩種酶均與金黃色葡萄球菌的致病性有關(guān)。血漿凝固酶：與金黃色葡萄球菌的致病力密切相關(guān)。一般認為，血漿凝固陽性的金黃色葡萄球菌菌株有致病力。否則為無力的菌株。血漿凝固酶對熱穩(wěn)定，能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大部分活性。耐熱DNA酶作為除血漿凝固酶外鑒定金黃色葡萄球菌致病力的指標之一。該酶的最適pH為9.0。金黃色葡萄球菌腸毒素：是金黃色葡萄球菌一種重要的致病物質(zhì)。本菌引起的食物中毒是因為食品污染了金黃葡萄球菌后，由細菌產(chǎn)生大量腸毒素而導致的。近年報導表明，50%以上的金黃色葡萄球菌菌株在實驗室條件下可產(chǎn)生腸毒素，并且1個菌株能產(chǎn)生兩種或兩種以上的腸毒素。腸毒素是一種可溶性蛋白質(zhì)，由單個無分枝的肽鏈組成。分子量約為3000左右。易溶于水，難溶于有機溶劑。金黃色葡萄球菌的腸毒素耐熱，經(jīng)100℃煮沸30min不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。食物中的腸毒素耐熱性更強，一般烹調(diào)溫度不能將其破壞。218~248℃的油中需30min才能被破壞?？梢鸺毙晕改c炎。根據(jù)腸毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、E5個型。A型腸毒素引起的食物中毒較多，約占50%左右。其他依次為D、C、B和E型。也有A＋D、A＋B、A＋C、B＋C等。A型腸毒素毒力較強，攝入1μg即可引起中毒；B型毒力較弱攝入25μg，才引起中毒。一般認為引起人中毒的最小劑量是1.0~7.2μg/kg。金黃色葡萄球菌的檢測程序檢樣25g(mL)＋225mL生理鹽水或磷酸鹽緩沖液7.5%氯化鈉肉湯或10%氯化鈉胰酪胨大豆肉湯36±1℃Baird-Parker平板，血平板涂片染色觀察溶血血漿凝固酶試驗報告血平板18~24h，Baird-Parker平板18~24h或45~48h。BHI肉湯和營養(yǎng)瓊脂小斜面36±1℃18~24h增菌培養(yǎng)基7.5%氯化鈉肉湯：為葡萄球菌選擇性增菌培養(yǎng)基，因金黃色葡萄球有耐受高鹽的特性，因而能在此增菌液中生長，除某些嗜高鹽的海洋菌外，大多數(shù)細菌都被增菌液中的高鹽所抑制。胰酪胨大豆肉湯：含氯化鈉達10%，以胰酪胨替代牛肉浸粉，并加入少量磷酸氫二鉀和葡萄糖促進葡萄球菌的生長。樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25g樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1min～2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min～2min，制成1:10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL磷酸鹽緩沖稀釋液或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內(nèi)預置適當數(shù)量的無菌玻璃珠)中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。增菌與分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)：吸取5mL上述樣品勻液，接種于50mL7.5%氯化鈉肉湯或10%胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長，污染嚴重時在10%胰酪胨大豆肉湯內(nèi)呈混濁生長。將上述培養(yǎng)物，分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h或45h～48h。分離培養(yǎng)基Baird-Parker瓊脂：培養(yǎng)基中含有卵黃亞碲酸鉀，能抑制大多數(shù)細菌的繁殖，并能促進金黃色葡萄球菌的生長使其產(chǎn)生黑色和暈圈。培養(yǎng)基中的丙酮酸鈉和甘氨酸也能促進金黃色葡萄球菌的生長。金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：圓形、光滑凸起、濕潤，直徑約2~3mm，顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁帶，在其外層有一透明圈。用接種針接觸菌落似有奶油樹膠的硬度，偶而可見無混濁帶和透明圈的非典型菌落。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些，外觀可能粗糙并干燥。分離培養(yǎng)基血瓊脂：是一種基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含有5%的脫纖維血(羊血或兔血)。用于觀察金黃色葡萄球菌的溶血現(xiàn)象。金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上呈β溶血。金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)：呈金黃色，有時也呈白色，大而突起，圓形、不透明、表面光滑，周圍有透明的β溶血環(huán)。革蘭氏染色血漿凝固酶試驗試驗原理：致病性的金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w蛋白，附著于細菌表面，產(chǎn)生凝固。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：一種是與細胞壁結(jié)合的凝固酶，為結(jié)合凝固酶；另一種是菌細胞釋放于培養(yǎng)基中，為游離凝固酶。二者的抗原性不同。血漿凝固酶試驗挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5mLBHI和營養(yǎng)瓊脂小斜面，36℃±1℃培養(yǎng)18h～24h。取新鮮配置兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入可疑菌落的BHI培養(yǎng)物0.2mL～0.3mL，振蕩搖勻，置36℃±1℃溫箱或水浴箱內(nèi)，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固（即將試管傾斜或倒置時，呈現(xiàn)凝塊）或凝固體積大于原體積的一半，判定為陽性結(jié)果。同時以血漿凝固酶試驗陽性和陰性葡萄球菌菌株的肉湯培養(yǎng)物作為對照。結(jié)果如可疑，挑取營養(yǎng)瓊脂小斜面的菌落到5mLBHI，36℃±1℃培養(yǎng)18h～48h，重復實驗。結(jié)果報告如血漿凝固酶試驗陽性，可判定為金黃色葡萄球菌。報告在25g（mL）樣品中檢出或未檢出金黃色葡萄球菌。葡萄球菌食物中毒細菌性食物中毒葡萄球菌食物中毒葡萄球菌食物中毒系毒素性食物中毒。該食物中毒是由于進食了含有一種或多種含葡萄球菌腸毒素的食物所引起。雖然目前已經(jīng)知道許多既不產(chǎn)生凝固酶也不產(chǎn)生耐熱性核酸酶的葡萄球菌也能產(chǎn)生腸毒素，但一般認為引起食物中毒的腸毒素的產(chǎn)生與產(chǎn)生凝固酶和耐熱性核酸酶的金黃色葡萄球菌有關(guān)。

葡萄球菌食物中毒1.金黃色葡萄球菌生物學特性金黃色葡萄球菌屬于微球菌科的