149培養(yǎng)基配制及適用性檢查操作規(guī)程總結(jié)

定義〔包括微量元素〕以及生長(zhǎng)素和水等。應(yīng)進(jìn)展培育基的適用性檢查。程序培育基的制備按處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培育基加純化水進(jìn)展配制。常用培育基的配制養(yǎng)分瓊脂培育基1000ml,250ml的錐形瓶200ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供細(xì)菌計(jì)數(shù)微生物限度檢查中的細(xì)菌數(shù)測(cè)定。玫瑰紅鈉瓊脂培育基1000ml,250ml的錐形200ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供霉菌、酵母菌檢驗(yàn)。膽鹽乳糖培育基1000ml,100ml的錐形100ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供大腸埃希菌檢驗(yàn)。4-甲基傘型酮葡萄糖苷酸〔MUG〕培育基100ml,20ml的試管中，5ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供大腸埃希菌檢驗(yàn)乳糖膽鹽發(fā)酵培育基100ml,25ml的試管中，10ml，用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：大腸菌群檢驗(yàn)硫乙醇鹽流體培育基1000ml,500ml的玻璃300ml,用膠塞塞好，密封壓蓋。12115min，備用。用途：供需氣菌、厭氣菌檢驗(yàn)制止復(fù)印制止復(fù)印制止復(fù)印改進(jìn)馬丁瓊脂培育基1000ml,500ml的玻璃300ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：供真菌檢驗(yàn)胰酪胨大豆瓊脂培育基g,1000ml,250ml錐形瓶中,200ml,用棉塞塞好，用兩層牛皮紙包好，12115min，備用。用途：環(huán)境監(jiān)測(cè)檢驗(yàn)培育基平板及斜面的制備45℃左20～25ml〔∮90mm〕9～11m〔∮55mm1組，22～8℃冰箱中保存。1/5，高1/3,滅菌后趁熱放置成底層斜面或高層短斜面，待其凝固后使用，留意管口和瓶塞上勿沾有培育基，避開污染。培育基配制的留意事項(xiàng)承受枯燥培育基，按說(shuō)明配制，應(yīng)對(duì)滅菌后的培育基pH值進(jìn)展校驗(yàn)。配制的培育基不應(yīng)有沉淀。如有沉淀，應(yīng)于溶化后趁熱過濾，滅菌后使用。免松動(dòng)或脫落造成染菌。培育基配制應(yīng)在2h內(nèi)滅菌，避開細(xì)菌生殖。2～8℃，避光的環(huán)境，防止被污染，可在一周內(nèi)用畢；制備好的培育基放置時(shí)間不宜過長(zhǎng)，以免水分散失及染菌。結(jié)塊、生霉直接影響培育基質(zhì)量。培育基適用性檢查計(jì)數(shù)培育基的適用性檢查細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)用的培育基應(yīng)進(jìn)展培育基的適用性檢查，成品培育基、由脫水培育基或按培育基處方配制的培育基均應(yīng)檢查。菌種大腸埃希菌Escherichiacol〔CMCC〔〕44102〕金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureu〔CMCC〔〕26003枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis〔CMC〔〕63501〕白色念珠菌Candidaalbicans〔CMCC〔〕98001黑曲霉菌Aspergillusnige〔CMCC〔〕98003〕18～24小時(shí)；接種白色念珠菌的穎培育物至改進(jìn)馬丁瓊脂培育基24～48110ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶1ml50～100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的穎培育物至改進(jìn)馬丁5～73～5ml0.05800.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用管口裝有薄棉花的無(wú)菌吸管吸出孢子懸液1ml至無(wú)菌試管9ml0.05800.9%1ml50～100cfu22～824小時(shí)內(nèi)使2～81周內(nèi)使用。50～100cfu，分別2置30～35℃培育4850～100cfu，分別注入無(wú)菌平皿2個(gè)平皿，混勻，凝固，置23～28℃培育7250～100cfu，注入無(wú)菌平皿中，馬上傾注酵母浸出2個(gè)平皿，混勻，凝固，置23～28℃培育72小時(shí)，計(jì)數(shù)。同時(shí)，用相應(yīng)的比照培育基替代被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。結(jié)果判定：被檢培育基上的菌落平均數(shù)與比照培育基上的菌落平均數(shù)的比值大于70%掌握菌檢查用培育基的適用性檢查基處方配制的培育基均應(yīng)檢查。菌種大腸埃希菌Escherichiacol〔CMCC〔〕44102〕金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureu〔CMCC〔〕26003〕乙型副傷寒沙門菌Salmonellaparatyphi〔CMCC〔〕50094銅綠假單胞菌Pseudomonasaeruginos〔CMCC〔〕10104〕生孢梭菌Clostridiumsporogene〔CMCC〔〕64941〕白色念珠菌Candidaalbicans〔CMCC〔〕98001〕穎培育物至養(yǎng)分瓊脂培育基上，生孢梭菌的穎培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，培育18～2424～48小110ml0.9%1ml含10～100cfu的菌懸液。1。1掌握菌檢查用培育基的促生長(zhǎng)力量、抑制力量和指示力量檢查掌握菌檢查 培育基膽鹽乳糖培育基4-甲基傘形酮葡糖苷酸培育基

特性抑制力量

試驗(yàn)菌株金黃色葡萄球菌大腸埃希菌

培育基乳糖膽鹽發(fā)酵培育基

+指示力量+指示力量抑制力量

大腸埃希菌大腸菌群 乳糖發(fā)酵培育基凱瓊脂培育基養(yǎng)分肉湯培育基四硫磺酸鈉亮綠培育基賀菌屬瓊脂培育基

抑制力量

金黃色葡萄球菌沙門菌

凱瓊脂培育基三糖鐵瓊脂培育基

指示力量

銅綠假單胞菌菌梭菌

膽鹽乳糖培育基基亞碲酸鹽肉湯培育基醇氯化鈉瓊脂培育基梭菌增菌培育基

抑制力量抑制力量促生長(zhǎng)力量+指示力量抑制力量促生長(zhǎng)力量+指示力量抑制力量促生長(zhǎng)力量促生長(zhǎng)力量+指示力量

銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌大腸埃希菌大腸埃希菌生孢梭菌生孢梭菌念珠菌顯色培育基白色念珠菌1%聚山梨酯80+玉米瓊脂培育基

促生長(zhǎng)力量+指示力量抑制力量促生長(zhǎng)力量+指示力量

增菌培育基促生長(zhǎng)力量檢查：分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌〔見表1〕于被檢培育培育基管比較，被檢培育基管試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好。固體培育基促生長(zhǎng)力量檢查：取試驗(yàn)菌各1ml〔含菌數(shù)50～100cfu〕分別涂布于被檢培育基和比照培育基平板上，在相應(yīng)掌握菌檢查規(guī)定的培育溫度及最短培育時(shí)間下培育。被檢培育基與比照培育基生長(zhǎng)的菌落大小形態(tài)特征應(yīng)全都。5.5.6：培育基抑制力量檢查：接種不少于100cfu的試驗(yàn)菌〔1〕于被檢培育基中，在相應(yīng)掌握菌檢查規(guī)定的培育溫度及最長(zhǎng)時(shí)間下培育，試驗(yàn)菌應(yīng)不得生長(zhǎng)。5.5.7：固體培育1m〔100cf〔1〕分別涂布于被檢培育5.5.8液體培育基指示力量檢查：分別接種不大于100cfu的試驗(yàn)菌〔見表2〕于被檢培育養(yǎng)基管比較，被檢培育基管試驗(yàn)菌生長(zhǎng)狀況、指示劑反響等應(yīng)與比照培育基全都。培育基無(wú)菌性及靈敏度檢查：無(wú)菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培育基及真菌培育基等應(yīng)品的無(wú)菌檢查同時(shí)進(jìn)展。無(wú)菌性：每批培育基隨機(jī)取不少于5支〔瓶〕，培育14天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。靈敏度檢查菌種金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)10104〕枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis〔CMC〔〕63501〕生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)〔CMCC(B)64941〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕菌液制備接種金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的穎培育物至養(yǎng)分瓊脂培育基上，接種生孢梭菌的穎培育物至硫乙醇酸鹽流體培育基中，30℃～35℃培育24～48小時(shí)，取上述培育物1白金耳，加至10ml0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，1ml10～100cfu的菌懸液。接種黑曲霉的穎培育物至改進(jìn)馬丁瓊脂斜5～73～5ml0.05％〔v/v〕800.9%無(wú)菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫，然后，用管口裝有薄棉花的無(wú)菌吸管吸出孢子懸液1ml至無(wú)菌試管9ml801ml含孢子數(shù)10～100cfu的孢子懸液。菌懸液在室溫下放置應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用，假設(shè)保存在2～8℃可在24小時(shí)內(nèi)使用。910021支不接種9ml5支,100cfu215天。逐日觀看結(jié)果。靈敏度檢查符合規(guī)定。50-100cfu/ml的大腸1ml，分別注入無(wú)菌平皿中，馬上傾注胰15ml，每株菌種平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝固，另取1個(gè)平皿直15ml30-3548h，每日觀看結(jié)50-100cfu/ml1ml，分別注入無(wú)菌平皿中，馬上傾注胰酪胨大豆瓊脂培育基約15ml，每株菌種平行制備2個(gè)平皿，混勻，凝115ml，作為空白比照，于20~25℃分72h，每日觀看結(jié)果并計(jì)數(shù)。同時(shí)，用比照培育基代替被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。市售預(yù)制〔TSA〕接觸皿適用性檢查：分別吸取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草0.1ml〔50-100cfuTSA接觸皿培育21個(gè)同批號(hào)的平皿作為陰性比照，30~3548h，每日觀看結(jié)果。另取白色念珠菌、黑曲霉試驗(yàn)菌液0.1ml〔含菌量為50-100c，承受涂抹法于市售預(yù)制TSA接觸皿培育基外表均勻涂抹，每株試驗(yàn)菌平行制20~2572h，每日觀看結(jié)果。同時(shí)，用比照培育基制備的平皿代替被檢培育基進(jìn)展上述試驗(yàn)。落形態(tài)大小與比照培育基上的菌落數(shù)全都，判該培育基的適用性檢查符合規(guī)定。參考資料及附錄《中國(guó)藥典》2023版一部中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作標(biāo)準(zhǔn)MUG培育基適用性檢查記錄〔SOP-QC-149-R01-01〕〔SOP-QC-149-R02-01〕〔SOP-QC-149-R03-01〕〔SOP-QC-14