蘆丁提取工藝的探討

蘆丁提取工藝的探討

蝗蟲是指豆科植物蝗蟲sophorjapontal。槐米含有蘆丁達20.0%以上,是蘆丁主要原料來源。蘆丁是一種黃酮類化合物,其性狀為黃色結(jié)晶性粉未或無晶形粉未,有苦味,略溶于水,能溶于熱水及醇。遇光易變質(zhì),宜在陰涼處保存。1色譜、藥品和試劑Waters515高效液相色譜儀,Water2487紫外檢測器。HS2000色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),XZ-6A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀,D101型大孔吸附樹脂,購自天津南開大學化工廠;蘆丁對照品購自中國藥品生物制品檢定所;槐米購自江蘇省藥材公司;甲醇為色譜純,水為重蒸水。2方法和結(jié)果2.1提取蝗蟲米提取物的制備2.1.1槐米材的預處理取槐米藥材適量,粉碎使通過3號篩,置不銹鋼托盤中,在密閉環(huán)境下通入高壓高溫蒸汽蒸制20min,使其中降解酶快速滅活。2.1.2底燒瓶提取取上述處理好的槐米藥材約50g,置1000ml圓底燒瓶中,加無水乙醇水浴回流提取3次,依次為400ml、300ml、300ml,每次1小時。提取液趁熱濾過,濾液合并回收乙醇至干,即得蘆丁粗提物。2.1.3柱的洗脫和蒸干取上述蘆丁粗提物,用少量水轉(zhuǎn)移至預處理的D101型大孔吸附樹脂柱中(柱長120cm,內(nèi)徑15cm),先用水200ml洗脫,繼用50%乙醇800ml洗脫,收集50%乙醇洗脫液,置水浴上蒸干。殘渣依次用10、8、6倍量無水乙醇重結(jié)晶,即得。2.2測定了石膏含量2.2.1流動相及流速以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以甲醇-水-醋酸溶液(37:85:5)為流動相,檢測波長為256nm.,流速為1.0ml/min,理論板數(shù)按蘆丁計應不低于4000。2.2.2對照溶液的制備對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品50mg,置于50ml量瓶中,加入甲醇溶解,定容于50ml,所得濃度1mg/ml,備用。2.2.3超聲時濾液的制備精密稱取蘆丁精提物200mg,置50ml量瓶中,加甲醇45ml超聲處理10分鐘,放冷,加甲醇至刻度,搖勻,用微孔濾膜過濾,作為供試液,備用。2.2.4標準吸收曲線精密吸取對照品1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0μl進樣,按色譜條件測定峰面積積分值,以峰面積為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準吸收曲線,并用最小二乘法求回歸方程。回歸方程為:Y=1468268.4X-222415.2,相關系數(shù)為r=0.9995。2.2.5儀器和色譜條件對比精密吸取對照品供試液10μl,按“2.1”項下條件,連續(xù)進樣5次,測得峰面積,結(jié)果RSD=1.16%,說明儀器和色譜條件均具有良好的精密度。2.2.6重線性實驗分別取同一供試樣品5份,同法制備,按“2.1”項下條件,測定峰面積,RSD=2.07%,結(jié)果顯示該方法具有較好的重現(xiàn)性。2.2.7進樣穩(wěn)定性計算在室溫條件下,將樣品按測定方法處理后,分別在2.0,4.0,8.0,12.0,24.0h,進樣10μl/次,得峰面積的RSD=1.12%(n=5)。結(jié)果表明該溶液在24h內(nèi)的含量基本保持不變。2.2.8加標回收率試驗精密稱取已知含量的樣品,加蘆丁對照品適量,按“2.2”供試品溶液的制備方法操作,測定平均回收率為98.8%,RSD為1.15%(n=5)。2.2.9高效液相色譜法取3批蘆丁精提物,按“2.2”所述方法制備供試品溶液,注入高效液相色譜儀,在256nm處測定峰面積,按外標法計算含量,即得。3蘆丁提取物的制備我們采用短時高溫高壓方式,滅活槐米藥材中的水解酶,保存了大部分蘆丁成份。用無水乙醇回流提取,