山楂葉、果和籽提取液抗氧化能力的研究

山楂葉、果和籽提取液抗氧化能力的研究

2.6-2叔基-4-甲基苯基（bht）是目前食品中常見的化學(xué)合成試劑，具有一定的致癌作用。因此，有必要開發(fā)無害、天然添加劑。黃酮類化合物(Falconoid)是指具有以色酮環(huán)與苯環(huán)為基本結(jié)構(gòu)的一類化合物的總稱,是色原酮或色原烷的衍生物,以黃酮(2-苯基色原酮)為母核而衍生的一類黃色色素。黃酮類化合物對治療腦血管硬化和心血管疾病療效顯著,并且具有較高的抗氧化、抗自由基活性等多種藥理保健作用,是一類有開發(fā)前景的天然抗氧化劑。山楂為薔薇科植物山楂(CrataeguspinnatifidaBge.Var.majorN.E.Br.)或野山楂(Crataeguscuneatasieb.etZucc.)的成熟果實。山楂的主要成分為有機酸和黃酮類化合物,還含有脂肪酶、維生素C、核黃素、胡蘿卜素及鈣、磷、鐵等微量元素和磷脂類成分。其中山楂葉提取液黃酮類物質(zhì)含量高達1.8%～2.0%。筆者通過對山楂葉、果和籽提取液與含同濃度黃酮的BHT抗氧化能力的比較,研究其抗氧化能力,及其與BHT協(xié)同的抗氧化能力,旨在為天然抗氧化劑的研發(fā)提供參考。1材料和方法1.1藥品、化學(xué)品、鈉、硝酸鹽、酸鈉的含量測定山楂葉、果和籽:采于連云港中云鄉(xiāng),自然晾干,粉碎,過40目篩。蘆丁(中國藥品生物制品鑒定所);無水乙醇、硝酸鈉、硝酸鋁、硫酸、氫氧化鈉均為分析純(國藥集團化學(xué)試劑有限公司);氯化鈉分析純(南京化學(xué)試劑有限公司);磷酸鈉、鉬酸銨、BHT均為分析純(上海試驗試劑有限公司)。1.2u3000儀器DJ-04移液槍(大龍醫(yī)療設(shè)備有限公司);BS-124S電子分析天平[賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司];UV-722S分光光度計(上海棱光技術(shù)有限公司);DK-S24型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏試驗設(shè)備有限公司);SW-CJ-1F潔凈工作臺(蘇州安泰空氣技術(shù)公司);LS-B50L立式壓力蒸汽滅菌器(上海華線醫(yī)用核子儀器公司)。1.3測試方法1.3.1山楂葉、果實和種子提取物的制備分別取一定量山楂葉、果和籽粉末樣品,以70%乙醇作為浸提溶劑在85℃恒溫水浴下浸提2h,過濾,得到相應(yīng)提取液。1.3.2取適量黃酮，測定山楂葉片、果實和種子提取物中的總黃酮含量1.3.2.硝酸鹽總反應(yīng)時間精確稱取5mg蘆丁對照品,用60%乙醇溶解轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中,定容,得到10mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品乙醇溶液。分別準(zhǔn)確移取0、1、2、3、4、5ml上述溶液于10ml容量瓶中,加入0.3ml10%硝酸鈉溶液,搖勻,放置6min,加入0.3ml10%硝酸鋁溶液,搖勻,放置6min,加入4ml1mol/L氫氧化鈉溶液,分別用60%乙醇定容,搖勻,放置15min,以1號容量瓶中溶液為空白,在波長510nm處測定吸光度。1.3.2.2、黃酮含量的測定采用硝酸鋁比色法。將山楂葉、果和粉末提取液在波長510nm處測得吸光度,用標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算得到提取液中總黃酮含量。1.3.3藥瓶中黃酮的消毒處理先將6個大藥瓶高壓蒸汽滅菌,再將20ml山楂葉、果和籽提取液分別裝入6個無菌大藥瓶中(每種各放2個無菌大藥瓶),由于黃酮不耐高溫高壓,因此采用巴氏消毒與間歇滅菌相結(jié)合的方法進行滅菌。將6個裝有提取液的大藥瓶置于水浴鍋中,80℃滅菌15s,再取出藥瓶,置于37℃培養(yǎng)箱中保溫過夜,第2天再進行1次巴氏消毒。重復(fù)3次。1.3.4山山楂葉和籽的檢測采用磷鉬絡(luò)合物法。分別配制與山楂葉、果和籽提取液中總黃酮含量相同的BHT溶液作為對照組溶液BHT1、BHT2、BHT3,進行測定。在10ml具塞刻度比色管中各加入1.0ml已滅菌山楂葉提取液、1.0ml同濃度的BHT及1.0ml山楂葉提取液與同濃度BHT的混合物,每管均加入1.0ml0.6mol/LH2SO4溶液,1.0ml0.028mol/LNa3PO4溶液,1.0ml0.004mol/L(NH4)6Mo7O24溶液,加入蒸餾水定容至5.0ml,搖勻,置95℃水浴中加熱反應(yīng)0～150min,每30min取出1支,冷至室溫,測定波長695nm處的吸光度,空白對照用1.0ml70%乙醇做同樣的處理。山楂果和籽的測定方法同上,所有測定平行進行3次,取其平均值。根據(jù)吸光度大小可比較山楂葉、果和籽提取液與BHT的抗氧化能力。2結(jié)果與分析2.1線上線下測定結(jié)果線圖1以濃度(C)為橫坐標(biāo)、吸光度值(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,結(jié)果見圖1。由圖1可知,回歸方程為A=11.314C-0.0029,R2=0.9992。結(jié)果表明,蘆丁濃度在0.01～0.05mg/ml范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。2.2不同山楂葉提取液中黃酮含量的比較山楂葉、果和籽提取液中總黃酮含量分別為0.911、0.752、0.267mg/ml,由此可知,山楂葉提取液中黃酮含量高于山楂果和籽。2.3山楂籽、山楂葉、brt3的抗氧化能力提取液中黃酮類物質(zhì)與BHT的濃度越高,形成的磷鉬絡(luò)合物越多,吸光度越高,則抗氧化能力越強。由表1可知,山楂葉、果和籽提取液與各對照組在150min時的抗氧化能力均呈顯著性差異(α=0.05)。山楂籽提取液的抗氧化能力強于BHT1,且將山楂籽提取液與BHT1進行配合使用,其抗氧化能力強于單獨的山楂籽提取液和BHT1;山楂果提取液的抗氧化能力強于BHT2,且將山楂果提取液與BHT2進行配合使用,其抗氧化能力強于單獨的山楂果提取液和BHT2;山楂葉提取液的抗氧化能力強于BHT3,并且將山楂葉提取液與BHT3進行配合使用,其抗氧化能力強于單獨的山楂葉提取液和BHT3。對山楂葉、果和籽提取液的抗氧化能力比較發(fā)現(xiàn),在相同時間內(nèi),山楂籽提取液<山楂果提取液<山楂葉提取液,山楂葉、果和籽提取液與BHT協(xié)同時的抗氧化能力也有相同的規(guī)律。3抗氧化能力的測定山楂葉、果和籽提取液中總黃酮