egcg磷脂復(fù)合物的制備及表觀油水分配系數(shù)的測定

egcg磷脂復(fù)合物的制備及表觀油水分配系數(shù)的測定

表中無兒童茶素（ecgg）是茶葉中兒茶素的主要成分之一，約占兒茶素總數(shù)的50%60%。它也是兒茶素中最具抗逆性的成分。它具有清除體內(nèi)自由基、抗癌、抗炎、抗突變、抗衰老、神經(jīng)系統(tǒng)保護(hù)和肝功能改善等功效。由于EGCG具有多酚羥基、極性大、易溶于水,從而限制了其在食品中的廣泛應(yīng)用;此外由于穩(wěn)定性較差,EGCG在體內(nèi)的生物利用度較低。磷脂復(fù)合物系指在非質(zhì)子傳遞溶劑中,天然活性成分與磷脂以一定配比,通過電荷遷移或極性相互作用而形成的較為穩(wěn)定的化合物或絡(luò)合物。磷脂復(fù)合物的形成能改善天然活性成分的脂溶性,增強(qiáng)機(jī)體對天然活性成分的吸收,提高其生物利用度,但是目前未見有關(guān)EGCG磷脂復(fù)合物的研究報(bào)道。因此,本研究采用物理方法制備EGCG磷脂復(fù)合物,并通過對EGCG磷脂復(fù)合物一些理化性質(zhì)的考察,以確定EGCG磷脂復(fù)合物的制備工藝,為EGCG及其磷脂復(fù)合物的深入研究與利用提供理論基礎(chǔ)。1材料和方法1.1化學(xué)試劑及試劑EGCG杭州禾田生物技術(shù)有限公司;大豆卵磷脂鄭州四維磷脂技術(shù)有限公司;甲醇(色譜純)國藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司;無水乙醇、甲酸、正辛醇、氯仿、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、溴化鉀等均為國產(chǎn)分析純試劑。1.2結(jié)構(gòu)儀器和儀器Laborota4000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀德國Heidolph公司;SHB-Ⅲ型循環(huán)水式真空泵鄭州長城科工貿(mào)有限公司;Tensor-27型傅里葉變換紅外光譜儀、D8AdvanceX射線衍射儀德國Bruker公司;HWCL-3恒溫磁力攪拌浴鄭州長城科工貿(mào)有限公司;Agilent1100型高效液相色譜儀美國Agilent公司;UV-2450型紫外分光光度計(jì)、AY-120電子精密天平、BL-220H分析天平日本Shimadzu公司;DSC823e型差示掃描量熱儀(DSC)瑞士梅特勒-托利多公司。1.3方法1.3.1大豆中采用ecgg法合成大豆卵磷脂EGCG磷脂復(fù)合物的制備參照戴彥韻的方法并稍做修改。準(zhǔn)確稱取490mg大豆卵磷脂和100mgEGCG(大豆卵磷脂和EGCG物質(zhì)的量比為1:1),將大豆卵磷脂置于圓底燒瓶中,加入10mL無水乙醇室溫?cái)嚢枞芙夂?邊攪拌邊逐漸加入EGCG,緩慢升溫至40℃,持續(xù)攪拌冷凝回流反應(yīng)4h,真空干燥。根據(jù)復(fù)合物易溶于氯仿而EGCG不溶于氯仿的特性,將產(chǎn)物加入適量的氯仿充分溶解,經(jīng)0.45uf06dm的非水濾膜過濾,制備得到EGCG磷脂復(fù)合物。1.3.2ecgg磷脂化合物的結(jié)構(gòu)試驗(yàn)1.3.2.不斷最佳溶液的制備將EGCG和EGCG磷脂復(fù)合物分別溶于無水乙醇溶液中,制成等EGCG濃度的乙醇溶液;按復(fù)合物溶液中磷脂的濃度條件制備等濃度的磷脂乙醇溶液。3種溶液進(jìn)行紫外全掃描分析。1.3.2.紅外光譜分析采用KBr壓片法分別對EGCG、磷脂、EGCG磷脂復(fù)合物及EGCG和磷脂的物理混合物在400～4000cm-1范圍內(nèi)進(jìn)行紅外光譜掃描分析。1.3.2.線衍射分析分別對EGCG、磷脂及EGCG磷脂復(fù)合物進(jìn)行X射線衍射掃描分析,條件如下:石墨單色器單色化Cu-Kα,管壓40kV,管流40mA,衍射范圍5°<2θ<60°,步長0.05°,每步計(jì)時0.1s。1.3.2.sf測定以空坩堝為參比、升溫速率10℃/min、掃描范圍25～300℃、N2流速30mL/min,分別對EGCG、磷脂、EGCG磷脂復(fù)合物及EGCG和磷脂的物理混合物進(jìn)行DSC測定。1.3.3正辛醇和正辛醇的緩沖液對gcg質(zhì)量濃度的影響精密稱取EGCG和EGCG磷脂復(fù)合物適量,分別溶于正辛醇飽和的磷酸鹽緩沖液和磷酸鹽緩沖液飽和的正辛醇中,配成以EGCG質(zhì)量濃度為基準(zhǔn)的1mg/mL的溶液(EGCG的質(zhì)量濃度為ρ0),各取溶液2mL于10mL具塞試管中,分別加入2mL磷酸鹽緩沖液飽和的正辛醇和正辛醇飽和的磷酸鹽緩沖液。37℃搖床振搖4h,5000r/min離心10min,取下層水相并利用高效液相色譜法測定EGCG,由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算EGCG的質(zhì)量濃度ρw,按照下式計(jì)算表觀油水分配系數(shù)P。2結(jié)果與分析2.1磷酸鹽溶液在c由圖1可知,EGCG和EGCG磷脂復(fù)合物在278nm波長處有最強(qiáng)吸收峰,而磷脂溶液在278nm處的吸收峰較低。EGCG磷脂復(fù)合物的吸光度明顯降低,這可能是由于磷脂的極性基團(tuán)部分與EGCG發(fā)生了較強(qiáng)的相互作用而引起的。2.2ecgg磷酸鹽混合物的結(jié)構(gòu)表征由圖2可知,EGCG的特征吸收峰為O-H(3357.86、3478.25cm-1),磷脂的特征吸收峰N-H(3407.26cm-1)、P=O(1234.61cm-1),混合物的特征吸收峰:O-H(3356.18、3477.42cm-1)、P=O(1224.37cm-1),形成EGCG磷脂復(fù)合物后特征吸收峰N-H和O-H移向低波數(shù),且峰形較寬而鈍,P=O(1200.19cm-1)藍(lán)移近30cm-1,說明EGGC分子中的酚羥基與磷脂膽堿部分中的季銨氮產(chǎn)生了強(qiáng)的分子間作用力。2.3ecgg為復(fù)合粉體的晶體結(jié)構(gòu)由圖3可知,EGCG主要以晶體形式存在,晶體衍射峰強(qiáng)烈;磷脂在10°以后主要以無定型特征存在,衍射圖上僅為一寬帶。EGCG磷脂復(fù)合物在10°以后EGCG的晶體衍射峰消失,完全表現(xiàn)為無定型特征。這可能是因?yàn)镋GCG與磷脂的極性端定向結(jié)合,從而使復(fù)合物處于高度分散狀態(tài),其自身的晶體特征被抑制。2.4ecgg的晶型變化由圖4可知,物理混合物中,磷脂與EGCG的熔點(diǎn)峰依然存在,只是受各自物理混合的影響有所變化。EGCG磷脂復(fù)合物中EGCG的熔點(diǎn)峰完全消失,證明EGCG晶型發(fā)生變化,可能是EGCG的極性基團(tuán)與磷脂的極性基團(tuán)部分發(fā)生了分子間相互作用,磷脂的兩條長脂肪酸鏈對EGCG進(jìn)行了包裹,使EGCG高度分散于磷脂中,進(jìn)而改變了EGCG的相變溫度,其特征吸收峰明顯改變,形成新的物相——磷脂復(fù)合物。2.5ecgg為復(fù)合溶劑EGCG和EGCG磷脂復(fù)合物的正辛醇-水表觀油水分配系數(shù)P見表1。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng),同時具有良好水溶性和透膜性的被動吸收的藥物有較好吸收,所以一般認(rèn)為lgP>5(即親脂性強(qiáng))的藥物不易吸收,這主要是由于它們的水溶性太差,lgP<1(即親水性強(qiáng))的藥物不易吸收,這主要是由于它們的脂溶性太差,而適合吸收的藥物的表觀油水分配系數(shù)lgP在1～4范圍內(nèi)較為理想。根據(jù)表觀油水分配系數(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,EGCG的lgP<1,而EGCG磷脂復(fù)合物的lgP在1～2之間,因此EGCG磷脂復(fù)合物應(yīng)為適合吸收的藥物。EGCG磷脂復(fù)合物在正辛醇中溶解性能的改善,一方面是由于其無定型的狀態(tài),另一方面可能是由于EGCG磷脂復(fù)合物中磷脂的極性端與EGCG相互作用而受到一定的掩蔽,從而對其極性產(chǎn)生較大的影響,使EGCG磷脂復(fù)合物表現(xiàn)出較強(qiáng)的脂溶性。3ecgg非水濾膜過濾的磷系物本研究根據(jù)EGCG磷脂復(fù)合物易溶于氯仿而EGCG不溶于氯仿的特性,將產(chǎn)物加入適量的氯仿充分溶解,經(jīng)0.45uf06dm的非水濾膜過濾,制備得到復(fù)合率為100%的EGCG磷脂