埃博拉出血熱病毒的樣本采集、運(yùn)送和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

埃博拉出血熱病毒的樣本采集、運(yùn)送和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)浙江省CDC盧亦愚2014年8月主要內(nèi)容標(biāo)本采集標(biāo)本包裝與運(yùn)送實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（一）標(biāo)本采集標(biāo)本采集人員的防護(hù)按照2014年8月19日發(fā)布的《中國(guó)疾病預(yù)防控制中心關(guān)于埃博拉出血熱個(gè)人防護(hù)技術(shù)方案指南（第一版）（試行）》的要求，采樣人員應(yīng)穿戴防護(hù)用品包括:一次性工作帽一次性防滲漏防護(hù)服防水靴（或者密閉式、防穿刺防水的鞋加穿一次性鞋套）防護(hù)眼罩或防護(hù)面屏醫(yī)用防護(hù)口罩（N95及以上）或全面型自吸過濾式呼吸器雙層一次性乳膠手套標(biāo)本采集人員的防護(hù)穿戴順序：步驟1：手衛(wèi)生步驟2：一次性工作帽（如需要）步驟3：醫(yī)用防護(hù)口罩（N95及以上）或全面型自吸過濾式呼吸器步驟4：防護(hù)眼罩或防護(hù)面屏，如選擇全面型自吸過濾式呼吸器時(shí)無需佩戴步驟5：里層一次性乳膠手套步驟6：一次性防滲漏防護(hù)服（必要時(shí)，可加穿防水圍裙）步驟7：外層一次性乳膠手套步驟8：防水靴或防水靴套（或者密閉式、防穿刺防水的鞋加穿一次性鞋套）標(biāo)本采集人員的防護(hù)脫摘順序：步驟1：外層一次性乳膠手套步驟2：防水靴或防水靴套（或者密閉式、防穿刺防水的鞋加穿一次性鞋套）步驟3：內(nèi)層手套消毒步驟4：一次性防滲漏防護(hù)服（需要時(shí)，先脫防水圍裙）步驟5：內(nèi)層手套消毒步驟6：防護(hù)眼罩或防護(hù)面屏步驟7：醫(yī)用防護(hù)口罩（N95及以上）或全面型自吸過濾式呼吸器步驟8：一次性工作帽（如需要）步驟9：里層一次性乳膠手套步驟10：手衛(wèi)生標(biāo)本采集按照《埃博拉出血熱防控方案（第二版）》規(guī)定，定點(diǎn)醫(yī)院負(fù)責(zé)病例的標(biāo)本采集工作根據(jù)流行病學(xué)史、癥狀等判別結(jié)果，采集留觀病例、疑似病例和確診病例的標(biāo)本目前僅需采集血液標(biāo)本，大小便、唾液和組織也可用于檢測(cè)標(biāo)本采集用分離膠無菌真空促凝管采集靜脈血，每管3mL，標(biāo)記后4℃保存，填寫標(biāo)本采集登記表留觀病例、疑似病例采集4管，其中2管盡快送省疾控中心實(shí)驗(yàn)室，2管保存于樣本采集單位，待排除埃博拉病毒感染后用于其它病原體的篩查（二）標(biāo)本包裝與運(yùn)送標(biāo)本包裝、運(yùn)送按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》要求運(yùn)輸至具有從事埃博拉病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本應(yīng)當(dāng)置于符合國(guó)際民航組織規(guī)定的A類包裝運(yùn)輸材料之中低溫冷藏運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融標(biāo)本包裝、運(yùn)送A類包裝，符合UN2814要求，按照三重包裝系統(tǒng)包裝：第一層包裝（可密封樣本袋、50mL離心管等）；第二層安全殼容器（防水、防漏）；外層運(yùn)輸包裝組成樣本袋放入防水防漏的第二層安全殼容器中，為降低破碎或泄漏的風(fēng)險(xiǎn)，用吸水紙等填充物固定標(biāo)本袋。安全殼容器和外包裝之間放冰袋不要打開采集管或分裝樣本不要離心分離血清標(biāo)本包裝、運(yùn)送（三）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的生物安全要求實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)和血清學(xué)檢測(cè)相關(guān)活動(dòng)嚴(yán)格按照《人間傳染的病原微生物名錄》的要求，在相應(yīng)的生物安全級(jí)別實(shí)驗(yàn)室開展。病毒培養(yǎng)在BSL-4實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)在ABSL-4實(shí)驗(yàn)室未經(jīng)培養(yǎng)的感染材料的操作在BSL-3實(shí)驗(yàn)室滅活材料的操作在BSL-2實(shí)驗(yàn)室無感染性材料的操作在BSL-1實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)人員個(gè)人防護(hù)口罩、帽子、防滲漏防護(hù)服、乳膠手套、高筒鞋套、防護(hù)面罩（正壓頭盔）等；注：手套、防護(hù)服大小要合適，檢查有無破漏；手套的量要充足，滿足隨時(shí)更換。所有涉及感染性材料的操作均應(yīng)在BSL-3實(shí)驗(yàn)室二級(jí)生物安全柜內(nèi)進(jìn)行；方便取用的消毒劑（0.5%次氯酸鈉溶液、75%酒精等），空間噴霧消毒設(shè)備（使用過氧乙酸，過氧化氫等）。埃博拉出血熱病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)（1）病毒抗原陽(yáng)性（2）血清特異性IgM抗體陽(yáng)性（3）恢復(fù)期血清特異性IgG抗體滴度比急性期有4倍以上升高（4）從患者標(biāo)本中檢出埃博拉病毒RNA（5）從患者標(biāo)本中分離到埃博拉病毒診斷

疑似病例基礎(chǔ)上具備診斷依據(jù)中實(shí)驗(yàn)室檢查任一項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性者檢測(cè)內(nèi)容目前省疾控中心實(shí)驗(yàn)室報(bào)送審批的檢測(cè)項(xiàng)目包括：埃博拉病毒核酸檢測(cè)抗埃博拉病毒IgM、IgG抗體檢測(cè)標(biāo)本處理與保存省疾控中心在BSL-3實(shí)驗(yàn)室盡快分離血清，離心時(shí)使用有密封蓋的離心桶或轉(zhuǎn)頭進(jìn)行標(biāo)本離心，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開離心轉(zhuǎn)頭放入或取出裝有標(biāo)本的離心管分離的血清標(biāo)本長(zhǎng)期保存應(yīng)置于-70℃以下，保存不超過1周可置-20℃實(shí)驗(yàn)操作的生物安全要求核酸提取時(shí)，加入核酸提取裂解液后，可在BS