從痰論治復方和從肝論治復方抗癲癇的比較研究

從痰論治復方和從肝論治復方抗癲癇的比較研究

癲癇是由反復發(fā)作和神經(jīng)異常放電引起的神經(jīng)退行性疾病引起的神經(jīng)退行性疾病。我國癲癇的發(fā)病率約23/(10萬·年)左右,而患病率為3.5‰-4.8‰。相較于抗癲癇西藥的眾多毒副作用及不良反應,傳統(tǒng)中醫(yī)中藥在治療癲癇過程中發(fā)揮著不可替代的作用。針對其病因病機,中醫(yī)治療癲癇主要體現(xiàn)在從痰論治(代表方:定癇丸)和從肝論治(代表方:柴胡疏肝湯)。在臨床實踐中,兩種不同治法均取得了較好的療效。本實驗觀察與比較柴胡疏肝湯及定癇丸對3種不同的急性癲癇動物模型(PTZ急性癲癇大鼠模型,MES小鼠驚厥模型,士的寧驚厥小鼠模型)的藥效,為探討中醫(yī)同病異治法治療癲癇提供現(xiàn)代實驗依據(jù),并為進一步研究中醫(yī)藥同病異治癲癇的機制打下基礎。1材料和方法1.1材料表面1.2方法1.2.1胡疏肝湯1d,2,4不同的制備方法PTZ、士的寧使用前用生理鹽水分別配置成為10mg/mL、1mg/mL的溶液,4℃冷藏;柴胡疏肝湯加8倍量水,煎煮2次,1h/次,合并煎液后濃縮為2g/mL(即每毫升含生藥量為2g);定癇丸煎煮方法同上,濃縮為1g/mL(即每毫升含生藥量為1g);VPA用生理鹽水配置成為10mg/mL的混懸液,用前配置并搖勻使用。1.2.2灌胃給予定癲癇丸60只wistar大鼠,隨機分為6組,每組10只,各組大鼠均在造模前灌胃給藥,A組給予等容積生理鹽水,B組按200mg/(kg·d)給予VPA混懸液,C、D、E組分別按照2.5、5、10g/(kg·d)灌胃給予柴胡疏肝湯,F組按照12g/(kg·d)灌胃給予定癇丸。連續(xù)給藥7d,早晚各1次。末次給藥1.5h后腹腔注射PTZ溶液(50mg/kg),立即觀察大鼠的行為學變化30min,記錄發(fā)作性陣攣的潛伏期(即Racine標準中3級發(fā)作的潛伏期)以及大鼠發(fā)作級別的例數(shù)。1.2.3癲癇發(fā)作分類1.2.4消極主觀模型vpa利用YSD-4GA藥理生理實驗多用儀篩選符合要求的小鼠,齒狀夾以生理鹽水浸濕后,夾住小鼠兩耳尖部,進行交流電刺激,參數(shù)設定為100V,0.25s,單次刺激,以后肢強直性伸直為驚厥指標,篩選符合條件的小鼠60只,隨機分為6組,分組同前,A組給予等容積生理鹽水,B組按400mg/(kg·d)灌胃給予VPA溶液,C、D、E組分別按照3.75、7.5、15g/(kg·d)灌胃給予柴胡疏肝湯,F組按照20g/(kg·d)灌胃給予定癇丸。連續(xù)給藥7天,早晚各一次。在末次給藥1.5h后再行上述電刺激,記錄其驚厥數(shù),計算驚厥率。1.2.5小鼠經(jīng)口給予不同的藥物對es驚厥小鼠的成立率和死亡率的影響選取SPF級昆明小鼠60只,分組及給藥方法同MES驚厥小鼠,在末次給藥1.5h后,各組給予士的寧1.5mg/kg腹腔注射,記錄小鼠發(fā)生強直性驚厥和死亡的例數(shù),計算其驚厥率和死亡率。1.3統(tǒng)計方法發(fā)作性陣攣的潛伏期比較用方差分析,各組癇性發(fā)作級別的比較用多個獨立樣本的非參數(shù)檢驗。驚厥率和死亡率的比較用卡方檢驗。2結果2.1組患者不同量效關系表4B、C、D、E、F組均能延長PTZ急性驚厥大鼠三級發(fā)作潛伏期(F=5.145,P<0.05),但是C、D、E組之間三級潛伏期差異無統(tǒng)計學意義,它們與F組的三級潛伏期相比差異無統(tǒng)計學意義。6組之間的癇性發(fā)作級差異有統(tǒng)計學意義(χ2=16.965,P<0.01)。柴胡疏肝湯高、中、低劑量組的發(fā)作性陣攣潛伏期和癇性發(fā)作級別呈現(xiàn)一定的量效關系。(見表1-2)2.2組不同量效關系6組之間的驚厥率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=24,P<0.001),B、C、D、E和F組較A組的驚厥率低,B組的驚厥率最低,D、E組驚厥率較F組低。并且C、D、E組呈現(xiàn)明顯的量效關系。(見表3)2.3對b、d、e和f小鼠驚厥率和死亡率的影響6組之間的驚厥率和死亡率有統(tǒng)計學差異(χ2值分別為15.173和15.25,P<0.05),B、D、E和F組小鼠的驚厥率和死亡率較A組低,C、D、E的驚厥率和死亡率呈現(xiàn)量效關系,其中E組的驚厥率和死亡率最低。(見表4)3發(fā)展中應用胡疏肝湯抗癲癇作用的研究癲癇是神經(jīng)系統(tǒng)常見的慢性疾病,根據(jù)癲癇的病因病機,各醫(yī)家在治療癲癇的臨床實踐中,逐漸總結出兩大主要治法:從肝論治和從痰論治。古人稱“無痰不作癇”?！兜は姆āぐB》云“無非痰涎壅滯,迷悶心竅”,指出了痰與癲癇的發(fā)生密切相關。痰濁為患,蒙閉心竅,竄走經(jīng)絡,是造成癲癇發(fā)作的直接因素,因此主張癲癇應從痰論治。“從痰論治”癲癇多以化痰祛濁藥組方加減為主,此類方多以定癇丸化裁而來。《黃帝內經(jīng)》曰:“木發(fā)之郁,太虛?；?云物以擾,大風乃至……目不識人,善暴僵仆”,“諸風掉眩,皆屬于肝”,肝藏血,主疏泄,在體主筋,其體陰用陽,調和全身氣血津液的運行,故肝之升發(fā)太過與不及,均可導致陽升風動,風動痰升和虛風內動,風動痰升,壅滯經(jīng)絡,閉塞清竅,從而出現(xiàn)抽搐、神昏、口吐涎抹等癲癇常見癥狀。故治肝是治療癲癇的關鍵所在,治肝為本,治痰為標。在此理論基礎之上,本課題組主張治療癲癇應從肝論治,“從肝論治”癲癇多用《傷寒論》諸柴胡方加減,本課題組自擬中藥復方柴胡疏肝湯,在臨床上取得了滿意的治療效果。柴胡疏肝湯以柴胡桂枝湯為底方,配以四物湯,加用生龍牡、鉤藤,組成柴胡疏肝湯,諸藥合用,達到疏肝養(yǎng)肝、柔肝平肝、鎮(zhèn)肝潛陽之效。柴胡疏肝湯和定癇丸在臨床上治療癲癇都能取得較滿意的效果,但是二者的實驗抗癲癇療效是否相同,有何不同,目前還缺少此方面的研究,因此,本課題組從二者的藥效入手,比較二者的抗癲癇作用。本次研究結果顯示,柴胡疏肝湯中、高劑量組、定癇丸組和丙戊酸鈉組均可顯著延長急性PTZ致癇大鼠的發(fā)作性陣攣潛伏期(P<0.05),并且可以改善其癇性發(fā)作級別(P<0.01),而柴胡疏肝湯中劑量組、柴胡疏肝湯高劑量組、定癇丸組及丙戊酸鈉組對急性PTZ致癇大鼠的發(fā)作性陣攣潛伏期的影響差異無統(tǒng)計學意義,但是柴胡疏肝湯高、中劑量組的發(fā)作性陣攣潛伏期高于定癇丸組。在MES小鼠模型中,6個處理組間差異有統(tǒng)計學意義,丙戊酸鈉組、柴胡疏肝湯高、中劑量組和定癇丸組均可顯著降低小鼠的驚厥率,柴胡疏肝湯中、高劑量組的驚厥率低于定癇丸。柴胡疏肝湯高、中、低劑量組具有一定的量效關系。在士的寧驚厥小鼠模型中,6個處理組間差異有統(tǒng)計學意義,丙戊酸鈉組、柴胡疏肝湯高、中劑量組和定癇丸組均可顯著降低小鼠的驚厥率和死亡率,定癇丸組的驚厥率和死亡率介于柴胡疏肝湯中、高劑量組之間。柴胡疏肝湯高、中、低劑量組具有一定的量效關系。據(jù)此,我們可以推斷,癲癇無論是從痰論治,還是從肝論治,都能取得顯著的實驗室療效,甚至在某些方面,柴胡疏肝湯的抗癲癇作用可能強于定癇丸。近年來有關定癇丸的文獻報道較多,在此我們研究重點主要在于柴胡疏肝湯。柴胡為柴胡疏肝湯中的君藥,以往有報道,柴胡加龍骨牡蠣湯能治療癲癇。柴胡注射液能明顯抑制癲癇模型電活動,提示柴胡具有抗癇作用。柴胡皂苷部分、揮發(fā)油部分可能有抗癲癇的強直陣攣發(fā)作作用,水溶性部分可能對失神發(fā)作起拮抗作用。本課題組前期實驗發(fā)現(xiàn),柴胡總皂苷對青霉素和PTZ慢性致癇大鼠腦電圖及癇性發(fā)作有一定的改善作用,柴胡總皂苷和柴胡皂苷a具有抗小鼠MES驚厥作用,腹腔注射柴胡皂苷a對小鼠的強直性驚厥發(fā)生有較好的保護作用,并且存在量效關系的趨勢,柴胡皂苷a對PTZ誘導小鼠的癇性發(fā)作在120min內以60min、90min藥效作用較強。綜上所述,從肝論治癲癇的代表方柴胡疏肝湯及從痰論治癲癇的代表方定癇丸都具有顯著地抗驚厥、抗癲癇作用。那么二者的抗癲癇機制是否存在差異,在哪些方面存在差異,本課題組將進一步研究,探討二者抗癲癇機制的差別。1.1.1實驗動物SPF級雄性wistar大鼠60只,體重(200±20)g(動物合格證號:SCXK粵2006-0015);篩選符合MES模型條件的SPF級雄性昆明小鼠60只,體重(20±2)g(動物合格證號:SCXK粵2006-0015);另選SPF級雄性昆明小鼠60只(士的寧驚厥模型用),體重(20±2)g(動物合格證號:SCXK粵2006-0015),所有動物均購自南方醫(yī)科大學實驗動物中心。1.1.2藥品、藥品與儀器自擬中藥復方柴胡疏肝湯(柴胡、黃芩、半夏、黨參、桂枝、白芍、龍骨、牡蠣、當歸、川芎、鉤藤等)與定癇丸(天麻、川貝母、半夏、茯苓、茯神、膽南星、石菖蒲、全蝎、僵蠶、琥珀、陳皮等),以上藥材均購自廣州市寶芝林藥業(yè)有限公司;丙戊酸鈉片為湖南湘中制藥有限公司生產(chǎn),批號:081156;戊四唑(PT