鐵皮石斛多糖對(duì)易卒中型自發(fā)性高血壓大鼠生存期作用的研究

鐵皮石斛多糖對(duì)易卒中型自發(fā)性高血壓大鼠生存期作用的研究

隨著疾病的發(fā)展，高血壓經(jīng)常會(huì)破壞大腦、心臟和腎臟等重要的生命器官。腦中風(fēng)是高血壓器官損傷之一。臨床上腦血管?chē)?yán)重繼發(fā)病變-中風(fēng),已成為高血壓繼發(fā)病變致殘及死亡中的首位。隨著生活節(jié)奏的加快,膳食結(jié)構(gòu)的改變,運(yùn)動(dòng)不足,其發(fā)病年齡逐年提前,發(fā)病率正在進(jìn)一步上升。因此,開(kāi)展能夠有效改善高血壓患者的器官功能,延緩高血壓性腦血管損害進(jìn)展,防止高血壓病致殘致死的抗高血壓抗中風(fēng)藥物研究具有重要意義。鐵皮石斛為珍稀瀕危植物保護(hù)品種,為養(yǎng)陰生津傳統(tǒng)中藥材。本課題所用藥材來(lái)源于已有數(shù)千畝人工栽培基地并已通過(guò)“國(guó)家鐵皮楓斗高技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程”驗(yàn)收的合作研究單位,為開(kāi)展規(guī)范化研究和產(chǎn)品開(kāi)發(fā)打下了良好基礎(chǔ)。本課題在多次實(shí)驗(yàn)證明鐵皮石斛提取物對(duì)易卒中型自發(fā)性高血壓大鼠(SHR-sp)具有降低血壓、降低中風(fēng)發(fā)生率、延長(zhǎng)生存期作用取得良好效果的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步觀察鐵皮石斛多糖的作用,以明確其作用部位。1材料和方法1.1鐵皮石斛多糖和非多糖鐵皮石斛多糖和鐵皮石斛非多糖:均由浙江天皇藥業(yè)有限公司提供,鐵皮石斛多糖和非多糖均由鐵皮石斛水提取物分離得到。鐵皮石斛水提取物為同批鐵皮石斛多糖和非多糖分離前的提取物。1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及其兼用4周齡易卒中型自發(fā)性高血壓大鼠(SHR-sp):由中科院上海動(dòng)物中心提供。各組動(dòng)物10周齡開(kāi)始實(shí)驗(yàn),雌雄兼用。清潔級(jí)(SPF)動(dòng)物房飼養(yǎng)Wistar大鼠。1.3對(duì)小鼠多糖的分離和測(cè)定實(shí)驗(yàn)設(shè)鐵皮石斛多糖大、中、小劑量組(分別為1.0g生藥/kg、0.5g生藥/kg、0.25g生藥/kg中所分離得到的多糖);西藥尼莫地平組(20mg/kg);鐵皮石斛水提取物組(0.5g生藥/kg);鐵皮石斛非多糖組(0.5g生藥/kg中所分離得到的非多糖);SHR-Sp模型對(duì)照組、正常(Wistar)對(duì)照組(等容量生理鹽水),共8組。以上各組均每日灌胃1次,連續(xù)給藥12周。治療結(jié)束后停藥,繼續(xù)觀察9周。1.4觀察指標(biāo)和測(cè)量主要觀察治療過(guò)程(1～12周)和停藥后9周時(shí)各組大鼠血壓、生活情況、中風(fēng)發(fā)生情況(存活比例)、心臟、腦、腎臟重量/體重比。1.4.1動(dòng)物血壓檢測(cè)系統(tǒng)測(cè)定采用上海奧爾科特生物科技有限公司生產(chǎn)的ALC-NIBP無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈血壓測(cè)定分析系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)中,每周測(cè)量血壓1次,每次測(cè)量前和測(cè)量中進(jìn)行大鼠尾動(dòng)脈保溫(37℃)。每只動(dòng)物每次測(cè)量血壓時(shí),均測(cè)量3次,取平均值。測(cè)量血壓時(shí)間:各組治療用藥后(90±10)分鐘測(cè)量血壓。1.4.2生存率、生存期和中風(fēng)觀察各組大鼠生存死亡(中風(fēng))的時(shí)間和數(shù)量。1.4.3心、腦、腎器官的重量和體重動(dòng)物死亡或處死時(shí)觀察并記錄體重和心、腦、腎臟器重量,計(jì)算其臟器/體重比。1.5統(tǒng)計(jì)方法計(jì)量資料進(jìn)行t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。治療12周、停藥后9周血壓和生存天數(shù)的多組比較采用F檢驗(yàn)。2高血壓大鼠大風(fēng)反應(yīng)及死亡情況各組高血壓模型大鼠的生活情況與正常對(duì)照組未見(jiàn)明顯差異,高血壓模型大鼠在捕捉時(shí)、測(cè)量血壓時(shí)比正常對(duì)照組大鼠易激怒。各組高血壓模型大鼠在病情較重時(shí)或發(fā)生中風(fēng)前多出現(xiàn)少活動(dòng)、精神萎靡、易激怒、攻擊性強(qiáng)、站立不穩(wěn)、行動(dòng)遲緩、抖動(dòng)等表現(xiàn),中風(fēng)后有的立即死亡,有的出現(xiàn)下肢癱瘓或偏癱、活動(dòng)困難、爬行轉(zhuǎn)圈、易激怒、攻擊性強(qiáng)等類(lèi)似人類(lèi)的中風(fēng)癥狀。各組高血壓模型大鼠中風(fēng)后存活的,全都在存活一段時(shí)間后再次發(fā)生中風(fēng)死亡。中風(fēng)后存活期間的動(dòng)物單獨(dú)喂養(yǎng),飲食有困難的進(jìn)行人工輔助喂養(yǎng)。見(jiàn)表1。見(jiàn)表2。見(jiàn)表3。見(jiàn)表4。3鐵皮石斛對(duì)shr-sp大鼠的作用高血壓病是以體循環(huán)壓力增高為主要表現(xiàn)的臨床綜合征,是最常見(jiàn)的心血管疾病。腦卒中是世界上發(fā)病率和死亡率都很高的疾病之一,高血壓是腦卒中最重要的危險(xiǎn)因素。臨床試驗(yàn)已經(jīng)證明降低血壓可減少腦卒中的發(fā)生,血壓處于正常偏高值(17.3～18.3/10.7～11.3kPa)者的腦卒中的發(fā)生率也很高。研究證明,抗高血壓制劑,包括鈣通道阻滯劑(CCBs)、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制劑和血管緊張素-Ⅱ受體拮抗劑(ARBs),可有效降低血壓,而且可減少高風(fēng)險(xiǎn)患者的腦卒中。但中藥在這方面研究很少。高血壓的動(dòng)物模型,目前已通過(guò)遺傳學(xué)的方法制造出遺傳性高血壓(SHR)及易中風(fēng)(SHR-sp)的模型,引起了學(xué)術(shù)界的高度重視。SHR-sp的腦出血部位、病理改變和腦血管癥狀與人類(lèi)腦卒中相似。研究結(jié)果能較可靠地反應(yīng)藥物在人類(lèi)原發(fā)性高血壓病治療中的抗中風(fēng)作用,故本實(shí)驗(yàn)采用此模型。鐵皮石斛為養(yǎng)陰的代表藥物,具有補(bǔ)而不膩,清而不傷胃及健胃的特點(diǎn),歷代文獻(xiàn)對(duì)石斛早有記載,早在中藥經(jīng)典著作《神農(nóng)本草經(jīng)》中有其藥性、功能、主治范圍等的描述:“石斛,一名林蘭。味甘,無(wú)毒。主傷中,除痹,下氣,補(bǔ)五臟虛勞羸瘦,強(qiáng)陰。久服厚腸胃,輕身延年?！薄秳e錄》:“益精,補(bǔ)內(nèi)絕不足,平胃氣……”?！侗静菥V目拾遺》:“清胃除虛熱,生津,已勞損,以之代茶,開(kāi)胃健脾,定驚療風(fēng),能鎮(zhèn)涎痰,解暑,甘芳降氣。”《本草再新》:“理胃氣,清胃火,除心中煩熱,療腎經(jīng)虛熱,安神定志,解盜汗,能散暑”。歷代醫(yī)藥書(shū)籍中有很多關(guān)于石斛的記載,證明石斛具有良好的補(bǔ)益功能和清虛熱、降虛火作用,同時(shí)其作用范圍非常廣泛。高血壓屬中醫(yī)學(xué)“眩暈”、“頭痛”等范疇,中醫(yī)理論認(rèn)為由于陰虛或陰虛陽(yáng)亢引起,根據(jù)高血壓的病機(jī)特點(diǎn),養(yǎng)陰為高血壓中醫(yī)藥治療的基本法則;中風(fēng)多由于肝腎陰虛、陽(yáng)亢化風(fēng)引起,肝腎陰虧為“本”,肝風(fēng)上擾為“標(biāo)”。鐵皮石斛滋養(yǎng)肝腎陰津,為一平補(bǔ)之品,能較長(zhǎng)期應(yīng)用,或配合降壓藥應(yīng)用,可謂釜底抽薪的“治本”之法。其降壓效果雖然沒(méi)有西藥快,但具有多靶點(diǎn)、全身兼顧的特點(diǎn)。本研究結(jié)果證明鐵皮石斛多糖對(duì)SHR-sp大鼠具有緩和持久的降低血壓作用,對(duì)SHR-sp大鼠具有延長(zhǎng)生存時(shí)間、提高生存率、預(yù)防中風(fēng)的作用。鐵皮石斛非多糖對(duì)SHR-sp大鼠在治療12周中有一定作用,但作用較多糖