中藥蠶砂抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究

中藥蠶砂抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究

蠶沙是蠶矢科的一種蝴蝶科蠶蟲。它是蠶卵科昆蟲家蠶幼蟲的干燥糞便。因為蠶繭是晚蠶的第一種更好的疾病，所以它也被稱為晚蠶沙和原蠶沙。屬于傳統(tǒng)的昆蟲中藥。蠶砂性味辛、溫,歸肝、脾經(jīng),具有祛風除濕、和胃化濁、活血通絡等功效。《本草綱目》記載其可“治消渴,癮結(jié),及婦人血崩,頭風,風赤眼,去風除濕”?！侗静菰傩隆诽岬狡洹爸物L濕遏伏于脾家,筋骨疼痛,皮膚發(fā)腫,腰腿疼痛,血瘀血少,痘科漿饜不起,亦宜用之”。蠶砂含有多種化學成分,如葉綠素、果膠、葉酸、茄尼醇、生物堿等。現(xiàn)代藥理學研究表明,蠶砂具有抗腫瘤、降血糖、改善貧血、抗氧化、消炎抑菌及治療口腔潰瘍的作用,被廣泛地應用于藥品、保健品和化妝品等領域。其臨床上主要用于治療創(chuàng)傷性滑膜炎、慢性滑膜炎、骨性關(guān)節(jié)炎性疾病。但目前對蠶砂抗炎鎮(zhèn)痛作用的臨床前實驗研究尚屬空白。本實驗采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法、角叉菜膠致足跖腫脹法、熱板法、醋酸扭體法觀察蠶砂水提液的抗炎鎮(zhèn)痛作用,現(xiàn)報道如下。1實驗材料1.1yls-6b智能熱板儀-3-臨床教AL204JY4001電子天平(上海精密科學儀器有限公司);YLS-6B智能熱板儀(山東省醫(yī)學科學院設備站);YLS-7A足趾容積測量儀(山東省醫(yī)學科學院設備站)。1.2上海化學試劑蠶砂(購于上海養(yǎng)和堂);阿司匹林片(山西臨汾寶珠制藥廠,批號:20090706);二甲苯(分析純,國藥集團上?；瘜W試劑,批號:20090218);冰醋酸(分析純,國藥集團上?；瘜W試劑,批號:20080318);角叉菜膠(Sigma,貨號C1013)。蠶砂水煎液制備方法:每次取蠶砂8g,加10倍蒸餾水(即80mL)以及沸石,置于圓底燒瓶中回流提取2h,過濾后改用直火加熱,濃縮成0.2g生藥/mL的溶液,置于4℃下保存?zhèn)溆谩?.3上海中醫(yī)藥動物中心提供昆明種小白鼠,清潔級,體重18~22g,由上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供(批號:SCXK(滬)2007-0005)。實驗室保持安靜通風,室溫20~25℃,濕度(70±15)%。2方法2.1材料22分4批購買140只昆明小鼠,前3批每批30只,第4批50只(用于熱板實驗合格小鼠篩選,合格數(shù)為30只)。適應性飼養(yǎng)5天后,稱量并記錄每只小鼠體重,根據(jù)隨機數(shù)字表法按體重值將小鼠分為3組(熱板實驗小鼠篩選后稱重分組):模型組、阿司匹林30mg/kg劑量組、蠶砂2000mg/kg劑量組,給藥容積均為10mL/kg,模型組ig給予蒸餾水,藥物干預組ig給予相應劑量藥物,1天1次,連續(xù)給藥7天。2.2耳廓水腫度測定選擇雄性小鼠30只,按“2.1”項所述方法分組給藥,末次給藥30min后,于每只小鼠右耳正反兩面涂上二甲苯50μL致炎,1h后脫頸椎處死動物,用直徑9mm打孔器沖下左耳和右耳同一部位的圓片,于分析天平上稱重,計算耳廓腫脹度(耳廓腫脹度=右耳片重-左耳片重),并計算耳廓腫脹率,其中耳廓腫脹率=(右耳片重-左耳片重)/左耳片重×100%。2.3足跖水腫測定選取雄性小鼠30只,末次給藥30min后,于每只小鼠右后肢足掌遠端進針至踝關(guān)節(jié)附近后皮下注射1%角叉菜膠0.1mL,分別于注射完成1h、3h和6h時,用足趾腫脹儀測量小鼠足跖腫脹體積,計算腫脹率,其中腫脹率(%)=(致炎后足跖容積值-致炎前足跖容積值)/致炎前足跖容積值×100%。2.4血藥濃度與痛行為所需時間s調(diào)定熱板儀溫度使之恒定于(55±0.5)℃。取雌性小鼠數(shù)只,置于熱板儀上,按“開始”鍵記錄時間,自放入熱板儀起至出現(xiàn)舔后足現(xiàn)象所需的時間(s)作為該鼠的痛閾值,凡逃避或在30s內(nèi)不舔足者棄置不用。篩選合格的雌性小鼠30只,分組與給藥方法同“2.1”項所述,于末次給藥30min后進行熱板實驗,測定小鼠痛閾值及痛閾提高值,其中痛閾提高值=給藥后痛閾值-給藥前痛閾值。2.5小鼠扭體次數(shù)試驗選取昆明小鼠30只,雌雄各半,分組與給藥同“2.1”項,于末次給藥30min后,給予每只小鼠腹腔注射0.2mL的0.6%冰醋酸,記錄20min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)。2.6統(tǒng)計處理實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標差(ue0af±s)表示,實驗數(shù)據(jù)采用SPSS15.0軟件分析,P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。3結(jié)果3.1家蠶砂對二甲苯引起的老鼠耳廓腫脹的影響與模型組相比,阿司匹林與蠶砂給藥組可顯著降低小鼠耳廓腫脹率(P<0.01),結(jié)果見表1。3.2大鼠足跖水腫率與模型組相比,造模3h后,蠶砂給藥組能顯著降低小鼠足跖腫脹率(P<0.05)。造模6h后,與模型組相比,阿司匹林與蠶砂給藥組均能顯著降低小鼠足跖腫脹率(P<0.01或P<0.05),結(jié)果見表2。3.3家蠶砂對熱板法大鼠疼痛閾值的影響與模型組相比,阿司匹林與蠶砂給藥組小鼠的痛閾值顯著升高(P<0.05),結(jié)果見表3。3.4家蠶砂對冰醋酸引起的大鼠疲勞次數(shù)的影響與模型組相比,阿司匹林與蠶砂能顯著抑制冰醋酸誘導的小鼠扭體反應,減少扭體次數(shù)(P<0.05),結(jié)果見表4。4蠶砂的抗炎作用機制蠶砂具有祛風除濕的功效,臨床上用于治療創(chuàng)傷性滑膜炎、慢性滑膜炎、骨性關(guān)節(jié)炎?，F(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn),炎癥因子過度表達可能是誘發(fā)風濕性、類風濕性疾病的重要原因之一,而抗炎鎮(zhèn)痛作用是否為蠶砂治療風濕的作用機制,仍尚不明確。本實驗采用熱板法、扭體法觀察蠶砂的鎮(zhèn)痛作用,采用小鼠耳廓腫脹和足趾腫脹實驗觀察蠶砂的抗炎作用。結(jié)果顯示蠶砂可顯著減少醋酸引起的小鼠疼痛模型的扭體次數(shù),提高熱板實驗中小鼠的痛閾值,抑制二甲苯引起的小鼠耳腫脹和角叉菜膠導致的小鼠足趾腫脹,提示蠶砂具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用,可能是蠶砂治療風濕性疾病的作用機制之一