加味甘麥大棗湯對(duì)海馬區(qū)bdnf表達(dá)的影響

加味甘麥大棗湯對(duì)海馬區(qū)bdnf表達(dá)的影響

抑郁是一種常見(jiàn)的心理疾病，主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的長(zhǎng)期抑郁、缺乏、興趣低下、飲食缺乏、睡眠障礙、焦慮和多焦慮。通常伴有全身多系統(tǒng)的不同客觀檢查不一致的身體不適。在嚴(yán)重的情況下，你可能會(huì)自殺或思考。抑郁癥的發(fā)病機(jī)制尚未明確,在抑郁癥發(fā)病機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)的表達(dá)有重要意義。研究表明急性和慢性應(yīng)激均可導(dǎo)致海馬的BDNF的水平下降,持續(xù)的抗抑郁藥物治療可以增加BDNF的表達(dá)并防止應(yīng)激誘發(fā)的BDNF下降。目前,關(guān)于中醫(yī)藥治療抑郁癥的研究比較廣泛。有研究表明,甘麥大棗湯有一定的抗抑郁作用,但其效果不是很明顯。本實(shí)驗(yàn)中的加味甘麥大棗湯是甘麥大棗湯基礎(chǔ)上加入遠(yuǎn)志、石菖蒲、北秫米、姜半夏、郁金而形成的。本文是從加味甘麥大棗湯對(duì)慢性輕度不可預(yù)見(jiàn)性抑郁癥動(dòng)物模型的腦區(qū)改變,利用行為學(xué)及免疫組織化法觀察加味甘麥大棗湯對(duì)抑郁癥大鼠海馬BDNF表達(dá)的影響。1材料和方法1.1材料：如下所述1.1.1物中心提供雄性SD大鼠40只,體重220±20g,清潔級(jí)動(dòng)物。由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為4組即正常對(duì)照組(10ml/Kg生理鹽水)模型組(10ml/Kg生理鹽水)西藥組(0.4mg/ml/㎏鹽酸氟西汀)中藥組(2g/ml/㎏)各組均灌胃給藥,每天1次,連續(xù)22天。1.1.2加味甘麥病料鹽酸氟西汀膠囊(上海中西制藥有限公司,產(chǎn)品批號(hào):090402)、加味甘麥大棗湯(浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)門(mén)診部提供:小麥336g,甘草、大棗、石菖蒲、姜半夏、郁金各100.8g,遠(yuǎn)志67.2g,北秫米134.4g)、BDNF一抗及二抗試劑盒(博奧森生物技術(shù)有限公司)。1.1.3國(guó)外研究現(xiàn)狀Nikoneclipse80i顯微鏡(Nikon公司)、CCDDS-Fi1500萬(wàn)象素(Nikon公司)、CarlZeissImagingSystems(CarlZeiss公司)。1.2方法：描述如下1.2.1應(yīng)激刺激連續(xù)給藥慢性不可預(yù)知溫和應(yīng)激刺激動(dòng)物模型的制備:正常對(duì)照組動(dòng)物不給予任何刺激;其它各組動(dòng)物連續(xù)給藥22天,在前21天中受到的應(yīng)激刺激包括:24h禁食,4℃冷水中游泳5min,24h禁水,1h水平方向高速搖晃,45℃熱水刺激5min,1min夾尾,無(wú)刺激,每日隨機(jī)給予一種刺激。1.2.2lh-實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的活性第22天將正常對(duì)照組動(dòng)物放入水深15cm的玻璃缸(圓柱形,直徑18cm,高40cm)中,水溫25℃,測(cè)定在5min內(nèi)保持漂浮不動(dòng)的時(shí)問(wèn);其它各組動(dòng)物在末次給藥lh后,進(jìn)行與正常對(duì)照組動(dòng)物相同的實(shí)驗(yàn)。記錄比較中藥組,西藥組,正常對(duì)照組和模型組在5min內(nèi)保持漂浮不動(dòng)的時(shí)間。1.2.3多聚甲醛溶液各組大鼠給予過(guò)量的水合氯醛處死,采用內(nèi)固定法,從左心室插管后,迅速剪開(kāi)右心耳,灌注生理鹽水250ml,大鼠眼球及肝臟變白后,繼續(xù)灌注4%的多聚甲醛溶液500ml左右。灌注結(jié)束后,開(kāi)顱取腦,去除嗅球和腦干,由視交叉平面冠狀切取組織塊放于4%多聚甲醛固定置于4℃保存2～3天,然后取出標(biāo)本脫水,透明,石蠟包埋,于視交叉處連續(xù)冠狀切片,片厚5μm,切片置于4℃保存?zhèn)溆谩?.2.4dab顯色片切片脫蠟至水,蒸餾水洗2min;高壓熱修復(fù);3%H2O2溶液阻斷過(guò)氧化物酶,10min;蒸餾水洗2min,PBS洗3min;滴加一抗,37℃孵育1h;流水沖洗3min,蒸餾水洗3min,PBS洗5min;滴加二抗,37℃孵育60min;流水沖洗3min,蒸餾水洗3min,PBS洗5min;DAB顯色2min;復(fù)染、透明后封片;圖像分析。2結(jié)果2.1對(duì)大鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間的影響與正常對(duì)照組相比,其它3組累計(jì)不動(dòng)時(shí)間均有不同程度的延長(zhǎng),說(shuō)明模型制作成功,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);與對(duì)照組相比,西藥組與中藥組大鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間均有減少,(P<0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而中藥組與西藥組相比,西藥組大鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間雖短于中藥組,但兩者間無(wú)明顯差異(P>0.05)。2.2組陽(yáng)性表達(dá)面積的比較與正常對(duì)照組相比,其它3組陽(yáng)性面積均有顯著減少(P<0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;與對(duì)照組相比,西藥組與中藥組陽(yáng)性表達(dá)面積均有增加(P<0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;中藥組與西藥組相比,西藥組陽(yáng)性表達(dá)反應(yīng)面積大于中藥組,但兩者間無(wú)明顯差異,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。3對(duì)抑郁癥大鼠血清中brba的影響目前治療抑郁癥的臨床藥物是以西藥為主的,但是,抗抑郁西藥具有易產(chǎn)生耐藥性和副作用多等不利因素,使得其臨床應(yīng)用受到極大限制。而中藥復(fù)方具有成分多、作用環(huán)節(jié)多、靶點(diǎn)多的特點(diǎn),盡管單一成份含量低,作用不明顯,但可通過(guò)多靶點(diǎn)起作用,產(chǎn)生協(xié)同效益。既彌補(bǔ)了有效成份含量低的欠缺,也降低了副作用。因此,對(duì)于研究中藥復(fù)方的抗抑郁作用也越來(lái)越廣泛。甘麥大棗湯,出自張仲景《金匱要略》:“婦人臟躁,喜悲傷欲哭,象如神靈所作,數(shù)欠伸,甘麥大棗湯主之?！迸K躁的表現(xiàn)為精神失常,無(wú)故悲傷欲哭,頻作欠身,神疲乏力等。還常伴有心煩失眠,情緒易于波動(dòng)等。本病多因憂思過(guò)度導(dǎo)致心陰受損,肝氣失和所致。這與抑郁癥的心理學(xué)病因類(lèi)似,也與抑郁癥的臨床表現(xiàn)有相似之處。加味甘麥大棗湯是在甘麥大棗湯基礎(chǔ)上加入遠(yuǎn)志、石菖蒲、北秫米、姜半夏、郁金而形成的。遠(yuǎn)志,寧心安神、祛痰開(kāi)竅;石菖蒲,開(kāi)竅凝神、化濕和胃;北秫米,和胃安眠;半夏,燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié);郁金,活血行氣止痛、解郁清心。諸藥合用,可起到寧心安神、解郁行氣的作用。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中我們可以看出,中藥組與西藥組大鼠累計(jì)不動(dòng)時(shí)間與正常對(duì)照組相比均有不同程度的延長(zhǎng)、與模型組相比均有減少,說(shuō)明加味甘麥大棗湯與鹽酸氟西汀均有一定的治療效果,但是鹽酸氟西汀組不動(dòng)時(shí)間短于加味甘麥大棗湯組。腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子屬于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族,在成年哺乳動(dòng)物腦內(nèi)廣泛表達(dá),在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持中起至關(guān)重要的作用。廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,尤其是大腦皮層和海馬區(qū)。對(duì)神經(jīng)元的存活、分化、生長(zhǎng)和突觸形成、突觸連接及維持神經(jīng)元正常的生理功能起著關(guān)鍵作用。有資料表明,重癥抑郁患者血清BDNF水平較正常對(duì)照組明顯降低,經(jīng)有效抗抑郁治療后,血清BDNF明顯升高。分子遺傳學(xué)研究亦提示BDNF基因可能與抑郁癥的病因有關(guān)。在應(yīng)激抑郁動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn),長(zhǎng)時(shí)間暴露于應(yīng)激會(huì)減少BDNF表達(dá),對(duì)抑郁動(dòng)物模型給予抗抑郁治療,可以上調(diào)海馬區(qū)BDNF的生成,減少海馬區(qū)內(nèi)BDNFmRNA,可以阻斷抗抑郁藥物的治療作用,給予外源性BDNF也可以起到抗抑郁作用。結(jié)合本實(shí)驗(yàn),可見(jiàn)慢性應(yīng)激可引起B(yǎng)DNF的減少,與對(duì)照組相比,其它3組陽(yáng)性表達(dá)面積均有增加,與正常組相比,加味甘麥大棗湯組、鹽酸氟西