非去極化肌松藥對(duì)分孕期sd大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響

非去極化肌松藥對(duì)分孕期sd大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響

非選擇性肌肉松弛藥也稱為競(jìng)爭(zhēng)肌肉松弛藥，它可以與ach競(jìng)爭(zhēng)神經(jīng)肌肉相連的氮和m-m膽堿受體。然而，它并不激活受體，它可以競(jìng)爭(zhēng)，阻止ach的脫極化作用，放松骨骼和肌肉。通過對(duì)氣管及心臟平滑肌功能研究表明,非去極化肌松藥具有M2和M3受體的拮抗劑作用。Eglen等研究證實(shí)子宮平滑肌存在M受體,然而非去極化肌松藥對(duì)子宮平滑肌收縮功能的影響尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)量非去極化肌松藥羅庫(kù)溴銨和順式阿曲庫(kù)銨對(duì)SD大鼠離體子宮平滑肌收縮功能的改變,及神經(jīng)肌肉阻斷藥對(duì)其功能的影響,為這類藥物的婦產(chǎn)科臨床應(yīng)用提供參考。1材料和方法1.1動(dòng)物清潔級(jí)SD雌性孕鼠40只,體質(zhì)量(287.4±18.1)g(213.8~311.2g),購(gòu)自第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。1.2順式阿曲庫(kù)銨試劑氯化乙酰膽堿(Sigma公司,配制成0.01mol/L溶液);羅庫(kù)溴銨(歐加農(nóng)公司,5ml∶50mg,401759,2011.07);順式阿曲庫(kù)銨(江蘇恒瑞公司,10mg粉劑,09050993,2010.11.8);縮宮素(信誼公司,1ml∶2μg,081209,2010.11);新斯的明(信誼公司,2ml∶1mg,081203,2011.11.21)?？耸弦?mmol/L):pH7.4,NaCl118,KCl4.7,MgSO41.2,NaHCO32.5,CaCl22.5,Glucose11.1。1.3實(shí)驗(yàn)裝置與分析方法本實(shí)驗(yàn)實(shí)施場(chǎng)所為第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)室。ALC-T3離體組織器官實(shí)驗(yàn)裝置,上海奧爾科特生物科技有限公司;四通道MPA2000-ALCB10多道生物信號(hào)分析儀;WindowsXP操作系統(tǒng)。1.4羅庫(kù)溴銨+縮宮素組n=40實(shí)驗(yàn)共分5組:空白組,即乙酰膽堿組(n=40);羅庫(kù)溴銨+縮宮素組(n=40);羅庫(kù)溴銨+新斯的明組(n=40);順式阿曲庫(kù)銨+縮宮素組(n=40);順式阿曲庫(kù)銨+新斯的明組(n=40)。1.5羅庫(kù)溴銨標(biāo)準(zhǔn)分娩24h內(nèi)SD雌性大鼠,頸椎脫臼法處死,取子宮組織并分離去除周圍脂肪及結(jié)締組織。每只SD鼠取子宮平滑肌標(biāo)本10mm組織塊4~5塊。子宮平滑肌組織塊懸掛于ALC-T3離體組織器官實(shí)驗(yàn)裝置上,浴槽中注入pH7.4克氏液20ml,溫度37℃,并通入混合氧(95%O2+5%CO2),下端固定,上端與張力換能器相連,換能器連接多導(dǎo)信號(hào)記錄儀,信號(hào)轉(zhuǎn)錄于電腦中。標(biāo)本給予2g前負(fù)荷,平衡后,給予0.01mol/L乙酰膽堿20μl,平穩(wěn)15min后記錄平滑肌收縮平均值。分別由濃度從低到高的順序給藥:羅庫(kù)溴銨10-5~10-2mol/L,順式阿曲庫(kù)銨10-6~10-3mol/L,縮宮素10-8~10-6mol/L,新斯的明10-5~10-3mol/L。每次給藥20μl,間隔2min,分別記錄各加藥時(shí)間內(nèi)平滑肌收縮平均值。1.6數(shù)據(jù)處理及分析數(shù)據(jù)采用SPSS17.0進(jìn)行處理,SigmaPlot11作圖。數(shù)據(jù)以表示,各組間比較采用可重復(fù)測(cè)量資料的方差分析;應(yīng)用LSD法對(duì)各組間差異進(jìn)行差異比較,檢驗(yàn)水平(α)為0.05。2結(jié)果2.1圖12子宮平滑肌經(jīng)乙酰膽堿孵育后,給予羅庫(kù)溴銨和順式阿曲庫(kù)銨均可使子宮平滑肌收縮力下降(圖1)。數(shù)據(jù)經(jīng)平滑肌收縮幅度百分比=實(shí)驗(yàn)組收縮幅度/對(duì)照組收縮幅度×100%處理,取收縮幅度百分比為Y軸,時(shí)間為X軸作圖(圖2),可見羅庫(kù)溴銨組和順式阿曲庫(kù)銨組收縮幅度百分比均明顯下降,組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。2.2縮宮素和新斯的明對(duì)平滑收縮力的影響經(jīng)乙酰膽堿及非去極化肌松藥作用于子宮平滑肌后,分別給予縮宮素和新斯的明,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。將縮宮素和新斯的明對(duì)平滑肌收縮力的影響數(shù)據(jù)分開處理,以平滑肌收縮幅度百分比為Y軸,時(shí)間為X軸作圖(圖3),可見縮宮素與新斯的明均能使子宮平滑肌收縮力升高,組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),且縮宮素的作用更強(qiáng),組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3肌松藥對(duì)m型膽堿受體的作用肌松藥即骨骼機(jī)松弛藥,在臨床上常作為全身麻醉輔助劑,減少全麻藥的用量。按其作用機(jī)制,可分為去極化肌松藥和非去極化肌松藥。非去極化肌松藥能與ACh競(jìng)爭(zhēng)神經(jīng)肌肉接頭的N和M膽堿能受體;但不激動(dòng)受體,能競(jìng)爭(zhēng)性阻斷ACh的去極化作用,使骨骼肌松弛。N和M膽堿能受體擁有同一種內(nèi)源性配基ACh;并且兩種受體在多種組織中共存,兩者之間存在著多種相互作用。副交感神經(jīng)節(jié)后神經(jīng)N受體可通過刺激膽堿能神經(jīng)纖維末梢釋放ACh來(lái)調(diào)節(jié)組織中M受體的功能;而膽堿能神經(jīng)元突觸后N受體的活性也可被突觸前膜上M和N的自受體通過反饋調(diào)控節(jié)前纖維ACh的釋放來(lái)調(diào)節(jié)。另外,N受體被阻斷或失敏后不同組織中M受體的功能會(huì)發(fā)生不同的變化,使機(jī)體膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)維持在一個(gè)穩(wěn)定狀態(tài)。羅庫(kù)溴銨和順式阿曲庫(kù)銨均屬于中效非去極化肌松藥,順式阿曲庫(kù)銨與阿曲庫(kù)銨屬于同分異構(gòu)體,在臨床使用過程中組胺釋放作用較弱。本次實(shí)驗(yàn)根據(jù)人羅庫(kù)溴銨和順式阿曲庫(kù)銨ED95和ED50劑量,按徐淑云等的方法進(jìn)行折算,并換算為摩爾濃度。結(jié)果表明這兩種藥物均可使子宮平滑肌收縮力減弱,提示非去極化肌松藥對(duì)存在于平滑肌組織中的M型膽堿受體產(chǎn)生拮抗作用,此結(jié)論與以往對(duì)氣管、心肺組織和輸尿管平滑肌的研究結(jié)果一致。新斯的明屬于抗膽堿酯酶藥物,可與膽堿酯酶結(jié)合,形成新斯的明和膽堿酯酶的復(fù)合物,但水解速度較乙?；憠A酯酶慢,故膽堿酯酶被抑制的時(shí)間較長(zhǎng),突觸間隙的乙酰膽堿堆積,激動(dòng)膽堿受體,表現(xiàn)為M和N樣作用。其中對(duì)骨骼肌的興奮作用最強(qiáng),因?yàn)樗ㄟ^抑制膽堿酯酶而發(fā)揮作用外,還能直接激動(dòng)骨骼肌運(yùn)動(dòng)終板上的N2膽堿受體以及促進(jìn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)末梢釋放乙酰膽堿;其次對(duì)胃腸道和膀胱平滑肌也有較強(qiáng)的興奮作用,但對(duì)血管、腺體、眼和支氣管平滑肌作用較弱。目前所知,非去極化肌松藥主要作用于N2膽堿受體。但是,越來(lái)越多研究表明,肌松藥具有M型受體拮抗作用。且M和N受體之間存在相互作用。目前明確平滑肌上存在M受體,子宮不同部位受體可能存在差異,尚沒有找到N受體?？s宮素和血管加壓素是垂體后葉激素的兩種主要成分,都先在下丘腦的視上核與室旁核的神經(jīng)元內(nèi)合成大分子的前激素,然后與載體———后葉激素運(yùn)載蛋白(neurophysin)結(jié)合成為復(fù)合體。已證明在人子宮平滑肌有縮宮素受體,故認(rèn)為縮宮素通過與受體結(jié)合而發(fā)揮作用。妊娠期間縮宮素受體數(shù)量增加。鈣通道的開放引起Ca2+的內(nèi)流也參與縮宮素的作用機(jī)制。也有認(rèn)為縮宮素作用于蛻膜的受體,促進(jìn)PGF2α及PGF2α的代謝物,13,14-二氫-15-酮PGF2α(PGFM)的合成。前列腺素,尤其是PGFM能興奮子宮并使子宮頸變軟、展平及擴(kuò)張。也發(fā)現(xiàn)在縮宮素引產(chǎn)成功的孕婦血漿中PGF和PGFM含量明顯升高。Dittrich等研究表明M受體激動(dòng)劑、縮宮素和前列腺素系統(tǒng)參與子宮平滑肌的收縮,本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示縮宮素和新斯的明均可增強(qiáng)子宮平滑肌收縮,后者作用相對(duì)較弱。此結(jié)論支持Kitazawa等的研究結(jié)果。考慮新斯的明較縮宮素對(duì)子宮平滑肌作用弱的原因,推斷可能是兩者收縮機(jī)制的差異,縮宮素-縮宮素受體是公認(rèn)的子宮平滑肌收縮的最主要機(jī)制之一。氨甲酰膽堿介導(dǎo)收縮是近年探討的新的子宮收縮途徑,而新斯的明間接通過阻止膽堿酯酶水解乙酰膽堿來(lái)實(shí)現(xiàn)收縮作用,其在子宮收縮中的作用可能相當(dāng)有限。本研究中順式阿曲庫(kù)銨與羅庫(kù)溴銨,可導(dǎo)致SD大鼠子宮平滑肌收縮功能抑制。其效應(yīng)與M受體的強(qiáng)效拮抗劑作用類似。原因可能是N受體與M受體存在相互調(diào)節(jié)作用。非去極化肌松藥導(dǎo)致N受體失敏,失敏態(tài)N受體通過M受體作用使平滑肌收縮抑制。乙酰膽堿與縮宮素對(duì)子宮平滑肌收縮作用不完全相同;新斯的明在離體子宮平滑肌實(shí)驗(yàn)中,可增強(qiáng)平滑肌收縮功能。子宮不同部位可能存在M