分子診斷學(xué)：臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制

臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制第二十章12儀器和外部供應(yīng)品345678臨床分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與環(huán)境儀器和檢測(cè)系統(tǒng)的維護(hù)、功能檢查和校準(zhǔn)質(zhì)量體系文件檢測(cè)方法與性能評(píng)價(jià)全過程質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制（IQC)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA)CONTENTS實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施與環(huán)境第一節(jié)1234PCR開始用于臨床檢測(cè)暫停臨床PCR檢測(cè)臨床PCR室管理暫行辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號(hào)）醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2010]194號(hào)）年份199019982002我國(guó)PCR發(fā)展回顧2010PCR實(shí)驗(yàn)操作要求在四個(gè)不同的區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，嚴(yán)格預(yù)防PCR的污染：1、試劑準(zhǔn)備區(qū)，試劑的配制，PCR反應(yīng)液混合；2、標(biāo)本處理區(qū)，包括擴(kuò)增模版的制備；3、PCR擴(kuò)增區(qū)，PCR擴(kuò)增；4、PCR產(chǎn)物分析區(qū)，包括PCR產(chǎn)物雜交、凝膠電泳分析、拍照及膠回收等。各工作區(qū)必須有一定的隔離，各區(qū)實(shí)驗(yàn)器材需專用，并且各區(qū)設(shè)置要有一定的方向性：試劑準(zhǔn)備—標(biāo)本制備—PCR擴(kuò)增—產(chǎn)物分析—產(chǎn)物處理。切記PCR擴(kuò)增產(chǎn)物及產(chǎn)物分析區(qū)的器材不要拿到標(biāo)本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)。實(shí)驗(yàn)室設(shè)置12理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置A理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置B實(shí)驗(yàn)室設(shè)置實(shí)驗(yàn)室設(shè)置非理想的PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置實(shí)驗(yàn)室設(shè)置1234各區(qū)獨(dú)立注意風(fēng)向因地制宜方便工作“十六字”口訣檢測(cè)方法與性能評(píng)價(jià)第二節(jié)圖繪制完成情況工作不足明年計(jì)劃01根據(jù)檢測(cè)目的選擇02根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)特點(diǎn)和實(shí)驗(yàn)條件選擇03根據(jù)本地患者的承受能力選擇一、檢測(cè)方法的選擇二、檢測(cè)性能評(píng)價(jià)1234準(zhǔn)確度精密度靈敏度特異性56檢測(cè)限可報(bào)告范圍與生產(chǎn)商提供的數(shù)據(jù)相比較，兩者應(yīng)相符儀器和外部供應(yīng)品第三節(jié)13圖繪制完成情況工作不足明年計(jì)劃01使用準(zhǔn)確可靠、滿足臨床需要、性價(jià)比高的儀器和外部供應(yīng)品02試劑盒須獲得生產(chǎn)許可證及SFDA頒發(fā)的產(chǎn)品注冊(cè)登記證03外部供應(yīng)品超出有效期、變質(zhì)或質(zhì)量不符要求時(shí)，應(yīng)停止使用04不同批號(hào)試劑盒中的成分不能相互交換點(diǎn)擊輸入您的標(biāo)題內(nèi)容一、儀器和外部供應(yīng)品的選擇和使用原則儀器疾病穩(wěn)定性、有效期3ContentsPage試劑盒選擇原則二、儀器設(shè)備的管理儀器身份識(shí)別名稱編號(hào)型號(hào)購(gòu)置日期上次校準(zhǔn)時(shí)間下次校準(zhǔn)時(shí)間儀器檔案生產(chǎn)廠家到貨日期投入使用時(shí)間存放地點(diǎn)校準(zhǔn)、維護(hù)記錄維修記錄名稱、編號(hào)、型號(hào)儀器說明書圖繪制完成情況工作不足明年計(jì)劃01國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品、為凍干品、用來校準(zhǔn)二級(jí)及三級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品02國(guó)家或地區(qū)標(biāo)準(zhǔn)品，可用來維持校準(zhǔn)，在國(guó)家范圍內(nèi)使用03是實(shí)驗(yàn)室測(cè)定中使用的標(biāo)準(zhǔn)品，其值可溯源三、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品標(biāo)準(zhǔn)品圖繪制完成情況工作不足明年計(jì)劃室內(nèi)用于實(shí)驗(yàn)室日常工作的室內(nèi)質(zhì)控、其值可溯源至二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品室間由主持室間質(zhì)評(píng)的機(jī)構(gòu)制備或監(jiān)制、無需準(zhǔn)確定值血清盤由一定數(shù)量的原血清陰性、陽(yáng)性、弱陽(yáng)性樣本和3至5份系列稀釋的陽(yáng)性樣本組成一、檢測(cè)方法的選擇三、標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品質(zhì)控品理想質(zhì)控品的要求234基質(zhì)與待測(cè)樣品一致陽(yáng)性質(zhì)控品所含待測(cè)物濃度應(yīng)接近實(shí)驗(yàn)的決定性水平穩(wěn)定

無已知的生物傳染危險(xiǎn)性56

靶值或預(yù)期結(jié)果已知

同一批次可大量獲得7

價(jià)廉1圖繪制完成情況工作不足明年計(jì)劃一、檢測(cè)方法的選擇四、試劑盒和耗材的質(zhì)量檢驗(yàn)（一）試劑盒內(nèi)外包裝檢查是否破損是否齊全內(nèi)外是否相符批號(hào)及有效期有否說明書是否完好內(nèi)外包裝檢查圖繪制完成情況工作不足明年計(jì)劃一、檢測(cè)方法的選擇四、試劑盒和耗材的質(zhì)量檢驗(yàn)（二）試劑盒性能檢驗(yàn)

學(xué)清盤結(jié)果合計(jì)+-試劑盒檢測(cè)結(jié)果+aba+b-cdc+d合計(jì)

a+cb+da+b+c+d表1試劑盒檢測(cè)結(jié)果與血清盤結(jié)果靈敏度（%）=(a/a+c)×100%特異性（%）=（d/b+d)×100%符合率（%）=(a+d)/(a+b+c+d）×100%

抑制物檢驗(yàn)

密封性檢驗(yàn)12隨機(jī)抽取6-10支離心管，用已知高中低濃度的陽(yáng)性樣本進(jìn)行PCR，每濃度平行測(cè)定。同時(shí)用已知無抑制劑的管做對(duì)照，并保證試劑及其他耗材質(zhì)量可靠，再比較兩者的結(jié)果。同上取離心管，每管加入一定量水或試劑，稱量；100℃煮沸或PCR擴(kuò)增后再稱量，比較兩者的結(jié)果。離心管的質(zhì)量檢驗(yàn)四、試劑盒和耗材的質(zhì)量檢驗(yàn)（三）抑制物檢驗(yàn)

密封性檢驗(yàn)12隨機(jī)抽取若干吸頭，用吸頭對(duì)一份已知強(qiáng)陽(yáng)性樣本來回吸取10次，將最后一次的液體加入擴(kuò)增管。換吸頭后，連續(xù)吸取10份陰性樣本至10個(gè)擴(kuò)增管，重復(fù)上述3-5次，最后進(jìn)行PCR并比較結(jié)果。制備含1%-2%甘油和色素（如甲基橙）的水溶液，調(diào)移液器的吸取體積稍大于吸頭的最大體積，套上吸頭吸取，如有色液體出現(xiàn)在濾芯，表明密封性不好。離帶濾芯吸頭的質(zhì)量檢驗(yàn)四、試劑盒和耗材的質(zhì)量檢驗(yàn)（四）質(zhì)量體系文件第四節(jié)表格和記錄SOP程序文件質(zhì)量手冊(cè)Step4質(zhì)量手冊(cè)Step3程序文件Step2標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）Step1表格和記錄實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的建立寫你所做記錄你所做的

分析你已做的4ContentsPage質(zhì)量管理的內(nèi)涵做你所寫怎樣編寫SOP？SOP內(nèi)容涵蓋234實(shí)驗(yàn)室清潔生物安全防護(hù)儀器設(shè)備的操作

儀器設(shè)備的維護(hù)和校準(zhǔn)56

臨床樣本的采集、運(yùn)送、接收和保存

試劑盒和耗材的質(zhì)量檢驗(yàn)7

項(xiàng)目檢測(cè)、結(jié)果判斷和報(bào)告18910實(shí)驗(yàn)室記錄及其管理室內(nèi)、室間質(zhì)量控制投訴處理等SOP內(nèi)容儀器和檢測(cè)系統(tǒng)的維護(hù)、功能檢查和校準(zhǔn)第五節(jié)

儀器性能校準(zhǔn)

檢測(cè)系統(tǒng)校準(zhǔn)12由儀器工程師在儀器出廠、安裝調(diào)試后、儀器使用后定期或按計(jì)劃進(jìn)行，主要校準(zhǔn)儀器光路、電路和機(jī)械部分的技術(shù)參數(shù)。同由檢驗(yàn)人員按檢驗(yàn)標(biāo)本的方式對(duì)校準(zhǔn)品進(jìn)行分析，以檢查并證實(shí)儀器、試劑盒或檢測(cè)系統(tǒng)的檢驗(yàn)結(jié)果在規(guī)定的報(bào)告范圍內(nèi)且保持穩(wěn)定。儀器的校準(zhǔn)儀器校準(zhǔn)內(nèi)容標(biāo)題試劑的種類或批號(hào)改變時(shí)儀器移動(dòng)時(shí)儀器或檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行過大的維護(hù)或更換了重要部件時(shí)標(biāo)題需要進(jìn)行儀器校準(zhǔn)的情況儀器的校準(zhǔn)質(zhì)控結(jié)果異常儀器設(shè)備功能檢查及校準(zhǔn)方法固定校準(zhǔn)頻度其他需要校準(zhǔn)的情況擴(kuò)增儀儀器校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)當(dāng)儀器移動(dòng)時(shí)實(shí)驗(yàn)失敗熱電偶探針檢測(cè)溫度每月一次靶溫度或溫度差異超出允許范圍擴(kuò)增功能檢測(cè)溫度均一性每四個(gè)月一次待測(cè)孔未出現(xiàn)擴(kuò)增移液器重新測(cè)量法校準(zhǔn)每年2次不符合要求時(shí)水浴箱/金屬浴溫度檢測(cè)每次實(shí)驗(yàn)不符合要求時(shí)酶標(biāo)儀預(yù)防性維護(hù)及校準(zhǔn)每年2次不符合要求時(shí)天平砝碼校準(zhǔn)每年1次不符合要求時(shí)表2臨床分子生物實(shí)驗(yàn)室主要儀器的功能檢查及校準(zhǔn)儀器的功能檢查及校準(zhǔn)全過程質(zhì)量控制第六節(jié)分析中質(zhì)量控制分析前質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制全過程質(zhì)量控制質(zhì)量控制全過程質(zhì)量控制分析前質(zhì)量控制234實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件符合要求儀器設(shè)備處于良好的工作狀態(tài)實(shí)驗(yàn)室工作人員具有上崗證

試劑和耗材的質(zhì)量符合要求56

具有完整、可操作性的SOP

合理選擇檢驗(yàn)項(xiàng)目，患者信息齊全7

臨床標(biāo)本的采集、運(yùn)送和保存符合要求18按SOP文件對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行清潔、化學(xué)清污和擴(kuò)增產(chǎn)物修飾等分析前質(zhì)量控制分析前質(zhì)量控制234標(biāo)本量太少標(biāo)本類型不一致溶血

脂血56

容器破損

標(biāo)本采集管用錯(cuò)7

抗凝標(biāo)本有凝塊1分析中質(zhì)量控制（一）分析中質(zhì)量控制—標(biāo)本處理不合格標(biāo)本標(biāo)本性狀評(píng)價(jià)溶血脂血黃疸核酸提取評(píng)價(jià)核酸濃度檢測(cè)核酸純度檢測(cè)核酸完整性檢測(cè)抑制物或干擾物質(zhì)控競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)標(biāo)非競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)標(biāo)核酸提取與擴(kuò)增有效性質(zhì)控弱陽(yáng)性質(zhì)控品陰性質(zhì)控品標(biāo)題DNA文庫(kù)質(zhì)控DNA文庫(kù)片段大小DNA文庫(kù)濃度核酸的提取、純化、擴(kuò)增及DNA文庫(kù)的構(gòu)建分析中質(zhì)量控制（二）分析前質(zhì)量控制234陽(yáng)性質(zhì)控品陰性質(zhì)控品試劑空白質(zhì)控

內(nèi)參照56

陰性對(duì)照

陽(yáng)性對(duì)照1分析中質(zhì)量控制（三）產(chǎn)物檢測(cè)的質(zhì)量控制膜條雜交基因芯片檢驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)與報(bào)告臨床咨詢12嚴(yán)格建立報(bào)告單簽發(fā)、審核制度。報(bào)告單除了提供檢驗(yàn)結(jié)果的基本信息外，還應(yīng)提供本技術(shù)的名稱及局限性等。內(nèi)容主要包括檢驗(yàn)項(xiàng)目的選擇、臨床標(biāo)本的采集、標(biāo)本類型的選擇及檢測(cè)結(jié)果的解釋等。分析后的質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制室內(nèi)質(zhì)量控制(internalqualitycontrol,IQC)第七節(jié)在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部工作人員對(duì)所有影響質(zhì)量的每一個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行系統(tǒng)控制，以評(píng)價(jià)本實(shí)驗(yàn)室工作的可靠性程度，監(jiān)測(cè)和控制本實(shí)驗(yàn)室工作的精密度，提高常規(guī)工作中批內(nèi)、批間檢驗(yàn)結(jié)果的一致性，以確定檢測(cè)結(jié)果是否可靠、有效，能否發(fā)出報(bào)告的一項(xiàng)工作。最佳條件下的變異（optimalconditionsvariance,OCV)常規(guī)條件下的變異(rountineconditionsvariance,RCV)12是指在某一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，在最理想和最恒定的條件下，對(duì)同一質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)測(cè)定（至少20次）所得出的最低變異，代表該檢測(cè)項(xiàng)目在本實(shí)驗(yàn)室能達(dá)到的精密度的最高水平。。統(tǒng)計(jì)學(xué)質(zhì)量控制—基線測(cè)定室內(nèi)質(zhì)量控制是指在某一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，常規(guī)條件下對(duì)同一質(zhì)控品進(jìn)行重復(fù)測(cè)定（至少20次）所得出的變異，反映常規(guī)條件下該項(xiàng)目檢測(cè)的精密度水平。暫定均值和標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定1常用均值和標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定212質(zhì)控品均值和標(biāo)準(zhǔn)差的設(shè)定室內(nèi)質(zhì)量控制Levey-Jennings質(zhì)控圖方法室內(nèi)質(zhì)量控制圖1Levey-Jennings質(zhì)控圖23412s規(guī)則13s規(guī)則22s規(guī)則

R4s規(guī)則56

41s規(guī)則

10X規(guī)則1Westgard多規(guī)則質(zhì)控方法圖2Westgard多規(guī)則質(zhì)控邏輯圖室內(nèi)質(zhì)量控制即刻質(zhì)控方法室內(nèi)質(zhì)量控制即Grubs異常值取舍圖，只要有3次質(zhì)控檢測(cè)值就可用此法進(jìn)行檢測(cè)。該法適用于沒有每天進(jìn)行檢測(cè)的項(xiàng)目或試劑盒有效期較短的項(xiàng)目SI上限=（X最大值-X均值）/SDSI下限=（X均值-X最小值）/SD室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的評(píng)價(jià)室內(nèi)質(zhì)量控制

234檢查質(zhì)控圖，確定誤差類型

判斷誤差類型和失控原因的關(guān)系

檢查多項(xiàng)目檢測(cè)系統(tǒng)上常見的因素

查找與近期變化有關(guān)的因素5

確認(rèn)解決問題，做好記錄1失控原因的分析與處理陰性質(zhì)控品失效的原因、處理與預(yù)防措施234擴(kuò)增產(chǎn)物污染標(biāo)本交叉污染基因組DNA或質(zhì)粒污染

試劑污染12

實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)格分區(qū)，制定SOP并嚴(yán)格執(zhí)行

使用化學(xué)試劑去除污染源3

對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行修飾，如紫外線和UNG方法1456使用一次性耗材使用帶濾芯的吸頭避免臨床“假陽(yáng)性問題”室內(nèi)質(zhì)量控制陰性質(zhì)控品失效的原因預(yù)防措施陽(yáng)性質(zhì)控品失效的原因、處理與預(yù)防措施23試劑問題儀器問題核酸提取過程中的隨機(jī)誤差12

稀釋樣品，如嚴(yán)重溶血樣本

純化核酸，如采用磁珠提取等3

采用標(biāo)本雙份重復(fù)檢測(cè)，以避免隨機(jī)誤差14使用內(nèi)質(zhì)控，避免假陰性室內(nèi)質(zhì)量控制陽(yáng)性質(zhì)控品失效的原因預(yù)防措施室內(nèi)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)的周期性評(píng)價(jià)室內(nèi)質(zhì)量控制

234

查看當(dāng)月IQC數(shù)據(jù)的均值、SD和CV與以往對(duì)應(yīng)的值比較

如發(fā)現(xiàn)均值、SD有顯著性變化，就要對(duì)質(zhì)控圖進(jìn)行修改

對(duì)于多年IQC，將每個(gè)月的CV和失控規(guī)律列成表，作為本實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量的歷史性回顧及趨勢(shì)分析1每月底比較當(dāng)月IQC數(shù)據(jù)的均值、SD和CV與對(duì)應(yīng)設(shè)定的值比較室內(nèi)質(zhì)量控制的局限性室內(nèi)質(zhì)量控制

IQC主要反映每次檢測(cè)的質(zhì)控品的值與既定目標(biāo)值的一致性，不能保證單個(gè)樣品不出現(xiàn)誤差，如樣本錯(cuò)誤、結(jié)果記錄錯(cuò)誤等。因此實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定全程質(zhì)量控制措施，有效監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程的各個(gè)環(huán)節(jié)，確保檢驗(yàn)質(zhì)量。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)(externalqualityassessment,EQA)第八節(jié)是由外部獨(dú)立機(jī)構(gòu)采取一定的方法，連續(xù)、客觀地評(píng)價(jià)多間實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，發(fā)現(xiàn)誤差并校正結(jié)果，使各實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果具有可比性。EQA是對(duì)實(shí)驗(yàn)室操作和實(shí)驗(yàn)方法的回顧性評(píng)價(jià)。234評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力，持續(xù)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)質(zhì)量

識(shí)別實(shí)驗(yàn)室存在的問題，制定相應(yīng)的補(bǔ)救措施

確定新檢測(cè)方法的有效性和可比性，并對(duì)這些方法進(jìn)行監(jiān)控

增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室的信心56

識(shí)別實(shí)驗(yàn)室之間的差異

確定某種檢測(cè)方法的性能特點(diǎn)1EQA的目的室間質(zhì)量評(píng)價(jià)EQA的設(shè)計(jì)程序

234組織者確定評(píng)估方案，發(fā)放一定數(shù)量的統(tǒng)一質(zhì)控樣本給參評(píng)實(shí)驗(yàn)室

實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)用與常規(guī)樣本完全相同的方式檢測(cè)EQA樣本

在規(guī)定時(shí)間內(nèi)按統(tǒng)一格式、相同的計(jì)量單位報(bào)告給組織者

組織者對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對(duì)檢測(cè)方法、試劑和儀器進(jìn)行歸納總結(jié)5

組織者給每個(gè)參評(píng)實(shí)驗(yàn)室發(fā)EQA報(bào)告，內(nèi)容清楚簡(jiǎn)潔1室間質(zhì)量評(píng)價(jià)EQA樣本的組合設(shè)計(jì)原則

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)234EQA組合樣本為5~8份1~2份為陰性511~2份為弱陽(yáng)性2~3份為中等陽(yáng)性1~2份為強(qiáng)陽(yáng)性EQA樣本的局限性

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)23參評(píng)實(shí)驗(yàn)室沒