植物內(nèi)生菌的分離_第1頁
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植物內(nèi)生菌的分離_第5頁
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文檔簡介

123在植物的生態(tài)環(huán)境中，存在著多個各樣的微生物,它們有的附著于植物的表而對于植物體內(nèi)微生物的研究卻剛剛起步。但有資料顯示,某些植物內(nèi)生微生內(nèi)生菌概念在1866Bary提出的，指那些在其生活史的一定階段其后的很長時間內(nèi)，內(nèi)生菌研究進(jìn)展緩慢。直到1993年，美國蒙大拿州Strobel等從短葉紅豆杉的韌皮部位分離到一株產(chǎn)新型抗癌物質(zhì)紫杉醇1881Frankia，但當(dāng)時并不懂得它是什么微生物。擬定內(nèi)燈、滅菌鍋、光學(xué)顯微鏡、載玻片、培養(yǎng)皿、錐形瓶、PCR擴增儀、電泳槽、13種培養(yǎng)基即牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基用于培養(yǎng)細(xì)菌、PDA培養(yǎng)基用6個培養(yǎng)基。0.6g2g、NaCl1g、瓊脂4g200ml、pH7.4-pHPDA40g3g4g200ml（4g、NaCl0.1g、KNO30.2g、K2HPO40.1g、MgSO40.1g、FeSO42mg10mg4g200mlpH7.4-7.62將葉片剪成大塊（去掉葉柄，可將葉片沿主葉脈剪開成兩大塊1%75%1min1%10-15min、75%1min（不停攪動5片，放好后標(biāo)記；28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一周，一周后取出觀察與否有菌落從植物材31195%酒精數(shù)滴，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，20蕃紅染色液（稀）35分鐘后，自來水沖洗。干燥，鏡檢。4、PCRTaq0.5μl、10×PCRbuffer5μl、dNTP1μl、TE10μl11μl21μl、水6.5μlTE溶液，然后用消毒的接種針挑取少量待擴增菌溶于其中，PCR擴增儀中。51×TAE0.1g/LEB0.5μg/mL1/5體積溴酚藍(lán)溶液。電泳：10V/cm40min。5種細(xì)菌、2123451、第一次分離得到的真菌菌絲（40倍物鏡觀察2挑取菌絲觀察（40倍物鏡觀察膠

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