杏香兔耳風(fēng)治療宮頸炎的機(jī)制研究

杏香兔耳風(fēng)治療宮頸炎的機(jī)制研究

臨床發(fā)現(xiàn)，中藥杏香兔子耳風(fēng)對(duì)宮頸炎有效，但其作用機(jī)制尚不清楚。本研究擬通過對(duì)宮頸炎大鼠T淋巴細(xì)胞亞群變化、宮頸PGE2的表達(dá)以及宮頸黏膜病理學(xué)的觀察,探討杏香兔耳風(fēng)治療宮頸炎可能的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組1.動(dòng)物Wistar大鼠,雌性,未孕,體質(zhì)量200-250g,由江西醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2.藥品和試劑CD3、CD4、CD8單克隆抗體(Caltag公司產(chǎn)品),125I-PGE2(RIA)放射免疫試劑盒(Sigma公司產(chǎn)品)。杏香兔耳風(fēng)浸膏由江西天施康中藥股份有限公司提供(批號(hào):20051107,每1g浸膏中含生藥10g)3.主要儀器輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)(德國(guó)Leica公司型號(hào):RM2016),Leica圖像分析儀(LeicamicrosystemWetzlarGmbh,型號(hào):090-134,713-000),流式細(xì)胞儀[美國(guó)Coulter公司,型號(hào):EPICS(XL)]。4.造模及分組隨機(jī)分為3組,每組動(dòng)物20只:杏香兔耳風(fēng)治療組,正常組,模型組。參考文獻(xiàn)方法將苯酚25ml,西黃蓍膠5g,甘油20ml,加蒸餾水至100ml,配成含250mg/g苯酚膠漿。正常組給以賦形劑(1ml/kg)陰道內(nèi)注射,杏香兔耳風(fēng)治療組、模型組給以等容量苯酚膠漿注射,每天1次,連續(xù)3次。3天后大鼠陰道口出現(xiàn)紅腫或有膿性物流出者視為造模成功。5.給藥治療組按450mg·kg-1·d-1的浸膏量給予灌胃,每天1次;模型組及正常組給予同等體積的生理鹽水。造模第3天后開始灌胃,灌胃4天后隨機(jī)處死一半動(dòng)物,剩余動(dòng)物繼續(xù)給藥至10天后全部處死。6.指標(biāo)檢測(cè)6.1大體觀察每天觀察記錄外陰變化。6.2組織PGE2測(cè)定將稱質(zhì)量后的宮頸切取部分組織按每塊300mg,加無(wú)水乙醇(0.1ml),剪碎,輕輕研磨,再加生理鹽水(0.2ml),制成勻漿,4℃3500r/min離心15min,收取上清,-20℃保存?zhèn)溆?。放免?RIA)按試劑盒說明書操作檢測(cè)組織PGE2含量。余下宮頸組織置入10%福爾馬林溶液中固定以備組織切片用。6.3T淋巴細(xì)胞亞群的測(cè)定大鼠眼球取血,加肝素抗凝,分別取血50μl與5μlCD3、CD4、CD8單克隆抗體的離心管中震勻,4℃下保存30min;加入適量紅細(xì)胞溶解液,1000r/min離心1.5min,棄其上清;加入適量生理鹽水以1000r/min,離心1.5min,反復(fù)幾次,以試管底部不見紅色為度,過濾后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。6.4組織病理學(xué)檢查將經(jīng)福爾馬林溶液固定一周的宮頸組織取出,常規(guī)脫水,石蠟包埋,縱向切片,片厚4-6μm,進(jìn)行HE染色。在顯微鏡下觀察,并按表1方法進(jìn)行評(píng)分。7.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)結(jié)果用xˉ±sxˉ±s表示。數(shù)據(jù)處理采用SPSS軟件,用方差分析的方法進(jìn)行分析,病理形態(tài)學(xué)分析采用秩和檢驗(yàn)。結(jié)果1.黏稠混合物造模后,造模組動(dòng)物大多數(shù)陰道及宮頸口可見大量黃色或白色的黏稠分泌物,少數(shù)可見出血。經(jīng)杏香兔耳風(fēng)治療后,少數(shù)動(dòng)物陰道及宮頸口可見少量白色分泌物,其余均潔凈。2.減少睪丸pgf2表達(dá)見表2、表3。由表2-表3可知,模型鼠宮頸PGE2水平在不同時(shí)間段均明顯高于正常組(P<0.01),治療4天后杏香兔耳風(fēng)即可降低宮頸PGF2的表達(dá)(P<0.05);外周血CD4、CD8、CD4/CD8在給藥早期各組間比較無(wú)顯著性差異,10天后CD4模型組低于正常組(P<0.05)、CD8高于正常組(P<0.01),由此導(dǎo)致CD4/CD8比值明顯下降(P<0.01),CD3各時(shí)間段組間比較均無(wú)差異,此外,各檢測(cè)指標(biāo)不同時(shí)段比較無(wú)差異。3.陰道組織正常正常組:可見宮頸復(fù)層鱗狀上皮表面光滑,無(wú)壞死脫落,無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn),黏膜下組織正常。模型組:4天時(shí),可見廣泛的宮頸黏膜變性壞死,脫落,形成潰瘍,黏膜下有充血水腫,炎細(xì)胞浸潤(rùn),肉芽組織增生,成纖維細(xì)胞增生;10天時(shí),在上述基礎(chǔ)上,炎細(xì)胞浸潤(rùn)有所減少,成纖維細(xì)胞增生有所增加(見表4)。杏香兔耳風(fēng)能主要作用于苯酚所致大鼠宮頸炎本研究發(fā)現(xiàn)杏香兔耳風(fēng)能有效改善苯酚所致大鼠宮頸炎的宮頸病理狀況。PGE2是體內(nèi)產(chǎn)生的前列腺素物質(zhì)中的一種,具有較強(qiáng)的炎癥免疫調(diào)節(jié)作用,通過釋放一些炎性介質(zhì),如自由基、白三烯(LTs),血栓素(TXs),腫瘤壞子因子-α(TNF-α),白細(xì)胞介素-1(IL-1)等導(dǎo)致炎癥的發(fā)生,在炎癥發(fā)生期,PGE2的水平常表現(xiàn)為急劇升高,本研究中亦證實(shí)了這點(diǎn)。而杏香兔耳風(fēng)能在早期降低大鼠宮頸黏膜PGE2的表達(dá),從而減輕炎癥發(fā)應(yīng)的發(fā)生。苯酚所致大鼠宮頸炎模型存在T細(xì)胞免疫功能紊亂,主要表現(xiàn)為后期CD4淋巴細(xì)胞數(shù)減少,CD8淋巴細(xì)胞數(shù)增加,CD4/CD8比值下降為特征的免疫功能抑制狀態(tài)。本研究顯示杏香兔耳風(fēng)能糾正這種T淋巴細(xì)胞亞群紊亂。而早期模型鼠T淋巴細(xì)胞亞群則無(wú)明顯變化,這主要是由于要使T細(xì)胞充分活化,尚須抗原提呈細(xì)胞提供的輔助刺激信號(hào)及細(xì)胞因子,T細(xì)胞才能經(jīng)克隆擴(kuò)增,使克隆細(xì)胞數(shù)目增加,并經(jīng)歷分化及應(yīng)答過程,T細(xì)胞產(chǎn)生的免疫反應(yīng)常在抗原刺激后的一段時(shí)間