微生物實驗問題與答案

微生物實驗問題與答案一、光學(xué)顯微鏡的操作及細菌、放線菌個體形態(tài)的觀察1、為什么油鏡的放大倍數(shù)比普通物鏡大？答：油鏡能減少光的折射，進而提高視野的亮度；通過提高顯微鏡的數(shù)值口徑增加顯微鏡的分辨力。2、數(shù)值口徑的表達公式？答案：N.A=n×sinα，n為介質(zhì)折射率；α為光線最大入射角的半數(shù)。3、顯微鏡數(shù)值口徑與分辨力的關(guān)系？答案：分辨力是指顯微鏡能辨別兩點之間最小距離的能力，它與光的波長成反比，與數(shù)值口徑成正比。4、油鏡的使用與普通物鏡有何不同？答案：油鏡必須借助于光折射率等于或接近于玻璃的試劑，如香柏油等才能使用，而普通物鏡則不需要；油鏡是由100×物鏡與香柏油構(gòu)成，而普通物鏡則限于10×物鏡、40×物鏡等。5、使用油鏡時應(yīng)特別注意什么？答案：上下調(diào)節(jié)鏡頭時應(yīng)使用微螺旋，否則容易損壞鏡頭；應(yīng)使油鏡始終浸泡在香柏油中，否則就不是油鏡；使用完畢后，必須用搽鏡紙沾取二甲苯等有機溶劑搽去殘留的油跡，否則會玷污油鏡。6、什么是物鏡的同焦現(xiàn)象？它在顯微鏡觀察中有什么意義？答：在一般情況下，當(dāng)物像在一種物鏡中已清晰聚焦后，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器將其他物鏡轉(zhuǎn)到工作位置進行觀察時，物像將保持基本準焦的狀態(tài)，這種現(xiàn)象稱為物鏡的同焦。利用這種同焦現(xiàn)象，可以保證在使用高倍鏡或油鏡等放大倍數(shù)高、工作距離短的物鏡時僅用細調(diào)節(jié)器即可對物像清晰聚焦，從而避免由于使用粗調(diào)節(jié)器時可能的誤操作而損壞鏡頭或載玻片。7、根據(jù)你的實驗體會,談?wù)剳?yīng)如何根據(jù)所觀察微生物的大小,選擇不同的物鏡進行有效地觀察答：細菌用油鏡，真菌用高倍鏡。都是先用低倍鏡找到目標后，再用高倍鏡調(diào)到合適的視野和合適的清晰度。答：放線菌、酵母菌、多細胞真菌相對較大，用放大40倍的物鏡就可以看了，細菌小，要用放大1000倍的物鏡看，感覺還很小。病毒那就要用電子顯微鏡看了。二、微生物染色1、單染色的原理是什么？答案：主要基于微生物細胞能與各種染料進行不同程度地結(jié)合。2、單染色過程中，為什么干燥固定？答案：因為通過干燥可以使菌體蛋白變性，細胞質(zhì)凝固，進而可以使菌體緊密地附著于載玻片表面。3、單染色過程中，為什么水洗時水流要緩慢地從載玻片上端流下？答案：因為如果水流直接沖洗有菌部位，容易使菌體被沖洗掉。4、為什么載玻片要完全干燥后，才能使用油鏡？答案：因為香柏油與水不相溶，容易造成光線發(fā)生折射或散射，一方面無法構(gòu)成油鏡，另一方面也會降低視野的亮度。5、革蘭氏染色的原理是什么？答案：對于G+細菌來說，當(dāng)用乙醇脫色時，由于肽聚糖含量高，網(wǎng)孔小，再加上脂量低，所以乙醇脫色后，進一步地縮小了網(wǎng)孔，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物無法脫出，第二次用番紅染色時無法著色，進而呈紫色；對于G-細菌來說，當(dāng)用乙醇脫色時，由于肽聚糖含量低，網(wǎng)孔大，再加上脂量高，所以乙醇脫色后，進一步地擴大了網(wǎng)孔，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被脫出，第二次用番紅染色時著色，進而呈紅色。6、革蘭氏染色時，為什么要加碘液？答案：碘可以與結(jié)晶紫染料形成較大的復(fù)合物，從而可以阻止結(jié)晶紫向細胞外滲透；另一方面也可以增加結(jié)晶紫與細胞質(zhì)的親和力。7、革蘭氏染色時，為什么要用酒精沖洗？答案：加酒精是為了溶解細胞壁中的脂類和脫去細胞內(nèi)的有機染料。8、革蘭氏染色時，為什么不能涂片太厚？答案：涂片太厚，容易使菌體重疊，造成假陽性。9、革蘭氏染色時，為什么說脫色（乙醇脫色）是最關(guān)鍵的一步？答案：如果脫色時間較短，則容易使革蘭氏陰性細菌脫色不完全，造成假陽性；如果脫色時間較長，則容易使革蘭氏陽性細菌內(nèi)的染料被脫出，造成假陰性。10、革蘭氏染色時，如何證明你的染色操作是正確的？答案：將革蘭氏陽性細菌—葡萄球菌與革蘭氏陰性細菌--大腸桿菌制成混合涂片，經(jīng)革蘭氏染色后，如果葡萄球菌呈紫色，而大腸桿菌呈紅色，則說明染色操作是正確的。答案：由于芽孢壁厚，不易著色，所以須采用著色力強的染色劑，并需加熱，以便提高芽孢壁的透性，使染料易于進入菌體。用單染色可以將看到芽孢，但是無色的。7、芽孢染色加熱時，為什么染料不能沸騰？答案：因為染料沸騰后，容易時菌體從載玻片上脫落。8、莢膜染色時，為什么莢膜不易著色？答案：莢膜主要成分是多糖，很難著色，同時水洗時多糖易溶于水，因而只能采用襯托的方法將背景與菌體染色，而襯托出白色而透明的莢膜。9、莢膜染色時，為什么不允許加熱？答案：莢膜很薄，加熱容易變形。10、如何觀察細菌莢膜？答案：采用襯托法進行。取干凈的普通載玻片，并在載玻片的一端滴加蒸餾水，將巨大芽孢桿菌輕沾于水滴中。加少許墨汁于菌滴中，加蓋玻片，輕輕擠壓，除去多余的液體。鏡檢，可以觀察到菌體周圍的白色莢膜。11、 細菌與酵母菌的菌落有何區(qū)別答：細菌菌落光滑，易于基質(zhì)脫離；酵母菌菌落較細菌菌落大而厚且酵母菌的菌落較濕潤12、能否用血球計數(shù)板在油鏡下進行計數(shù)？為什么？答：不能。計數(shù)時滴在血球計數(shù)板上的是菌懸液，相當(dāng)于在鏡頭和計數(shù)板直接加了一層水。13. 菌種保藏中，石蠟油的作用是什么？答：作用是密封。防止空氣進入，降低菌種的生理活性。14. 經(jīng)常使用的細菌菌株，使用哪種保藏方法比較好？答：用甘油冷凍保藏方法保存，在液體培養(yǎng)基中加入百分子十五的甘油，然后低溫冷凍（-7度）左右。五、酵母菌形態(tài)觀察及死活細胞鑒別1、呂氏堿性美藍染液濃度和作用時間的不同對酵母菌死細胞數(shù)量有何影響?是分析其原因。美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變成為無色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的，而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則呈藍色或淡藍色，借此即可對酵母菌的死細胞和活細胞進行鑒別。美藍濃度高了，代謝不太活躍的活細胞也會被染色，從而使觀察到的死細胞較多，活細胞較少；反之，則代謝微弱的細胞也能還原美藍，不被染色，從而使觀察到的死細胞較少，活細胞較多。2、顯微鏡下細菌放線菌酵母菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？放線菌與細菌需要在油鏡下才能觀察清楚，而霉菌和酵母菌在低倍鏡下即可看到。細菌：為細而短的單細胞微生物（個體微?。?，主要形態(tài)有：球、桿、螺旋狀等。（部分桿菌還可形成芽孢）放線菌：存在分枝絲狀體和菌絲體，革蘭氏陽性菌，有孢子絲和孢子（球形、橢圓形、桿狀、柱狀）。酵母菌：單細胞，菌體呈圓球、卵形或橢圓形，少數(shù)呈檸檬形、尖形等。菌體比細菌大幾倍到幾十倍，部分處于出芽繁殖過程中菌體還可觀察到芽體，大多數(shù)菌體上還有芽痕。霉菌：菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，常是細菌菌體寬度的幾倍到幾十倍，在低倍鏡下即可看到，并還可看到孢子囊梗、囊軸、孢子囊、包囊孢子等。3、測定細胞數(shù)目的方法有直接計數(shù)法（如血球計數(shù)板計數(shù)計數(shù)）和間接計數(shù)法（如平板菌落計數(shù)法）顯微鏡計數(shù)的優(yōu)點是直觀、快速、操作簡單，缺點是所測得的結(jié)果通常是死菌體和活菌體的總和，且難以對活動性強的活菌進行計數(shù)。其中血細胞計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，常用于個體相對較大的酵母細胞，霉菌孢子等計數(shù)。4、稀釋平板計數(shù)法將一定量的樣品經(jīng)十倍稀釋后,用平板培養(yǎng)最后三個稀釋度的樣品稀釋液。待菌落長出后,計數(shù)出某一稀釋度的菌落數(shù)后再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品中的含菌數(shù)。5、顯微直接計數(shù)利用血球計數(shù)板或細菌計數(shù)板在顯微鏡下測計出每小格的微生物細胞數(shù)量后,再換算出單位體積中微生物細胞總數(shù)的測數(shù)方法。六、環(huán)境因子對微生物生長的影響1、pH對微生物生長作用的原理是什么？細菌、真菌和放線菌所需要的最佳pH為多少？答案：pH對微生物生長作用的原理是：使蛋白質(zhì)和核酸等大分子物質(zhì)的電荷發(fā)生變化影響微生物活性；影響細胞膜表面電荷，進而影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收；改變環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)的可給性及有毒物質(zhì)的毒性。細菌要求pH為7.0-7.2，真菌pH自然，放線菌pH為7.2-7.4。2、重金屬對微生物影響的機理是什么？答案：使菌體變性或與-SH基結(jié)合，導(dǎo)致微生物酶失活。3、氯化鈉等鹽類對微生物的影響機理？答案：通過調(diào)節(jié)微生物細胞的滲透壓影響微生物。七、培養(yǎng)基的配制、消毒、滅菌與土壤微生物分離1、培養(yǎng)基配制原則是什么？答案：目的明確；根據(jù)微生物的營養(yǎng)需要；注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度配比；要控制具體pH、滲透壓、水活度和氧化還原電位；經(jīng)濟。2、培養(yǎng)基配制應(yīng)注意什么？答案：稱取藥品蛋白胨時要迅速，防止吸潮；培養(yǎng)基融化時要不斷攪拌以防燒焦；針對不同的培養(yǎng)基要調(diào)節(jié)適當(dāng)?shù)膒H；培養(yǎng)基滅菌時應(yīng)按高壓蒸汽滅菌鍋的操作過程進行，以免危險發(fā)生。滅菌后培養(yǎng)基要及時處理，防止凝固或污染。3、為什么培養(yǎng)微生物時，平板培養(yǎng)基要倒置？答案：第一培養(yǎng)基倒置可以防止冷凝水落到培養(yǎng)基表面，使菌落分散開；第二可以防止空氣對流，污染培養(yǎng)基。4、為什么高壓蒸汽滅菌效果好？答案：因為在濕熱情況下，濕熱的穿透力強，菌體吸收水分使蛋白質(zhì)容易凝固，而且當(dāng)蒸汽與菌體接觸后冷凝成水時可以放出熱量，進而提高鍋內(nèi)的溫度。5、如何使用高壓蒸汽滅菌鍋？答案：首先檢查滅菌鍋內(nèi)的水是否沒過電阻絲，然后放上裝有物品的內(nèi)桶。注意物品不要過多。將蓋子上的通氣管插入內(nèi)桶壁上的管槽內(nèi)，蓋上蓋子，用對角的方式旋緊螺扣，接通電源，開始滅菌。當(dāng)壓力指針達到0.05KPa時打開放氣閥放氣，反復(fù)放氣三次以便排除鍋內(nèi)的冷空氣。放氣結(jié)束后，使指針升到壓力為0.1KPa，并通過人為控制電源的開閉，在0.1KPa壓力下維持20-30min。滅菌結(jié)束后，通過冷卻使鍋內(nèi)的壓力下降到0.05，打開壓力閥放氣，待壓力為0時，對角旋開螺扣，取出物品即可。6、分離土壤微生物時，細菌、酵母、真菌和放線菌的培養(yǎng)基分別是什么？答案：細菌：營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基PH7.0-8.0放線菌：高氏一號培養(yǎng)基PH7.5-8.5酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基PH3.8-6.0YPDA培養(yǎng)基霉菌：馬鈴薯培養(yǎng)基PH4.0-5.87、 做空白對照實驗的目的?答：目的是檢驗培養(yǎng)基是否受到污染，驗證無菌操作。8、半固體穿刺法將待檢細菌穿刺接種在半固體試管培養(yǎng)基中,若細菌僅沿穿刺線生長,說明細菌不運動。若細菌沿穿刺線向周圍擴散生長,說明細菌有運動性。9、為什么分裝于三角瓶中的培養(yǎng)基裝量不能過多？答：①分裝量太多，三角瓶內(nèi)培養(yǎng)極易沾染瓶口及棉塞而造成污染；②分裝量太多不利于震蕩搖勻；③分裝量太多會使培養(yǎng)基滅菌不徹底。10、選擇培養(yǎng)基:根據(jù)使用的目的,控制培養(yǎng)基的組成成分,使之有利于某種微生物的生長而限制其它微生物的生長,從而能從自然界混雜的群體中分離出某一種單一的微生物。如無氮培養(yǎng)基用來分離土壤中的自生固氮菌。11、加富培養(yǎng)基:在基本培養(yǎng)基中加入血清,動植物組織液或者其它生長因子而配制出來的營養(yǎng)特別豐富的培養(yǎng)基。12、鑒別培養(yǎng)基:根據(jù)微生物的代謝特點,通過指示劑的顯色反應(yīng),用以鑒別不同微生物的培養(yǎng)八、細菌的生理生化反應(yīng)1、你如何解釋淀粉酶是胞外酶？答案：淀粉酶是胞外酶可以通過觀察固體培養(yǎng)基表面的淀粉降解圈或透明圈的大小來解釋。2、糖發(fā)酵過程中如何證明有氣體產(chǎn)生？答案：在糖發(fā)酵過程中，有些微生物可以利用糖產(chǎn)生有機酸并產(chǎn)生氣體，我們可以在發(fā)酵管中加入得漢氏小管，如果產(chǎn)氣，小管內(nèi)就會有氣泡存在。3、吲哚實驗的原理是什么？答案：吲哚實驗的原理是：某些微生物可以分泌色氨酸酶，該酶將蛋白質(zhì)中的色氨酸分解為吲哚和丙酮酸，吲哚可以與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成紅色的玫瑰吲哚，進而證明色氨酸的分解。4、甲基紅實驗的原理是什么？答案：甲基紅在pH中性時呈現(xiàn)橘黃色，而在酸性條件下則為紅色，所以當(dāng)葡萄糖被分解產(chǎn)生有機酸時，可以甲基紅在酸性條件下則為紅色。5、伏-普實驗的原理是什么？答案：伏-普實驗的原理是：該實驗是用來檢驗?zāi)承┘毦闷咸烟菚r可產(chǎn)生中性末端產(chǎn)物，如丙酮酸，丙酮酸進行縮合、脫羧生產(chǎn)乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被氧氣氧化成二乙酰。二乙?？梢耘c蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成紅色化合物。6、硫化氫實驗原理是什么？答案：硫化氫實驗原理是：某些腸道細菌可以分解含硫有機物，并形成硫化氫，該氣體與醋酸鉛反應(yīng)形成黑色的硫化鉛沉淀。34. 大腸菌群檢驗中為什么首先要用乳糖膽鹽發(fā)酵管？答：因為乳糖膽鹽發(fā)酵管中的成分有溴甲酚紫，中性時呈藍紫色，酸性時呈黃色，如果顏色不變（呈藍紫色），說明無產(chǎn)酸的大腸菌群；如果顏色變黃色，說明可能出現(xiàn)能分解乳糖產(chǎn)酸的大腸菌群；膽鹽可以抑制其它細菌生長繁殖；看杜氏小管中是否有氣體，判斷是否為分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的大腸菌群。九、營養(yǎng)缺陷型的篩選與鑒定1、紫外誘變的機理是什么？答案：紫外誘變的機理是紫外線引起胸腺嘧啶二聚體，從而導(dǎo)致DNA結(jié)構(gòu)改變，進而引起機體突變或死亡。2、紫外線誘變后，為什么不能馬上見光？答案？由于紫外線誘變后，如果馬上給以可見光照射，則菌體中會產(chǎn)生光復(fù)活酶，進而對突變進行修復(fù)。3、什么是營養(yǎng)缺陷型？答案：營養(yǎng)缺陷型是指用物理或化學(xué)誘變使其基因發(fā)生突變從而喪失某種生長因子的合成能力，必須在基本培養(yǎng)基中加入相應(yīng)的營養(yǎng)成分才能正常生長的突變型菌株，與之相對的是野生型菌株。4、淘汰野生型的原理是什么？答案：淘汰野生型也叫營養(yǎng)缺陷型的濃縮，由于抗生素（如青霉素等）可以抑制細菌細胞壁的形成，所以野生型在基本培養(yǎng)基中生長過程中，被殺死，而營養(yǎng)缺陷型則不能在在基本培養(yǎng)基中生長，但仍然存活，所以當(dāng)再次轉(zhuǎn)接到完全培養(yǎng)基中時，便可淘汰野生型。5、篩選營養(yǎng)缺陷型時，為什么要不停攪拌？答案：這樣可以使微生物細