分子生物學(xué)學(xué)習(xí)資料：answer-ch7

7.1描繪一幅大腸桿菌在葡萄糖和乳糖的混合物中成長的曲線圖，并描述在曲線的各個階段發(fā)生了什么。答：第一階段，大腸桿菌利用葡萄糖作為C的來源直至葡萄糖被用盡然后它們停止生長。接著他們會在短時間內(nèi)因為不能適應(yīng)新的營養(yǎng)環(huán)境而停止生長。但是過了大概一小時后他們又開始了生長。在這一階段，大腸桿菌會開啟lac操縱子并積聚能夠代謝乳糖的酶。7.2請畫圖說明乳糖操縱子的（1）負調(diào)控和（2）正調(diào)控。答：（1）負調(diào)控如圖所示，lacI基因會表達生成一個抑制蛋白（repressor）,起作用的抑制蛋白是一個四聚體。當(dāng)這個四聚體結(jié)合到DNA上（operator）時，就會阻止RNA聚合酶結(jié)合到啟動子上，抑制結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄。另外DNA上也有基因片段在一定情況下能表達生成促進蛋白（induce）,它可以和抑制蛋白結(jié)合，使其發(fā)生構(gòu)象的改變，以至于抑制子不能結(jié)合到DNA上，因此RNA聚合酶能順利地結(jié)合到啟動子，然后開始轉(zhuǎn)錄。（2）正調(diào)控CAP-cAMP復(fù)合物結(jié)合到啟動子附近的一個活性位點（如圖中所示的CAPbindingsite）,促進RNA聚合酶結(jié)合到啟動子上，從而對基因的轉(zhuǎn)錄其道正調(diào)控的作用。7.3介紹β-半乳糖苷酶和半乳糖苷透性酶的功能。答：圖7.3.1大腸桿菌乳糖操縱子各部分功能示意β-半乳糖苷酶（β-galactosidase）一種能把乳糖水解成葡萄糖和半乳糖的酶。一般是指能將β-半乳糖苷水解為半乳糖和糖苷的酶。很早以來，就被認為是大腸桿菌誘導(dǎo)酶的典型。分子量54萬，為四聚體。其結(jié)構(gòu)基因為LacZ。當(dāng)培養(yǎng)基中無誘導(dǎo)物質(zhì)時，細胞中β-半乳糖苷酶含量很低；但一旦被誘導(dǎo)，則每一世代都能合成多達幾千個分子的酶。另外，β-半乳糖苷酶一般廣泛存在于動植物界中。圖7.3.2β-半乳糖苷酶的催化反應(yīng)β-半乳糖苷透性酶（galactosidepermease）lacY編碼，是一種分子量為30kDd膜結(jié)合蛋白，構(gòu)成轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，通過改變細胞膜對半乳糖的通透性，將半乳糖苷運入到細胞中。7.4為什么說lac操縱子的正、負調(diào)控在大腸桿菌的能量代謝中有重要的作用？答：在大腸桿菌細胞中，調(diào)控乳糖分解的三種酶的基因轉(zhuǎn)錄是由同一個啟動子控制的，當(dāng)外界條件改變時它們同時被啟動，又同時被抑制。這使得細胞對外界的反應(yīng)更加敏感。更能有效的應(yīng)對外界變化。負調(diào)控使得在乳糖不存在時編碼這些酶的基因被抑制子阻遏，（通過抑制子與操縱基因結(jié)合，阻止了RNA聚合酶與啟動子結(jié)合）細胞不能編碼產(chǎn)生這些沒有用的酶，這使得細胞中的物質(zhì)不會被浪費。而在乳糖存在的條件下，通過異乳糖作為一個誘導(dǎo)物改變抑制子構(gòu)象使其脫離操縱基因，從而RNA聚合酶得以與DNA接合轉(zhuǎn)錄得以實現(xiàn)。這樣通過外界條件的指示作用，“告訴”細胞能夠被利用的能源情況，可以很大程度上減少在沒有底物時卻浪費細胞中的成分合成無用的酶，也能在底物存在時，讓細胞有選擇的使用乳糖作為能源。正調(diào)控使得單單乳糖存在這一條件還不足以讓半乳糖苷酶，半乳糖轉(zhuǎn)酰酶和半乳糖透過酶很好的合成，還需要外界葡萄糖濃度低到一定程度加以支持。因為細胞能夠更有效的利用葡萄糖（單糖），而半乳糖的利用并不是非常劃算，若在還有很多葡萄糖能供利用時細胞卻因為半乳糖的存在而分解半乳糖，也是一種不經(jīng)濟的機制。所以細胞需要在葡萄糖含量很低的時候通過提高細胞內(nèi)c-AMP的含量，并使之與分解促進蛋白結(jié)合，然后整體結(jié)合到DNA上，促進形成開放復(fù)合體，從而促進RNA的轉(zhuǎn)錄。當(dāng)細胞中葡萄糖含量高時，會抑制c-AMP的產(chǎn)生，從而使這種正向的作用調(diào)解缺少了。從而分解乳糖的酶的基因轉(zhuǎn)錄還不能很活躍，大腸桿菌還是主要有效的利用葡萄糖作為能源，選擇了一條更高效的機制，又保證了在葡萄糖消耗盡時還能通過分解乳糖維持生命。從以上觀之，負調(diào)節(jié)的作用主要是防止細胞中資源的浪費，而正調(diào)節(jié)的作用主要是選擇一條更有效的資源利用途徑，兩個機制都很好的保證了它的能源利用最合理化。7.6描述一個證明聚合酶在乳糖抑制物已與操縱子結(jié)合的情況下仍能與乳糖啟動動子結(jié)合的實驗，并預(yù)期結(jié)果。答：實驗過程如下：（1）取三個器皿編號1、2、3，并加入等體積含有等量包括乳糖啟動子的DNA片段的溶液。（2）在2、3中加入含有乳糖阻抑物的溶液，在1中加等量蒸餾水。（3）在乳糖抑制物與DNA結(jié)合后，加入RNA聚合酶，反應(yīng)20分鐘，使形成開放的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物。（4）加肝素以阻止任何新的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成，并加入除CTP以外的所有反應(yīng)物，培養(yǎng)5分鐘。（5）加入用標(biāo)記的CTP，在3中加入誘導(dǎo)物IPTG，在1、2中加入等量蒸餾水，反應(yīng)10分鐘以合成RNA。（6）電泳轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，電泳時在不同泳道中加入相應(yīng)編號的器皿中的物質(zhì)。實驗結(jié)果預(yù)期： 1、3道中應(yīng)該在轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物位置有帶，2中沒有。因為在第4步中加了肝素以阻止任何新的轉(zhuǎn)錄復(fù)合物的形成，在3中有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，所以在第3步有乳糖阻抑物存在時必形成了轉(zhuǎn)錄復(fù)合體，說明聚合酶在乳糖阻抑物已與操縱子結(jié)合的情況下仍能與乳糖啟動動子結(jié)合。7.7簡述實驗和實驗結(jié)果以說明乳糖抑制子阻止RNA聚合酶與啟動子相結(jié)合.答：由圖可以說明RNA聚合酶與啟動子的結(jié)合是一個平衡過程。在實驗中使用末端磷酸帶標(biāo)記的CTP參加轉(zhuǎn)錄過程，這樣，產(chǎn)物焦磷酸的放射性含量就反映了轉(zhuǎn)錄的進行程度。在實驗中，反應(yīng)時間與放射含量正相關(guān)，但當(dāng)加入肝素或者抑制子時，放射性含量很快不再增加，說明轉(zhuǎn)錄得到抑制，而肝素的作用是與聚合酶結(jié)合，阻止其與啟動子結(jié)合。自然地可假設(shè)抑制因子正是與操縱子結(jié)合，從而與聚合酶相互作用，使其不能與啟動子作用。7.8我們?nèi)绾蔚弥齻€opereator對基因的完全表達是必須的？移去輔助operator中的一個或兩個，對基因表達有什么影響？答：從圖7.8中可看出，只有主操縱子O1,只能產(chǎn)生18倍的抑制，而O1和輔操縱子O2或O3可產(chǎn)生較高水平的抑制，而三者多存在時，抑制水平達最高，所以說三個opereator對基因的完全表達是必須的。去除兩輔助操縱子對基因表達的影響也可直接從圖中的出：去除兩輔助操縱子之一，是抑制水平稍微降低，但若兩輔助操縱子完全去除，使抑制水平降低了50倍。圖7.8三個操縱子上變異的影響。分別將野生型和變異型的lacoperon片段載入λ噬菌體DNA，讓這些噬菌體DNA浸染大腸桿菌細胞，插入其染色體。引入的lac片段包含operator、lacpromoter,lacZgene。E.coli細胞不含lzcZ基因，但有l(wèi)acI基因。通過分析β-galactosidase的水平測定表達受抑制的水平7.9描述一個通過野生型CAP和變異型CAP（使cAMP與CAP之間的親合力減?。﹣肀憩F(xiàn)cAMP對β-牛乳糖合成的促進作用的實驗，并給出相應(yīng)的結(jié)論。答：Fig7.14野生型CAP和變異型的CAP與cAMP對β-牛乳糖合成的促進作用圖Pastan和他的同事們讓細菌提取液分別在野生型CAP和變異型CAP的條件下，同樣地增大兩者的cAMP濃度，觀察各自的β-牛乳糖的合成情況。紅色表示野生型CAP與cAMP對β-牛乳糖合成的促進作用，而綠色表示cAMP與CAP之間的親合力減小的變異型CAP與cAMP對β-牛乳糖合成的促進作用。從圖中可以看出變異型CAP與cAMP對β-牛乳糖合成的促進作用明顯不如野生型的，這也就證明了CAP與cAMP的結(jié)合體才是乳糖操縱子的促進因子（而不單是cAMP）。7.10提出假說來說明CAP-cAMP如何激活Lac基因的轉(zhuǎn)錄，并說明其中聚合酶α亞基的C末端在其中的作用。答：CAP-cAMP的Activatorsite位于RNA聚合酶啟動子的上游，相當(dāng)于UPelement，當(dāng)CAP-Camp二聚物結(jié)合到Activatorsite后，促使RNA聚合酶結(jié)合到LacYZA結(jié)構(gòu)基因的啟動子上。實驗表明當(dāng)去除а―subunit的CTD后，RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄水平和不被激活是沒有很大的區(qū)別，而完整的RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄水平會提高很多。這說明а―subunit的CTD對于促進RNA聚合酶結(jié)合到啟動子上有很大的作用。當(dāng)培養(yǎng)集中的葡萄糖含量很高的情況下，cAMP的含量很低，因此即使沒有抑制物的情況下，由于Lac的啟動子是一個弱的啟動子，其基本的轉(zhuǎn)錄水平很低。當(dāng)葡萄糖的含量很低的情況下，cAMP的含量上升，cAMP和CAP結(jié)合形成復(fù)合物，兩個這樣的復(fù)合物形成二聚替他們一起結(jié)合到Activatorsite上，促進RNA聚合酶和DNA形成closedpromotercomplex。這樣轉(zhuǎn)錄水平很高。LacZYA的啟動子沒有UPelement，是一個弱的啟動子，由圖我們知道當(dāng)CAP-cAMP復(fù)合物的二聚體結(jié)合到Activatorsite后先黨與UPelement和а―subunit的CTD作用，轉(zhuǎn)錄水平提高很多。證明二者相互作用的實驗：（1）去掉α-subunit的CTD后即使有CAP-cAMP轉(zhuǎn)錄水平也很低；（2）Activatorsite和-35、-10box的距離很近；（3）通過DNasemapping發(fā)現(xiàn)CAP-cAMP復(fù)合物的作用位點和RNA聚合酶的結(jié)合位點距離很近（4）可以通過突變補償?shù)姆椒ㄊ莾蓚€都改變的CAP-cAMP復(fù)合物和α-subunit的CTD起到和未突變前相同的作用。7.11描述并給出顯示CAP-cAMP結(jié)合在lac啟動子區(qū)域后使其彎曲的電泳實驗結(jié)果。答：圖7.11驗證CAP-cAMP-promoter復(fù)合體使啟動子彎曲的電泳實驗圖用不同的限制性內(nèi)切酶可以從不同的作用位點切開環(huán)狀DNA，使啟動子位于所切DNA不同的位置。由于DNA電泳時的遷移速度與彎曲發(fā)生的位置有關(guān)，彎曲位點越靠近中間，其遷移速度越慢。所以如果DNA真的由于CAP-cAMP和啟動子的結(jié)合而彎曲，則不同酶所切出的產(chǎn)物會有不同的遷移速度，如圖a,b。真實的實驗結(jié)果如圖d，可以看出CAP-cAMP的結(jié)合確實使lac啟動子發(fā)生了彎曲，且從數(shù)據(jù)的分析中我們可以判斷啟動子的位置所在。7.12還有什么證據(jù)證明因CAP-cAMP結(jié)合到DNA上而使得DNA彎曲？答：當(dāng)操縱子的激活位點在啟動子上游較遠的位點時，DNA就必須彎曲從而使得CAP與RNA聚合酶相互作用。證明CAP-cAMP在DNA上的結(jié)合使得DNA彎曲的證據(jù)有以下幾個：1)對被不同酶切的質(zhì)粒進行電泳。如圖7.12.1。當(dāng)DNA彎曲時，它在電泳中移動的速度就會減慢，彎曲越靠近中部移動速度越慢。如圖中（a）紅色部分是CAP的結(jié)合位點，1、2、3、4分別是四種酶的酶切位點，（b）是對質(zhì)粒分別用四種酶切后的圖示，已經(jīng)有CAP結(jié)合在DNA上使其彎曲了。對（b）中四種酶切后的DNA進行電泳，則由前可知若DNA因CAP的結(jié)合而彎曲，四種DNA移動速度應(yīng)不相同，移動速度大小關(guān)系為1<2=4<3，若DNA未彎曲則速度應(yīng)相同。電泳后的速度關(guān)系如7.12.1中（c）所示，說明DNA確實因為CAP的結(jié)合而彎曲了。Fig7.12.1結(jié)合CAP的DNA的電泳2）X光晶體結(jié)構(gòu)圖。從圖7.12.2的DNA與CAP的復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)圖可以很明顯地看出，由于CAP的結(jié)合而使得DNA有了一個九十四度的彎曲。這是對CAP的結(jié)合使DNA彎曲的直接證據(jù)。圖7.12.2DNA與CAP的復(fù)合物的晶體結(jié)構(gòu)圖。Fig7.12.3CAP-cAMP與DNA復(fù)合物的X光晶體結(jié)構(gòu)圖3）替代彎曲的方法。若CAP-cAMP與DNA結(jié)合能引起DNA彎曲而促進啟動子開放復(fù)合體的形成，則如果無CAP結(jié)合，但改變DNA體部分結(jié)構(gòu)使其在何時位點上形成彎曲結(jié)構(gòu)，也應(yīng)該能促進啟動子開放復(fù)合體的形成。實驗時，將lac操縱子上的CAP結(jié)合位點改成（dA）.（dT）,而使DNA無CAP結(jié)合時自己彎曲，結(jié)果發(fā)現(xiàn)此結(jié)構(gòu)也能促進啟動子開放復(fù)合體的形成。這個實驗說明，CAP-cAMP的結(jié)合可以使的DNA彎曲。7.13給出一個模型并解釋為什么DNA的彎曲可以促進基因的轉(zhuǎn)錄。答：首先，這種結(jié)合會使CAP上的聚合酶結(jié)合位點調(diào)整成合適的狀態(tài)來與聚合酶結(jié)合，從而將它吸引到啟動子上(比如CAP-lac-promoter)。另一種把聚合酶引到啟動子的方法是用DNA結(jié)合的方法引起DNA纏繞在聚合酶上，使上游的結(jié)合位點與酶能夠接觸到（比如arapeomoter）。7.14簡述CAP(cataboliteactivatorprotein，代謝產(chǎn)物激活子蛋白)激活麥芽糖調(diào)控子(maltoseregulon)的作用模型。答：大腸桿菌麥芽糖調(diào)控子中含有多個基因和相應(yīng)的啟動子(promoter)序列，其中部分啟動子受MalT（另一種調(diào)控蛋白）的控制，部分啟動子受CAP控制，還有兩個啟動子(malEp和malKp)受MalT和CAP的雙重控制。這里以最后一種為例說明CAP的作用模型。在DNA上，啟動子malEp和malKp啟動轉(zhuǎn)錄的方向是相反的，兩者之間相隔271個堿基對（見圖7.14.1）。兩者間有5個MalT結(jié)合位點（紅色）和3個CAP結(jié)合位點（藍色）。圖7.14.1啟動子malEp和malKpMalT結(jié)合位點3、4、5實際上分別是兩個各相差3個堿基對而互相重疊的MalT結(jié)合位點（見圖7.14.2）。當(dāng)CAP不存在時，MalT優(yōu)先結(jié)合到3、4、5位點上。但這三個位點并非起始轉(zhuǎn)錄的最佳位置——在這三個位置上MalT沒有與啟動子的-10序列正確定位。當(dāng)CAP結(jié)合到自己的結(jié)合位點上后，CAP與MalT的相互作用可將3、4、5位點上的MalT分別移動3個堿基對的位置而推到3’、4’、圖7.14.2啟動子malEp和malKp之間的MalT結(jié)合位點7.15給出問題14中所提出模型的實驗證據(jù)。答：1)沒有CAP結(jié)合位點的突變型（malKpΔ104）存在不同的MalT結(jié)合位點，因而轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物比野生型少。2)對以上的突變型進一步突變會使MalT結(jié)合在其他位點進而重新獲得一部分活性。3)在5~-10box之間刪除三個堿基對會使得3，4，5位點完美地與啟動子結(jié)合，這樣就可以重獲活性。4)DNase，DMS，oxygenradical三種footprinting方法可以給出更為詳細的證據(jù)。7.16請解釋以下現(xiàn)象并用圖表示例：在araBAD操縱子中的araO2和araI位點之間插入整數(shù)倍DNA螺旋（即10.5bp的整數(shù)倍）的序列仍然可以由AraC抑制轉(zhuǎn)錄；但如果插入非整數(shù)倍DNA螺旋的序列則這種抑制作用消失。答：AraC與araO2和araI1分別結(jié)合，抑制了araPBAD。其原理如下圖：雙鏈DNA可以形成一個彎曲結(jié)構(gòu)，將兩個蛋白質(zhì)結(jié)合位點拉在一起，結(jié)合在DNA上的蛋白質(zhì)即可相互作用，使這個彎曲結(jié)構(gòu)更穩(wěn)定。從而達到兩個相距較遠的蛋白質(zhì)結(jié)合位點共同作用的效果。但前提是這兩個蛋白質(zhì)結(jié)合位點必須在DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的同側(cè)，因為DNA就如同鋼絲，可以彎曲但無法扭曲。因此，如果在araO2和araI位點之間插入整數(shù)倍的DNA螺旋（即10.5bp的整數(shù)倍）的序列，兩個AraC結(jié)合位點仍可保證在DNA螺旋的同側(cè)；但如果插入非整數(shù)倍DNA螺旋，兩個AraC結(jié)合位點將會在螺旋的不同側(cè)，如上圖右所示。此時雙螺旋DNA由于無法扭曲，不能使兩個AraC相互作用，也就無法達到抑制轉(zhuǎn)錄的效果。7.18描述一個實驗證明阿拉伯糖可破壞AraC形成的抑制環(huán)（loop），并給出實驗結(jié)果。答：這個實驗有兩個部分組成。第一部分，將阿拉伯糖加入已形成抑制環(huán)微環(huán)物（minicircle）中，同時用不加阿拉伯糖的微環(huán)物做對照，培養(yǎng)并進行電泳分析。第二部分，用已形成抑制環(huán)的微環(huán)物進行電泳，在電泳開始后，在一個泳道中加入阿拉伯糖，另一個不加以做對照。實驗可得以下結(jié)果：第一部分，如圖（a）所示，第四道為微環(huán)物加入阿拉伯糖后的圖像，由圖可知，加入阿拉伯糖后，抑制環(huán)消失，微環(huán)物電泳移動速率變慢；第二泳道為沒有加阿拉伯糖的微環(huán)物，由圖可知，抑制環(huán)存在，電泳速率較快。第二部分，如圖（b）所示，第四道為電泳開始時未加阿拉伯糖，則抑制環(huán)存在；第四道為電泳開始后加入阿拉伯糖，則抑制環(huán)消失。由這個實驗可以證明阿拉伯糖能破環(huán)抑制環(huán)。7.19描述一個應(yīng)用araO2和araI來形成抑制環(huán)的實驗并給出實驗結(jié)果。答：實驗是由Lobell和Schlief做的，他們先用電泳證明了在沒有樹膠醛糖的情況下AraC可以導(dǎo)致環(huán)的形成。他們用一個DNA的小型超螺旋環(huán)來代替整個大腸桿菌的DNA，這種叫作minicircle的小型超螺旋環(huán)含有araO2和araI。然后他們加入了AraO2并且利用成環(huán)的超螺旋DNA比未成環(huán)的更劇具電泳能力來測定成環(huán)情況。實驗表明所成環(huán)的穩(wěn)定性與AraC和araO2，araI的結(jié)合有關(guān)。7.20描述一個實驗證明消除阿拉伯糖可以使被打開的抑制環(huán)重新成環(huán)，并給出實驗結(jié)果。答：1）首先，Lobell和Schleif通過實驗證明了AraC可以促使DNA形成抑制ara操縱子作用的環(huán)狀結(jié)構(gòu)以及arabinose（阿拉伯糖）可以打開這種抑制環(huán)這兩點，這是進行以下實驗的前提。2）接著，Lobell和Schleif利用實驗證明了消除阿拉伯糖可以使被打開的抑制環(huán)重新成環(huán)，具體過程如下：a.用AraC使經(jīng)過標(biāo)記的DNA成環(huán)（該步驟中溶液內(nèi)不含阿拉伯糖）；b.加入過量未標(biāo)記的競爭DNA；c.加入阿拉伯糖，使抑制環(huán)打開；d.用含有阿拉伯糖的緩沖液去稀釋DNA；e.用另一份不含阿拉伯糖的緩沖液去稀釋上一步驟所得的溶液（中的阿拉伯糖）f.電泳成像3)實驗結(jié)果如下圖：照片上方的圖表也表明了該實驗的過程，電泳顯示結(jié)果如下：泳道1：向標(biāo)記過的DNA溶液中加入競爭性DNA而未加AraC——沒有檢測到環(huán)狀復(fù)合體泳道2：向標(biāo)記過的DNA溶液中依次加入AraC和競爭性DNA——檢測到穩(wěn)定的環(huán)狀復(fù)合體泳道3，4：向已成環(huán)的DNA溶液中加入含有競爭性DNA和阿拉伯糖的緩沖液——復(fù)合體穩(wěn)定性明顯下降，環(huán)被打開泳道5，6：用不含阿拉伯糖的緩沖液稀釋前一溶液中的阿拉伯糖——復(fù)合體重新成環(huán)4)結(jié)論：以上實驗結(jié)果證明，消除阿拉伯糖可以使被打開的抑制環(huán)重新成環(huán)。7.21描述一個實驗并寫出實驗結(jié)果。要求該實驗?zāi)苷f明在開放DNA（unlooped）而不是彎曲DNA(looped)中，araI2元件對AraC調(diào)節(jié)因子的結(jié)合起重要作用。答：實驗中采用只含阿拉伯糖操縱子的超螺旋環(huán)狀DNA（minicircle），大約含404個堿基對。圖7.21.1阿拉伯糖操縱子的彎曲與開放形態(tài)同時實驗中采用araI2元件突變體與野生型的對照實驗，先加入AraC使DNA彎曲(looped)，然后加入阿拉伯糖，觀察各實驗組能否改變至開放態(tài)，同時為了能做出更清晰的區(qū)分條帶，加入限制酶Hind=3\*ROMANIII使環(huán)狀DNA打開為線性，便于電泳分離。圖7.21.2實驗結(jié)果預(yù)計（a）AraC存在情況下，加入阿拉伯糖，野生型中的開放式DNA不斷增加，說明基因形態(tài)從彎曲型（looped）向開放型（unlooped）轉(zhuǎn)變；而在araI2元件突變體中則不存在這一轉(zhuǎn)變現(xiàn)象，說明araI2元件的不正常使AraC只能與araI1及araO2元件結(jié)合，DNA始終處于彎曲狀態(tài)。（b）為使上述結(jié)果更為明顯，使用限制酶Hind=3\*ROMANIII，將環(huán)狀的DNA切成直線型，是電泳結(jié)果更為明顯，在野生型中出現(xiàn)了開放DNA的條帶，而araI2元件突變體中不存在。通過上述實驗，我們就可以發(fā)現(xiàn)，araI2元件與AraC的結(jié)合，是產(chǎn)生于開放形態(tài)（unlooped）DNA，而不是彎曲形態(tài)（looped）。7.22提出一個模型并解釋trp操縱子的負調(diào)