法醫(yī)物證學(xué)課件

第一章概論第一節(jié)法醫(yī)學(xué)概念一、法醫(yī)學(xué)定義法醫(yī)學(xué)(forensic,legalmedicine)是應(yīng)用醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及其他自然科學(xué)的理論與技術(shù)，研究并解決法律實(shí)踐中有關(guān)醫(yī)學(xué)問題的一門醫(yī)學(xué)科學(xué)?，F(xiàn)代法醫(yī)學(xué)以醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及物理學(xué)、化學(xué)等自然科學(xué)為基礎(chǔ)，研究與解決涉及法律的人身死傷病殘、生理狀態(tài)、個(gè)體認(rèn)定及其他醫(yī)學(xué)問題，為法律工作提供證據(jù)和資料，是有獨(dú)立的理論體系和專門檢驗(yàn)技術(shù)、多科性的應(yīng)用科學(xué)，是法學(xué)與醫(yī)學(xué)交叉的邊緣學(xué)科。二、法醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)類：解剖、組胚、病理等臨床醫(yī)學(xué)類：內(nèi)科、外科、婦產(chǎn)科等生物學(xué)：動(dòng)物學(xué)、植物學(xué)、人類學(xué)、遺傳學(xué)、生化學(xué)、免疫學(xué)等物理、化學(xué)及其他：力學(xué)、電學(xué)、光學(xué)，有機(jī)化學(xué)、無機(jī)化學(xué)、分析化學(xué)，數(shù)學(xué)等法學(xué)：刑法學(xué)、訴訟法學(xué)、民商法學(xué)三、法醫(yī)學(xué)的研究對(duì)象和研究方法（一）研究對(duì)象

人體活體：生命活動(dòng)全過程遇到涉及法律的傷、病、殘問題，生理功能狀況，個(gè)體特征及其相關(guān)的專門性問題，生命科學(xué)的相關(guān)問題等。尸體（尸塊、尸骨）：深入地研究其變化規(guī)律，研究死亡原因、死亡過程的規(guī)律及鑒定方法，研究個(gè)體識(shí)別的專門技術(shù)，研究死亡鑒定的其他專門性問題。人體物質(zhì)（血、分泌物、組織塊等）：是法醫(yī)學(xué)的具體研究對(duì)象。（一）研究對(duì)象相關(guān)場(chǎng)所：研究發(fā)現(xiàn)、提取、識(shí)別與傷亡有關(guān)的各種信息及物質(zhì)，為查清案件事實(shí)提供的科學(xué)幫助和證據(jù)。

相關(guān)資料：涉及法醫(yī)學(xué)專門性問題的各種資料（如視聽、圖片、影像、軟件等資料），是現(xiàn)代法醫(yī)學(xué)必須研究的對(duì)象。

（二）研究方法

例如臨床檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查、電生理檢查等概括了醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)的研究方法四、法醫(yī)學(xué)的服務(wù)對(duì)象為偵查破案、審判、仲裁、治安處罰等執(zhí)法工作服務(wù)為立法工作服務(wù)為處理內(nèi)部關(guān)系，構(gòu)建社會(huì)主義和諧社會(huì)服務(wù)“云都”案件：1999年1月24日新加坡籍華人沈京在云都浴場(chǎng)死亡，3月29日向一中院提起300萬民事賠償?shù)脑V訟。原告舉證死亡系觸電的證據(jù)１沈京在云都浴室死亡２服務(wù)員的證詞有電３多名浴客的證詞有電４死者朋友右臂的青紫淤血５醫(yī)院醫(yī)生診斷結(jié)論為觸電６不同意解剖：滿族＋超過

24h被告否認(rèn)死亡系觸電的證據(jù)１死亡不排除心臟?。哺邷厣渌鳎只耪`認(rèn)３有利害關(guān)系，３人未感到４觸電不會(huì)引起青紫淤血。５此為根據(jù)病人的述說診斷６市勞動(dòng)保護(hù)檢測(cè)站：電器不漏電＋大樓接地“云都”案件：尸體解剖結(jié)論：①死者臀部有一電流斑，鏡檢亦支持②電流斑上有金屬微粒（同現(xiàn)場(chǎng)金屬）法院的判決：

①死因與觸電有關(guān)

②賠償56萬五、法醫(yī)學(xué)與相鄰學(xué)科的關(guān)系與司法鑒定學(xué)的關(guān)系

司法鑒定學(xué)是自然科學(xué)與社會(huì)科學(xué)（法學(xué)）相交叉的邊緣科學(xué)，屬邊緣法學(xué)，是法學(xué)的二類學(xué)科。法醫(yī)學(xué)是司法鑒定學(xué)歷史最悠久、基礎(chǔ)最厚實(shí)、應(yīng)用最廣泛、技術(shù)最成熟、作用最突出的骨干學(xué)科。與法科學(xué)的關(guān)系我國(guó)譯為“法庭科學(xué)”。其研究的范圍比司法鑒定學(xué)廣泛，除鑒定外，還為控辯雙方提供科學(xué)咨詢和技術(shù)理論分析，為法院作情況鑒定。分科很多，國(guó)外有的學(xué)者羅列了三十多個(gè)法科學(xué)分科，法醫(yī)學(xué)是其中第一位的分學(xué)科。五、法醫(yī)學(xué)與相鄰學(xué)科的關(guān)系與刑事偵查學(xué)的關(guān)系

刑事偵查學(xué)是研究偵查策略和偵查技術(shù)，發(fā)現(xiàn)、提取、檢驗(yàn)、識(shí)別、鑒定證據(jù)為揭露犯罪、證實(shí)犯罪的科學(xué)。其任務(wù)比法醫(yī)學(xué)狹小。與法學(xué)的關(guān)系法醫(yī)學(xué)要研究法學(xué)理論、研究實(shí)體法學(xué)、程序法學(xué)的立法要求，實(shí)現(xiàn)立法要求所賦予法醫(yī)學(xué)的任務(wù)。而法學(xué)也必須研究法醫(yī)學(xué)，了解法醫(yī)學(xué)的技術(shù)進(jìn)展，并以新成果不斷豐富法學(xué)有關(guān)證據(jù)學(xué)方面的內(nèi)容。第二節(jié)法醫(yī)學(xué)的分類法醫(yī)學(xué)有“小百科全書”之稱，有二十多個(gè)分科，一般分為基礎(chǔ)法醫(yī)學(xué)和應(yīng)用法醫(yī)學(xué)。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)病理學(xué)主要研究涉及法律專門性問題的人體組織解剖病理、病理生理的改變及其規(guī)律，死亡原因及機(jī)理、死后的變化等一門學(xué)科。其分支有猝死及其他正常的死亡病理、暴力死死亡病理學(xué)，以及窒息病理、損傷病理、中毒病理、死亡學(xué)、尸變征象學(xué)等。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)損傷學(xué)主要研究外力（主要是物理性外力）作用而發(fā)生組織完整性破壞及功能障礙的理論及鑒定技術(shù)方法的一門學(xué)科。法醫(yī)臨床學(xué)主要研究活體涉及法律專門性問題的傷、病、殘、生理功能狀態(tài)、勞動(dòng)能力等的相關(guān)理論、臨床檢驗(yàn)及判定的一門學(xué)科。法醫(yī)毒理學(xué)主要研究毒（藥）物毒品的性狀及作用，中毒原因及癥狀，檢驗(yàn)方法及判定的一門學(xué)科。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)物證學(xué)主要研究人體物質(zhì)的生物學(xué)特性及檢驗(yàn)、識(shí)別方法的學(xué)科。法醫(yī)精神病學(xué)主要研究涉及法律的精神活動(dòng)異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責(zé)任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關(guān)的能力及精神障礙傷殘等的專門學(xué)科。法醫(yī)人類學(xué)主要研究以體質(zhì)人類學(xué)的理論及技術(shù)方法解決個(gè)體認(rèn)定問題的檢驗(yàn)與判定，包括個(gè)體識(shí)別（人身的同一認(rèn)定）、法醫(yī)骨科學(xué)、法醫(yī)齒科學(xué)等學(xué)科。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)物證學(xué)主要研究人體物質(zhì)的生物學(xué)特性及檢驗(yàn)、識(shí)別方法的學(xué)科。法醫(yī)精神病學(xué)主要研究涉及法律的精神活動(dòng)異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責(zé)任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關(guān)的能力及精神障礙傷殘等的專門學(xué)科。法醫(yī)人類學(xué)主要研究以體質(zhì)人類學(xué)的理論及技術(shù)方法解決個(gè)體認(rèn)定問題的檢驗(yàn)與判定，包括個(gè)體識(shí)別（人身的同一認(rèn)定）、法醫(yī)骨科學(xué)、法醫(yī)齒科學(xué)等學(xué)科。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科醫(yī)學(xué)賠償學(xué)主要研究人身各種傷害的經(jīng)濟(jì)賠償問題的科學(xué)。涉及醫(yī)學(xué)、法學(xué)、經(jīng)濟(jì)學(xué)、社會(huì)科學(xué)等方面諸多問題，急待研究解決。必須以構(gòu)建社會(huì)主義和諧社會(huì)高度給予重視。醫(yī)事法學(xué)主要研究衛(wèi)生及診療防疫、預(yù)防等的法律問題，范圍很廣，如醫(yī)療事故的鑒定問題，衛(wèi)生法律的制定問題。死亡判定與安樂死問題，人工授精，代孕的父權(quán)及母權(quán)問題，性轉(zhuǎn)換、遺傳工程、衛(wèi)生防疫、性病傳播等的法律問題。二、法醫(yī)學(xué)鑒定的種類死因鑒定經(jīng)過對(duì)尸體、尸塊、尸骨、人體物質(zhì)及其他相關(guān)物體（質(zhì)）的檢驗(yàn)，分析研究，確定死亡種類及死亡原因，判定死亡性質(zhì)，分析死亡經(jīng)過，推斷死亡時(shí)間，評(píng)斷致傷工具（物），認(rèn)定死者身份及其他與死亡有關(guān)的問題。傷殘、傷情鑒定確定損傷事實(shí)（有無傷）；判斷損傷原因及經(jīng)過；評(píng)析損傷與疾病的關(guān)系，判定傷害程度及后遺障礙、評(píng)定傷殘等級(jí)及休息、營(yíng)養(yǎng)、護(hù)理期限；分析人身傷害的其他有關(guān)問題。二、法醫(yī)學(xué)鑒定的種類勞動(dòng)能力鑒定人身傷害（包括疾?。┖舐殬I(yè)勞動(dòng)能力、謀生勞動(dòng)能力、特殊勞動(dòng)能力等的鑒定。生理功能狀態(tài)鑒定評(píng)定各組織器官系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及功能狀態(tài)；評(píng)定性及生殖功能狀態(tài)等。幫助各類訴訟（包括行政訴訟）、治安管理、性病防治、戒毒、勞動(dòng)仲裁、保險(xiǎn)賠償、傳染病管理等提供事實(shí)基礎(chǔ)。二、法醫(yī)學(xué)鑒定的種類人體物質(zhì)及血緣關(guān)系鑒定個(gè)體識(shí)別、親子鑒定、DNA檢測(cè)等。精神活動(dòng)狀態(tài)鑒定根據(jù)醫(yī)學(xué)要件確定精神活動(dòng)障礙狀態(tài)；根據(jù)醫(yī)學(xué)及法學(xué)要件評(píng)定刑事責(zé)任能力或民事行為能力；評(píng)定精神損傷程度；判斷受審能力、作證能力、服刑能力；評(píng)定性自衛(wèi)能力；評(píng)定行使婚姻權(quán)、生育權(quán)能力；評(píng)定心理活動(dòng)特征等。第三節(jié)法醫(yī)學(xué)的任務(wù)基本任務(wù)為刑事訴訟及時(shí)提供證據(jù)為民事訴訟提供科學(xué)的事實(shí)基礎(chǔ)為行政訴訟的當(dāng)事雙方舉證提供科學(xué)幫助為非訴訟執(zhí)法活動(dòng)提供科學(xué)意見第三節(jié)法醫(yī)學(xué)的任務(wù)具體任務(wù)（一）發(fā)現(xiàn)證據(jù)應(yīng)盡技術(shù)之能、經(jīng)驗(yàn)之智，全力的發(fā)現(xiàn)證據(jù)主動(dòng)發(fā)現(xiàn)證據(jù)細(xì)致觀察是發(fā)現(xiàn)證據(jù)的基本要領(lǐng)運(yùn)用技術(shù)手段發(fā)現(xiàn)證據(jù)

及時(shí)發(fā)現(xiàn)證據(jù)延時(shí)發(fā)現(xiàn)證據(jù)檢查發(fā)現(xiàn)證據(jù)要合法具體任務(wù)（二）提取證據(jù)記錄證據(jù)科學(xué)的提取證據(jù)

及時(shí)提取準(zhǔn)確完整提取分別包裝保全盡快送檢驗(yàn)、鑒定具體任務(wù)（三）分析識(shí)別證據(jù)分析證據(jù)與案件的關(guān)聯(lián)性分析證據(jù)有無鑒定的必要識(shí)別證據(jù)，為辦案工作及時(shí)提供科學(xué)技術(shù)分析資料

提供偵查線索提供案發(fā)時(shí)間提供案件發(fā)生過程的資料分析證據(jù)意義具體任務(wù)（四）鑒定證據(jù)證據(jù)與鑒定人體物質(zhì)同一的鑒定認(rèn)定客體種類屬性鑒定事件原因鑒定事實(shí)客觀性鑒定事實(shí)程度鑒定證據(jù)的來源和出處三、為其他法律工作提供科學(xué)意見為預(yù)防重大災(zāi)害事故、人生傷亡事故提供科學(xué)信息為預(yù)防犯罪及社會(huì)治安綜合治理工作提供資料為法學(xué)研究、立法提供資料第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)根據(jù)刑事訴訟法規(guī)定，法醫(yī)可參加有人身傷亡的案件現(xiàn)場(chǎng)的勘驗(yàn)或調(diào)查。勘驗(yàn)的任務(wù)確證死亡搶救未死亡者獲取傷亡者原始狀態(tài)資料發(fā)現(xiàn)與收集建材或痕跡監(jiān)察傷亡者幫助分析案情勘驗(yàn)步驟先靜勘后動(dòng)勘，保護(hù)現(xiàn)場(chǎng)第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)基本原則法醫(yī)是以鑒定人身份參加勘驗(yàn)的，在偵查員或主持人的統(tǒng)一指揮下進(jìn)行工作。2.細(xì)致耐心，不怕臟不怕累，嚴(yán)防走馬觀花，要“蹲下去定眼看”。3.要用專業(yè)知識(shí)、科技手段發(fā)現(xiàn)與提取檢材和物證。4.整個(gè)勘驗(yàn)過程應(yīng)充滿信心，沉著冷靜，有無收獲表情如一，對(duì)所看所聞，不隨便發(fā)表看法。

第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)尸體檢驗(yàn)尸體檢驗(yàn)是法醫(yī)學(xué)最常見最主要的檢驗(yàn)，需要查清的事實(shí)和鑒定的專門性問題，一般都是案件中最關(guān)鍵的問題。確定死因，分清正常還是非正常死亡，判定何種暴力死。判斷死亡時(shí)間或死亡經(jīng)過時(shí)間。分析死亡經(jīng)過，判定自殺、他殺或意外災(zāi)害事故致死的死亡性質(zhì)。推斷暴力死的致傷工具。尸源認(rèn)定，對(duì)無名尸塊、尸骨，經(jīng)檢驗(yàn)提供尸源認(rèn)定的依據(jù)。第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)尸體檢驗(yàn)身長(zhǎng)性別年齡營(yíng)養(yǎng)尸斑尸僵尸溫頭部顏面頸部胸部腹部背部上肢下肢外陰肛門法醫(yī)尸體檢驗(yàn)法醫(yī)檢驗(yàn)普及的重要性犯罪分子以欺騙性隱蔽性更大的科學(xué)技術(shù)手段作案。如不針鋒相對(duì)地以科學(xué)技術(shù)手段收集犯罪信息，獲取證據(jù)，難以查清案件的真實(shí)情況。健全法規(guī)、規(guī)章。加強(qiáng)科學(xué)觀念，提高有關(guān)人員對(duì)法醫(yī)尸檢重要性的認(rèn)識(shí)，克服過分相信自己的經(jīng)驗(yàn)、群眾反映、審訊筆錄的現(xiàn)象。法醫(yī)工作者隊(duì)伍的建設(shè)，提供必要的物質(zhì)條件，提高法醫(yī)的社會(huì)地位。減少阻撓解剖的迷信及情感上的因素。切實(shí)執(zhí)行對(duì)于死因不明的尸體公安機(jī)關(guān)有權(quán)決定解剖的有關(guān)規(guī)定。第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)活體檢驗(yàn)損傷檢驗(yàn)性及生殖器官的檢驗(yàn)血型及親子代遺傳關(guān)系檢驗(yàn)：疾病的檢驗(yàn)勞動(dòng)能力的認(rèn)定殘廢的等級(jí)認(rèn)定第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)人體物質(zhì)的檢驗(yàn)

又稱法醫(yī)物證檢驗(yàn)，主要檢驗(yàn)對(duì)象是組織細(xì)胞、體液、分泌液、排泄物等，目的在于查清物質(zhì)的本質(zhì)特性及個(gè)體特異性。案件資料的法醫(yī)學(xué)復(fù)核又稱文證審查。對(duì)有關(guān)法醫(yī)學(xué)專門性問題的書面材料(含圖片、音像資料)進(jìn)行鑒識(shí)和分析。第一章概論第一節(jié)法醫(yī)學(xué)概念一、法醫(yī)學(xué)定義法醫(yī)學(xué)(forensic,legalmedicine)是應(yīng)用醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及其他自然科學(xué)的理論與技術(shù)，研究并解決法律實(shí)踐中有關(guān)醫(yī)學(xué)問題的一門醫(yī)學(xué)科學(xué)。現(xiàn)代法醫(yī)學(xué)以醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及物理學(xué)、化學(xué)等自然科學(xué)為基礎(chǔ)，研究與解決涉及法律的人身死傷病殘、生理狀態(tài)、個(gè)體認(rèn)定及其他醫(yī)學(xué)問題，為法律工作提供證據(jù)和資料，是有獨(dú)立的理論體系和專門檢驗(yàn)技術(shù)、多科性的應(yīng)用科學(xué)，是法學(xué)與醫(yī)學(xué)交叉的邊緣學(xué)科。二、法醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)類：解剖、組胚、病理等臨床醫(yī)學(xué)類：內(nèi)科、外科、婦產(chǎn)科等生物學(xué)：動(dòng)物學(xué)、植物學(xué)、人類學(xué)、遺傳學(xué)、生化學(xué)、免疫學(xué)等物理、化學(xué)及其他：力學(xué)、電學(xué)、光學(xué)，有機(jī)化學(xué)、無機(jī)化學(xué)、分析化學(xué)，數(shù)學(xué)等法學(xué)：刑法學(xué)、訴訟法學(xué)、民商法學(xué)三、法醫(yī)學(xué)的研究對(duì)象和研究方法（一）研究對(duì)象

人體活體：生命活動(dòng)全過程遇到涉及法律的傷、病、殘問題，生理功能狀況，個(gè)體特征及其相關(guān)的專門性問題，生命科學(xué)的相關(guān)問題等。尸體（尸塊、尸骨）：深入地研究其變化規(guī)律，研究死亡原因、死亡過程的規(guī)律及鑒定方法，研究個(gè)體識(shí)別的專門技術(shù)，研究死亡鑒定的其他專門性問題。人體物質(zhì)（血、分泌物、組織塊等）：是法醫(yī)學(xué)的具體研究對(duì)象。（一）研究對(duì)象相關(guān)場(chǎng)所：研究發(fā)現(xiàn)、提取、識(shí)別與傷亡有關(guān)的各種信息及物質(zhì)，為查清案件事實(shí)提供的科學(xué)幫助和證據(jù)。

相關(guān)資料：涉及法醫(yī)學(xué)專門性問題的各種資料（如視聽、圖片、影像、軟件等資料），是現(xiàn)代法醫(yī)學(xué)必須研究的對(duì)象。

（二）研究方法

例如臨床檢查、實(shí)驗(yàn)室檢查、電生理檢查等概括了醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)的研究方法四、法醫(yī)學(xué)的服務(wù)對(duì)象為偵查破案、審判、仲裁、治安處罰等執(zhí)法工作服務(wù)為立法工作服務(wù)為處理內(nèi)部關(guān)系，構(gòu)建社會(huì)主義和諧社會(huì)服務(wù)“云都”案件：1999年1月24日新加坡籍華人沈京在云都浴場(chǎng)死亡，3月29日向一中院提起300萬民事賠償?shù)脑V訟。原告舉證死亡系觸電的證據(jù)１沈京在云都浴室死亡２服務(wù)員的證詞有電３多名浴客的證詞有電４死者朋友右臂的青紫淤血５醫(yī)院醫(yī)生診斷結(jié)論為觸電６不同意解剖：滿族＋超過

24h被告否認(rèn)死亡系觸電的證據(jù)１死亡不排除心臟?。哺邷厣渌鳎只耪`認(rèn)３有利害關(guān)系，３人未感到４觸電不會(huì)引起青紫淤血。５此為根據(jù)病人的述說診斷６市勞動(dòng)保護(hù)檢測(cè)站：電器不漏電＋大樓接地“云都”案件：尸體解剖結(jié)論：①死者臀部有一電流斑，鏡檢亦支持②電流斑上有金屬微粒（同現(xiàn)場(chǎng)金屬）法院的判決：

①死因與觸電有關(guān)

②賠償56萬五、法醫(yī)學(xué)與相鄰學(xué)科的關(guān)系與司法鑒定學(xué)的關(guān)系

司法鑒定學(xué)是自然科學(xué)與社會(huì)科學(xué)（法學(xué)）相交叉的邊緣科學(xué)，屬邊緣法學(xué)，是法學(xué)的二類學(xué)科。法醫(yī)學(xué)是司法鑒定學(xué)歷史最悠久、基礎(chǔ)最厚實(shí)、應(yīng)用最廣泛、技術(shù)最成熟、作用最突出的骨干學(xué)科。與法科學(xué)的關(guān)系我國(guó)譯為“法庭科學(xué)”。其研究的范圍比司法鑒定學(xué)廣泛，除鑒定外，還為控辯雙方提供科學(xué)咨詢和技術(shù)理論分析，為法院作情況鑒定。分科很多，國(guó)外有的學(xué)者羅列了三十多個(gè)法科學(xué)分科，法醫(yī)學(xué)是其中第一位的分學(xué)科。五、法醫(yī)學(xué)與相鄰學(xué)科的關(guān)系與刑事偵查學(xué)的關(guān)系

刑事偵查學(xué)是研究偵查策略和偵查技術(shù)，發(fā)現(xiàn)、提取、檢驗(yàn)、識(shí)別、鑒定證據(jù)為揭露犯罪、證實(shí)犯罪的科學(xué)。其任務(wù)比法醫(yī)學(xué)狹小。與法學(xué)的關(guān)系法醫(yī)學(xué)要研究法學(xué)理論、研究實(shí)體法學(xué)、程序法學(xué)的立法要求，實(shí)現(xiàn)立法要求所賦予法醫(yī)學(xué)的任務(wù)。而法學(xué)也必須研究法醫(yī)學(xué)，了解法醫(yī)學(xué)的技術(shù)進(jìn)展，并以新成果不斷豐富法學(xué)有關(guān)證據(jù)學(xué)方面的內(nèi)容。第二節(jié)法醫(yī)學(xué)的分類法醫(yī)學(xué)有“小百科全書”之稱，有二十多個(gè)分科，一般分為基礎(chǔ)法醫(yī)學(xué)和應(yīng)用法醫(yī)學(xué)。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)病理學(xué)主要研究涉及法律專門性問題的人體組織解剖病理、病理生理的改變及其規(guī)律，死亡原因及機(jī)理、死后的變化等一門學(xué)科。其分支有猝死及其他正常的死亡病理、暴力死死亡病理學(xué)，以及窒息病理、損傷病理、中毒病理、死亡學(xué)、尸變征象學(xué)等。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)損傷學(xué)主要研究外力（主要是物理性外力）作用而發(fā)生組織完整性破壞及功能障礙的理論及鑒定技術(shù)方法的一門學(xué)科。法醫(yī)臨床學(xué)主要研究活體涉及法律專門性問題的傷、病、殘、生理功能狀態(tài)、勞動(dòng)能力等的相關(guān)理論、臨床檢驗(yàn)及判定的一門學(xué)科。法醫(yī)毒理學(xué)主要研究毒（藥）物毒品的性狀及作用，中毒原因及癥狀，檢驗(yàn)方法及判定的一門學(xué)科。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)物證學(xué)主要研究人體物質(zhì)的生物學(xué)特性及檢驗(yàn)、識(shí)別方法的學(xué)科。法醫(yī)精神病學(xué)主要研究涉及法律的精神活動(dòng)異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責(zé)任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關(guān)的能力及精神障礙傷殘等的專門學(xué)科。法醫(yī)人類學(xué)主要研究以體質(zhì)人類學(xué)的理論及技術(shù)方法解決個(gè)體認(rèn)定問題的檢驗(yàn)與判定，包括個(gè)體識(shí)別（人身的同一認(rèn)定）、法醫(yī)骨科學(xué)、法醫(yī)齒科學(xué)等學(xué)科。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科法醫(yī)物證學(xué)主要研究人體物質(zhì)的生物學(xué)特性及檢驗(yàn)、識(shí)別方法的學(xué)科。法醫(yī)精神病學(xué)主要研究涉及法律的精神活動(dòng)異常的各種表現(xiàn)及判定、判明責(zé)任能力、行為能力、性自衛(wèi)能力、其他與法律有關(guān)的能力及精神障礙傷殘等的專門學(xué)科。法醫(yī)人類學(xué)主要研究以體質(zhì)人類學(xué)的理論及技術(shù)方法解決個(gè)體認(rèn)定問題的檢驗(yàn)與判定，包括個(gè)體識(shí)別（人身的同一認(rèn)定）、法醫(yī)骨科學(xué)、法醫(yī)齒科學(xué)等學(xué)科。一、應(yīng)用法醫(yī)學(xué)的主要分科醫(yī)學(xué)賠償學(xué)主要研究人身各種傷害的經(jīng)濟(jì)賠償問題的科學(xué)。涉及醫(yī)學(xué)、法學(xué)、經(jīng)濟(jì)學(xué)、社會(huì)科學(xué)等方面諸多問題，急待研究解決。必須以構(gòu)建社會(huì)主義和諧社會(huì)高度給予重視。醫(yī)事法學(xué)主要研究衛(wèi)生及診療防疫、預(yù)防等的法律問題，范圍很廣，如醫(yī)療事故的鑒定問題，衛(wèi)生法律的制定問題。死亡判定與安樂死問題，人工授精，代孕的父權(quán)及母權(quán)問題，性轉(zhuǎn)換、遺傳工程、衛(wèi)生防疫、性病傳播等的法律問題。二、法醫(yī)學(xué)鑒定的種類死因鑒定經(jīng)過對(duì)尸體、尸塊、尸骨、人體物質(zhì)及其他相關(guān)物體（質(zhì)）的檢驗(yàn)，分析研究，確定死亡種類及死亡原因，判定死亡性質(zhì)，分析死亡經(jīng)過，推斷死亡時(shí)間，評(píng)斷致傷工具（物），認(rèn)定死者身份及其他與死亡有關(guān)的問題。傷殘、傷情鑒定確定損傷事實(shí)（有無傷）；判斷損傷原因及經(jīng)過；評(píng)析損傷與疾病的關(guān)系，判定傷害程度及后遺障礙、評(píng)定傷殘等級(jí)及休息、營(yíng)養(yǎng)、護(hù)理期限；分析人身傷害的其他有關(guān)問題。二、法醫(yī)學(xué)鑒定的種類勞動(dòng)能力鑒定人身傷害（包括疾病）后職業(yè)勞動(dòng)能力、謀生勞動(dòng)能力、特殊勞動(dòng)能力等的鑒定。生理功能狀態(tài)鑒定評(píng)定各組織器官系統(tǒng)結(jié)構(gòu)及功能狀態(tài)；評(píng)定性及生殖功能狀態(tài)等。幫助各類訴訟（包括行政訴訟）、治安管理、性病防治、戒毒、勞動(dòng)仲裁、保險(xiǎn)賠償、傳染病管理等提供事實(shí)基礎(chǔ)。二、法醫(yī)學(xué)鑒定的種類人體物質(zhì)及血緣關(guān)系鑒定個(gè)體識(shí)別、親子鑒定、DNA檢測(cè)等。精神活動(dòng)狀態(tài)鑒定根據(jù)醫(yī)學(xué)要件確定精神活動(dòng)障礙狀態(tài)；根據(jù)醫(yī)學(xué)及法學(xué)要件評(píng)定刑事責(zé)任能力或民事行為能力；評(píng)定精神損傷程度；判斷受審能力、作證能力、服刑能力；評(píng)定性自衛(wèi)能力；評(píng)定行使婚姻權(quán)、生育權(quán)能力；評(píng)定心理活動(dòng)特征等。第三節(jié)法醫(yī)學(xué)的任務(wù)基本任務(wù)為刑事訴訟及時(shí)提供證據(jù)為民事訴訟提供科學(xué)的事實(shí)基礎(chǔ)為行政訴訟的當(dāng)事雙方舉證提供科學(xué)幫助為非訴訟執(zhí)法活動(dòng)提供科學(xué)意見第三節(jié)法醫(yī)學(xué)的任務(wù)具體任務(wù)（一）發(fā)現(xiàn)證據(jù)應(yīng)盡技術(shù)之能、經(jīng)驗(yàn)之智，全力的發(fā)現(xiàn)證據(jù)主動(dòng)發(fā)現(xiàn)證據(jù)細(xì)致觀察是發(fā)現(xiàn)證據(jù)的基本要領(lǐng)運(yùn)用技術(shù)手段發(fā)現(xiàn)證據(jù)

及時(shí)發(fā)現(xiàn)證據(jù)延時(shí)發(fā)現(xiàn)證據(jù)檢查發(fā)現(xiàn)證據(jù)要合法具體任務(wù)（二）提取證據(jù)記錄證據(jù)科學(xué)的提取證據(jù)

及時(shí)提取準(zhǔn)確完整提取分別包裝保全盡快送檢驗(yàn)、鑒定具體任務(wù)（三）分析識(shí)別證據(jù)分析證據(jù)與案件的關(guān)聯(lián)性分析證據(jù)有無鑒定的必要識(shí)別證據(jù)，為辦案工作及時(shí)提供科學(xué)技術(shù)分析資料

提供偵查線索提供案發(fā)時(shí)間提供案件發(fā)生過程的資料分析證據(jù)意義具體任務(wù)（四）鑒定證據(jù)證據(jù)與鑒定人體物質(zhì)同一的鑒定認(rèn)定客體種類屬性鑒定事件原因鑒定事實(shí)客觀性鑒定事實(shí)程度鑒定證據(jù)的來源和出處三、為其他法律工作提供科學(xué)意見為預(yù)防重大災(zāi)害事故、人生傷亡事故提供科學(xué)信息為預(yù)防犯罪及社會(huì)治安綜合治理工作提供資料為法學(xué)研究、立法提供資料第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)根據(jù)刑事訴訟法規(guī)定，法醫(yī)可參加有人身傷亡的案件現(xiàn)場(chǎng)的勘驗(yàn)或調(diào)查。勘驗(yàn)的任務(wù)確證死亡搶救未死亡者獲取傷亡者原始狀態(tài)資料發(fā)現(xiàn)與收集建材或痕跡監(jiān)察傷亡者幫助分析案情勘驗(yàn)步驟先靜勘后動(dòng)勘，保護(hù)現(xiàn)場(chǎng)第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)現(xiàn)場(chǎng)勘驗(yàn)基本原則法醫(yī)是以鑒定人身份參加勘驗(yàn)的，在偵查員或主持人的統(tǒng)一指揮下進(jìn)行工作。2.細(xì)致耐心，不怕臟不怕累，嚴(yán)防走馬觀花，要“蹲下去定眼看”。3.要用專業(yè)知識(shí)、科技手段發(fā)現(xiàn)與提取檢材和物證。4.整個(gè)勘驗(yàn)過程應(yīng)充滿信心，沉著冷靜，有無收獲表情如一，對(duì)所看所聞，不隨便發(fā)表看法。

第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)尸體檢驗(yàn)尸體檢驗(yàn)是法醫(yī)學(xué)最常見最主要的檢驗(yàn)，需要查清的事實(shí)和鑒定的專門性問題，一般都是案件中最關(guān)鍵的問題。確定死因，分清正常還是非正常死亡，判定何種暴力死。判斷死亡時(shí)間或死亡經(jīng)過時(shí)間。分析死亡經(jīng)過，判定自殺、他殺或意外災(zāi)害事故致死的死亡性質(zhì)。推斷暴力死的致傷工具。尸源認(rèn)定，對(duì)無名尸塊、尸骨，經(jīng)檢驗(yàn)提供尸源認(rèn)定的依據(jù)。第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)尸體檢驗(yàn)身長(zhǎng)性別年齡營(yíng)養(yǎng)尸斑尸僵尸溫頭部顏面頸部胸部腹部背部上肢下肢外陰肛門法醫(yī)尸體檢驗(yàn)法醫(yī)檢驗(yàn)普及的重要性犯罪分子以欺騙性隱蔽性更大的科學(xué)技術(shù)手段作案。如不針鋒相對(duì)地以科學(xué)技術(shù)手段收集犯罪信息，獲取證據(jù)，難以查清案件的真實(shí)情況。健全法規(guī)、規(guī)章。加強(qiáng)科學(xué)觀念，提高有關(guān)人員對(duì)法醫(yī)尸檢重要性的認(rèn)識(shí)，克服過分相信自己的經(jīng)驗(yàn)、群眾反映、審訊筆錄的現(xiàn)象。法醫(yī)工作者隊(duì)伍的建設(shè)，提供必要的物質(zhì)條件，提高法醫(yī)的社會(huì)地位。減少阻撓解剖的迷信及情感上的因素。切實(shí)執(zhí)行對(duì)于死因不明的尸體公安機(jī)關(guān)有權(quán)決定解剖的有關(guān)規(guī)定。第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)法醫(yī)活體檢驗(yàn)損傷檢驗(yàn)性及生殖器官的檢驗(yàn)血型及親子代遺傳關(guān)系檢驗(yàn)：疾病的檢驗(yàn)勞動(dòng)能力的認(rèn)定殘廢的等級(jí)認(rèn)定第四節(jié)法醫(yī)學(xué)基本檢驗(yàn)人體物質(zhì)的檢驗(yàn)

又稱法醫(yī)物證檢驗(yàn)，主要檢驗(yàn)對(duì)象是組織細(xì)胞、體液、分泌液、排泄物等，目的在于查清物質(zhì)的本質(zhì)特性及個(gè)體特異性。案件資料的法醫(yī)學(xué)復(fù)核又稱文證審查。對(duì)有關(guān)法醫(yī)學(xué)專門性問題的書面材料(含圖片、音像資料)進(jìn)行鑒識(shí)和分析。

(一)尸臭尸臭是腐敗的早期征象，因腐敗氣體硫化氫、氨氣等散發(fā)出的臭味所致。春秋季節(jié)，一般死后24小時(shí)可嗅及。即使是解剖完洗完澡后，家人也會(huì)聞得出來。尸體的臭味極其特殊，聞到一次就終生不忘。二、腐敗的主要征象(二)尸綠又稱為腐敗綠斑。尸綠是由腐敗氣體中的硫化氫與血紅蛋白及其衍生物結(jié)合生成硫化血紅蛋白，或生成硫化變性血紅蛋白，或與鐵離子結(jié)合形成硫化鐵，使皮膚呈現(xiàn)污綠色的腐敗綠斑。尸綠是晚期尸變的重要征象。一旦發(fā)現(xiàn)，即可判斷此尸體已開始腐敗。尸綠出現(xiàn)的時(shí)間：在夏天，于死后12-24小時(shí)可見；春秋天氣，死后一晝夜出現(xiàn)。細(xì)菌感染、發(fā)高熱死者，腐敗較早，尸綠出現(xiàn)亦較早；若死前患化膿性病性，則腐敗亦快，尸綠出現(xiàn)亦早。

腐敗綠斑與生前皮下出血的青紫色極相似，應(yīng)注意鑒別。最好的鑒別方法是切開該處皮膚，尸綠處的皮膚下呈污綠色，無凝血塊；皮下出血處的皮下見有凝血塊，擦洗不去。腐敗綠斑尸表出現(xiàn)腐敗綠斑(三)腐敗血管網(wǎng)腐敗血管網(wǎng)是由于腐敗氣體把體內(nèi)血管里的一些已腐敗的血液擠壓到體表血管內(nèi)，腐敗血液到這些血管后，又向管外浸潤(rùn)，形成以血管為中心的粗線條。常先出現(xiàn)于胸上部、頸部等，指壓不褪色。切勿誤認(rèn)為生前有發(fā)炎充血現(xiàn)象所致。腐敗血管網(wǎng)

(四)腐敗水氣泡隨著腐敗的發(fā)展，體內(nèi)各器官組織間、各體腔的腐敗氣體越來越多，皮膚下層也充滿氣體，摸之似海綿，有捻發(fā)音，氣體把表皮鼓起成泡，泡里除氣體外還有腐敗液，稱為水氣泡。這種泡的泡蓋、泡液及泡底全呈污暗紅色，大小不等，表面皺縮，易破，惡臭。常見于高度腐敗的尸體。注意不要把腐敗水氣泡誤認(rèn)為燒燙傷水泡。后者泡周與泡底均充血，泡液清，含豐富的蛋白質(zhì)。腐敗水氣泡(五)腐敗液體流出尸體內(nèi)腐敗氣體多，壓力大，把與外相通的各臟器內(nèi)的腐敗液體(污暗紅色)壓向體外，可見于口、鼻、耳、眼、陰道、尿道、肛門，流出的污暗紅色液體，有惡臭，且冒氣泡。見于高度腐敗尸體。

(六)巨人觀尸體高度腐敗，大量的腐敗氣體充盈整個(gè)尸體，形成頭大頸粗、眼突唇翻、舌伸口外、胸隆腹鼓，男尸陰囊如氣球、陰莖粗，女尸大陰唇肥大、四肢粗圓。整個(gè)尸體變大，故稱“巨人”。此時(shí)，面貌已無法辨認(rèn)，表皮極易剝落，暴露污紫色真皮。頭發(fā)亦易脫落。各臟器充滿氣體，肚臟如海綿，有些器官軟化甚至液化。在此種情況下，對(duì)其損傷的形態(tài)、臟變化等檢驗(yàn)條件就比較差。中度腐敗，腫脹中度腐敗，開始出現(xiàn)巨人觀巨人觀巨人觀

(七)腐敗的其他征象死后嘔吐：氣體可把胃內(nèi)容物壓向食道、喉頭、口鼻孔外，稱死后嘔吐，嘔吐物可倒流入氣管，切不要誤認(rèn)為是生前吸人致死。死后分娩：孕婦尸體，氣體可把胎兒壓出，故稱死后分娩。氣體還可擠壓直腸、子宮使其脫出、腹壁炸裂。泡沫器官：高度腐敗的尸體，其內(nèi)臟器官(如肝、脾等)內(nèi)，可形成大小不一的液體氣泡，稱為泡沫器官。死后分娩泡沫器官泡沫器官（八）腐敗的法醫(yī)學(xué)意義根據(jù)腐敗的發(fā)生，有時(shí)可推斷死亡時(shí)間及死因的參考。認(rèn)識(shí)腐敗的各種征象，如尸綠、口腔及鼻腔血水溢出等，可避免誤為機(jī)械性窒息或中毒死。高度腐敗，甚至只剩骨骼、毛發(fā)、指(趾)甲者，仍可檢測(cè)金屬性中毒及骨損傷等情況；仍可使其軟組織受損，故須爭(zhēng)取及早作尸體檢驗(yàn)。

尸體被置于潮濕的環(huán)境中，在適宜真菌生長(zhǎng)的條件下，在尸體裸露部位或尸體的全身表面滋生一層白色霉斑和霉絲，稱霉尸。法醫(yī)學(xué)意義

(1)根據(jù)霉尸可推測(cè)尸體所處的環(huán)境條件，從而在一定程度上有利于分析案情。

(2)認(rèn)識(shí)霉尸變化，注意與某些損傷和疾病相鑒別。

(3)霉變尸體有時(shí)影響容貌的辨認(rèn)，尸檢時(shí)應(yīng)更加認(rèn)真仔細(xì)地進(jìn)行個(gè)人識(shí)別。

(4)某些金屬毒物可從霉尸中取材進(jìn)行毒物分析。三、霉尸

尸體軟組織經(jīng)腐敗而逐漸軟化、液化，直至完全溶解消失，毛發(fā)和指甲脫落，最后僅剩下骨骼，稱為白骨化。檢驗(yàn)白骨有著重要的法醫(yī)學(xué)意義

(1)白骨化雖可破壞尸體軟組織和器官的病變與損傷，但尸骨上的損傷痕跡有些可長(zhǎng)期保存。

(2)某些毒物(如重金屬毒物)在骨髓或骨質(zhì)內(nèi)可長(zhǎng)久保存，故仍可做中毒的化驗(yàn)檢材。

(3)死后白骨化時(shí)間不長(zhǎng)的骨髓可用于硅藻檢查。

(4)骨骼在個(gè)人識(shí)別方面具有重要意義。根據(jù)骨骼的結(jié)構(gòu)特征，可推測(cè)死者的性別、年齡。四、白骨化一、干尸干尸即為木乃伊，尸體因水分迅速蒸發(fā)而不發(fā)生腐敗，以干枯狀態(tài)保存下來，稱木乃伊。尸體水份迅速減少，以致于尸體濕度過低，細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖條件差，甚至無法繁殖，尸體進(jìn)一步干燥而干癟。尸體置于高溫、干燒、通風(fēng)環(huán)境，或放置吸濕物質(zhì)，水份蒸發(fā)消失快，尸體逐漸干枯，腐敗停止，易成干尸。馬王堆古尸、江陵古尸第四節(jié)特殊尸體現(xiàn)象1972年出土于新疆某地，葬于公元562年長(zhǎng)沙馬王堆古尸馬王堆女尸系西漢時(shí)長(zhǎng)沙國(guó)丞相利蒼的夫人，距今已將近2200年。世界上首次發(fā)現(xiàn)古代濕尸據(jù)史料記載，利蒼夫人名叫辛追，死時(shí)約50歲。1972年，辛追的墓葬被發(fā)現(xiàn)。辛追尸體出土?xí)r，全身潤(rùn)澤，皮膚覆蓋完整，毛發(fā)尚在，指、趾紋路清晰，肌肉尚有彈性。這是世界上首次發(fā)現(xiàn)濕尸，出土后震驚世界。

頭像復(fù)原第一步：是將辛追的顱骨x光片掃描進(jìn)電腦，然后根據(jù)繪畫中的“三庭五眼”理論，用4橫5縱的9條直線確定五官位置和大小，第二步：參考出土?xí)r為辛追尸體拍攝的照片，以及馬王堆的相關(guān)文獻(xiàn)資料和出土帛畫，將相關(guān)信息輸入趙成文教授自己研制的“警星cck-3型人像模擬組合系統(tǒng)”內(nèi)，第三步：按照人體解剖學(xué)和人類學(xué)原理，從這個(gè)系統(tǒng)的部件庫中尋找與辛追顱骨相匹配的五官部件。然后再運(yùn)用美術(shù)、醫(yī)學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的知識(shí)進(jìn)行制作。圖為復(fù)原的長(zhǎng)沙國(guó)丞相夫人50歲（死亡之前）的正面模擬像30歲時(shí)的模擬畫像

18歲的模擬畫像

7歲2002年7月，江蘇省連云港考古工作者在海州區(qū)雙龍村搶救性發(fā)掘出一漢代墓葬群，其中一具保存完好的漢代女尸凌惠平，被國(guó)內(nèi)考古專家稱作迄今為止長(zhǎng)江以北惟一保存完好的濕尸。(1)干尸可能保持生前的某些損傷，如索溝、刺創(chuàng)、骨折等，對(duì)追查尸源、揭露犯罪和分析死因具有一定意義。(2)干尸可能保持某些個(gè)人特征，有助于進(jìn)行個(gè)人識(shí)別。(3)干尸可能保持生前的某些病變，如動(dòng)脈粥樣硬化、風(fēng)濕小結(jié)、結(jié)核結(jié)節(jié)、寄生蟲卵等，有助于分析死者生前健康狀況和死亡原因。法醫(yī)學(xué)意義

尸蠟：尸體長(zhǎng)期浸在空氣不足的水中獲埋在空氣不足的濕土里，腐敗進(jìn)展緩慢而停止，尸體的脂肪組織因皂化或氫化作用，形成污黃白色的蠟樣物質(zhì)，使部分或全部尸體得以保存，稱尸蠟。尸體在水份豐富的環(huán)境里，如泡在水中、埋在水多的墓穴里尸蠟呈灰白色或淡黃色，能透視皮下較粗的血管，在脂肪豐富的部份較易形成。

二、尸蠟一無頭尸體被水煮后存放80天一青年男子被人殺害后，拋入化糞池內(nèi)6個(gè)月，全身軟組織皂化，形成尸蠟。(1)尸蠟可能保存某些生前損傷痕跡，如索溝、扼痕和骨折等，對(duì)揭露犯罪、分析死因有一定意義。(2)尸蠟有助于進(jìn)行個(gè)人識(shí)別、查找尸源。法醫(yī)學(xué)意義亦稱軟尸（泥炭鞣尸），浸于富含多種腐植酸和單寧物質(zhì)的酸性泥沼中的尸體，因酸性物質(zhì)的作用，腐敗停止發(fā)展，皮膚鞣化，肌肉與其他組織蛋白逐漸溶解，骨骼和牙齒脫鈣，而使尸體顯著縮小，重量減輕，變軟易曲，這種保存型尸體稱泥炭鞣尸。三、鞣尸一老年婦女尸體，于1975年發(fā)掘于湖北漢陽某地

浸軟：８周以上的胎兒，在子宮內(nèi)死亡后，不能被完全吸收，浸泡于無菌的羊水中，發(fā)生自溶改變，成為浸軟，或稱浸軟兒。一度：水泡形成二度：水泡破裂，表皮剝脫三度：累及深部組織四、浸軟(1)浸軟胎兒是死胎，死后已在宮內(nèi)一段時(shí)間，在此期間母體受傷不是引起胎兒死亡的原因。(2)浸軟胎兒一旦暴露于空氣中極易發(fā)生腐敗，故應(yīng)盡早進(jìn)行法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)。法醫(yī)學(xué)意義人死后，?？稍馐軇?dòng)物的噬食、啃咬，而形成各種形態(tài)的死后損傷。尸體遭各種動(dòng)物的破壞，形成各種形狀的毀損痕跡。有的損傷具有特殊形態(tài)，可供推斷動(dòng)物種類，或與暴力作用引起的損傷相區(qū)別。又可依據(jù)尸體上昆蟲生長(zhǎng)發(fā)育情況，推斷死后時(shí)間，有助于偵破工作。第五節(jié)昆蟲對(duì)尸體的破壞蠅對(duì)尸味極敏感。在蠅盛季節(jié)，人死后1小時(shí)左右，蠅就順味而來，在眼角、鼻孔、口角、外露創(chuàng)口、外耳等處產(chǎn)卵，春秋季節(jié)(溫度在20度左右)1日、夏天半日內(nèi)便變成蛆，也有些蠅產(chǎn)下的已是蛆。蛆分泌消化液，液化破壞組織。成年尸在夏天經(jīng)3-4周就可被蠅蛆吃剩骨架，蛆速成長(zhǎng)，長(zhǎng)到1.2cm左右時(shí)成蛹。夏天，蛆每日長(zhǎng)0.24-0.3cm，約經(jīng)4-5日成蛹，蛹經(jīng)1周左右破殼成蠅。春秋季節(jié)，蛆每日長(zhǎng)0.1cm左右，經(jīng)10-12日成蛹，蛹經(jīng)過2周左右成蠅。所以，如果發(fā)現(xiàn)尸體旁邊有一代蛹?xì)?，在夏天，估?jì)死亡已近2周，春秋天氣，估計(jì)將近4周。一、蠅蛆對(duì)尸體的破壞螞蟻、蟑螂對(duì)尸體的破壞多在身體露出部位。皮膚的嚙痕、邊緣不整齊，深淺不一，但均較淺，無出血現(xiàn)象，易與生前傷區(qū)別。一般螞蟻能在4至8周之內(nèi)將地面上的尸體軟組織噬食殆盡。二、螞蟻、蟑螂對(duì)尸體的嚙食常見單個(gè)鼠咬痕成新月狀，每個(gè)咬痕有2只牙印，大多是上領(lǐng)牙所成。整個(gè)咬傷凌亂，無固定的方向。較大的咬傷面邊緣不齊，呈鋸齒狀。三、鼠類對(duì)尸體的破壞野外尸體易發(fā)生此種情況。尸體破壞嚴(yán)重，四肢、頭頸可被咬掉，胸腹腔被咬開。咬痕不整齊，肌肉、筋膜斷面可見撕裂狀，骨骼咬痕明顯。認(rèn)真檢驗(yàn)不難與鈍器銳器傷痕相區(qū)別。四、狗、狼、鳥類等對(duì)尸體的破壞犬咬尸體水中交通工具如船漿、船篙等，亦都可破壞尸體。五、魚蝦蟹類對(duì)尸體的破壞魚蝦毀壞尸體現(xiàn)象判斷死亡時(shí)間是命案?jìng)刹殚_始階段的重要基礎(chǔ)工作，一般應(yīng)從尸體檢驗(yàn)所見、現(xiàn)場(chǎng)及案情提供的信息，經(jīng)綜合分析作出判斷。判斷死亡時(shí)間也是法醫(yī)鑒定人的責(zé)任。第六節(jié)判斷死亡時(shí)間尸體變化征象與死亡經(jīng)過時(shí)間有關(guān)系，同時(shí)也受環(huán)境條件和尸體內(nèi)在因素等影響。估計(jì)死亡時(shí)間時(shí)，最好結(jié)合幾種征象進(jìn)行分析。例如：尸體松軟，外露面部、手腳有冷感，尸斑未出現(xiàn)，可估計(jì)死后1小時(shí)左右；尸斑見有片狀，壓迫尸斑立即全退色，下頜僵硬，上肢輕度硬感，可估計(jì)死后經(jīng)過時(shí)間為5—6小時(shí)；全身硬如木緣不整齊，深淺不一，但均較淺，無出血現(xiàn)象，易與生前傷區(qū)別。一般螞蟻能在4至8周之內(nèi)將地面上的尸體軟組織噬食殆盡。一、根據(jù)尸體變化征象估計(jì)死亡時(shí)間食物未消化，飯粒成形，蔬菜切緣清晰，餐后不久死亡。食物已與胃液混合，開始消化，但仍成形，蔬菜纖維不松散，餐后1-2小時(shí)。食物已經(jīng)明顯消化，飯粒變碎，不成形，有些已成糜狀，蔬菜纖維松，已開始進(jìn)人十二指腸，為餐后2-3小時(shí)。食物部份排入十二指腸，為餐后3-4小時(shí)。胃內(nèi)容全部排空，一般于餐后5-6小時(shí)。二、根據(jù)胃內(nèi)容消化情況判斷最后一餐后的死亡時(shí)間根據(jù)尸體組織的生物化學(xué)變化程度作死亡經(jīng)過時(shí)間的判斷，此方法準(zhǔn)確度較高。以尸體血液的生物化學(xué)測(cè)定，推斷死亡時(shí)間，不同作者采用的測(cè)定方法不同，結(jié)果可不完全相同。同一尸體的各個(gè)不同部位，其變化亦可有差異，然而此種差異變化具有一定的規(guī)律性三、尸體組織生物化學(xué)的測(cè)定人死后于一定的短時(shí)間內(nèi)，受到感應(yīng)電刺激或者機(jī)械性刺激的肌肉，可引起該肌肉的收縮。可依此來推斷死亡時(shí)間。四、死后肌肉收縮電生理檢測(cè)阿托品的縮瞳反應(yīng)五、死后瞳孔、眼底變化檢測(cè)DNA多態(tài)性分析技術(shù)長(zhǎng)度多態(tài)性序列多態(tài)性VNTR/小衛(wèi)星DNASTR/微衛(wèi)星DNASNPmtDNARFLP-PCR、ASO-PCRDHPLC、SSCPMALDI-TOFMVR-PCR、DNAChipSequencing，etalRFLPDNA指紋Amp-FLPMVR-PCRAmp-FLP/STR-PCRDNA提取/純化/定量，PCR及其產(chǎn)物的檢測(cè)TheProcessofDNATypingviaPCRSourcesofBiologicalEvidence

生物檢材多種多樣，常見有血痕、精斑、唾液斑、毛發(fā)、骨骼、指甲、組織碎片等。一、DNA提取原理溶解胞、核膜消化、去除蛋白分離DNA純化DNA1、酚/氯仿法[原理]

真核細(xì)胞在去垢劑SDS(十二烷基硫酸鈉)和蛋白酶K作用下消化破裂真核細(xì)胞膜與核膜，核蛋白質(zhì)變性并降解，釋放DNA。通過有機(jī)溶劑酚和氯仿，除去蛋白成分，用乙醇沉淀收集DNA。

溶血消化DNA提取沉淀DNA溶解DNA[提取步驟]2.Chelex-100快速抽提法[原理]

Chelex-100是一種螯合樹脂，由苯乙烯和二乙烯苯的共聚體組成，含有成對(duì)的亞氨基二乙酸鹽離子，能夠螯合二價(jià)金屬離子，抑制DNA酶，保護(hù)DNA分子。在低離子強(qiáng)度、堿性及100℃煮沸條件下，可以使細(xì)胞膜裂解，并使與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)變性，游離DNA。[提取步驟]

溶血，然后加入Chelex-100，56℃孵育0.5~2h，離心2min，保存上清液。

3.堿性裂解法提取生物檢材DNA[原理]

在強(qiáng)堿作用下，使構(gòu)成細(xì)胞膜的蛋白質(zhì)變性，肽鍵斷裂快速破壞蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)(水解蛋白質(zhì))。因而在強(qiáng)堿性及一定溫度狀況下能迅速破碎細(xì)胞及核膜，并使核酸酶變性，釋放DNA。[提取步驟]

溶血，然后加入NaOH，80℃孵育10min，離心，保存上清液。

酚/氯仿法：穩(wěn)定，純度高；繁復(fù)，試劑毒性，檢材用量大，樣本DNA損失多，樣本差錯(cuò)概率大。

Chelex-100法：操作簡(jiǎn)單快速，檢材用量少，一管到底，樣本DNA損失小，樣本差錯(cuò)概率?。徊荒苡米贤夥ê湍z電泳法定量，干擾抑制物未去除。二、DNA定量

1.分光光度計(jì)分析原理：核酸于260nm波長(zhǎng)為吸收峰，1OD值為50μg/μl雙鏈核酸（40μg/μl單鏈核酸）根據(jù)OD值可計(jì)算DNA含量。

蛋白于280nm波長(zhǎng)為吸收峰，260/280比檢測(cè)核酸純度（1.6-1.8）。20ng10ng5ng2.5ng1.25ng0.63ng20ng10ng5ng2.5ng1.25ng0.63ngCalibrationstandardsCalibrationstandardsUnknownSamples~2.5ng瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合GoldView熒光燃料測(cè)定2.凝膠電泳半定量分析法：標(biāo)準(zhǔn)參照分析三、DNA純化1.經(jīng)典簡(jiǎn)單的方法:重復(fù)有機(jī)溶劑萃取和乙醇沉淀。2.目前在法醫(yī)DNA分析中常使用柱層析、過濾技術(shù)：如Microcon100，Centricon30等純化DNA裝置。都是利用不同微孔孔徑的濾膜所具有的吸附和超濾作用，達(dá)到純化DNA目的。PCR技術(shù)簡(jiǎn)史DNA的復(fù)制核酸體外擴(kuò)增的設(shè)想聚合酶鏈反應(yīng)的發(fā)明1985年，美國(guó)PE-Cetus公司的Mullis等人發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）,基本原理是在試管中模擬細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制。最初采用E-coliDNA聚合酶進(jìn)行PCR，由于該酶不耐熱，使這一過程耗時(shí)，費(fèi)力，且易出錯(cuò)。耐熱DNA聚合酶的應(yīng)用使得PCR能高效率的進(jìn)行，隨后PE-Cetus公司推出了第一臺(tái)PCR自動(dòng)化熱循環(huán)儀。

1993年，Mullis等因此獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。四、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction，PCR)

PCR擴(kuò)增DNA過程類似體內(nèi)DNA半保留復(fù)制的機(jī)制。以基因組DNA為模板，以一對(duì)寡核苷酸為引物，dNTP

為合成DNA原料，在DNA聚合酶的催化下，經(jīng)過變性、退火和引物延伸三步驟的循環(huán)，使靶DNA片段得到復(fù)制。是體外擴(kuò)增特異性DNA片段的技術(shù)，在數(shù)小時(shí)內(nèi)獲得上百萬靶DNA片段的拷貝，擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度一般在2kb以下。1.PCR基本原理中溫延伸(72℃)低溫退火(50～60℃)高溫變性(95℃)25～35In32cyclesat100%efficiency,1.07billioncopiesoftargetedDNAregionarecreated

變性(denaturation)

加熱至95℃，使模板DNA雙鏈解離成兩條單鏈。

退火(annealing)

降溫至55℃左右，引物寡核苷酸與模板DNA的互補(bǔ)序列復(fù)性，形成模板-引物雜交雙鏈，兩引物的3’端彼此相對(duì)。

延伸(extension)

升溫至72℃，在耐熱DNA聚合酶的作用下，按照堿基配對(duì)原則，dNTP逐個(gè)連接在引物的3’端。引物由5’端→3’端方向被延伸、合成與靶DNA序列互補(bǔ)的DNA新鏈。(c)(b)引物25’3’3’3’5’5’(d)新引物5’3’靶DNA的擴(kuò)增(a)5’3’引物13’5’3’5’引物2互補(bǔ)鏈引物1互補(bǔ)鏈單位長(zhǎng)度的鏈不同長(zhǎng)度的鏈5’3’3’5’引物1互補(bǔ)鏈引物2互補(bǔ)鏈目的片段（不同長(zhǎng)度的鏈未示出）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)示意圖(e)(f)(g)溫度（℃）時(shí)間（min）94726094℃變性（1min）60℃退火（1min）72℃延伸（1.5min）循環(huán)1循環(huán)2循環(huán)3PCR反應(yīng)的溫度循環(huán)周期PCR反應(yīng)的每一個(gè)溫度循環(huán)周期都是由DNA變性、引物退火和反應(yīng)延伸三個(gè)步驟完成的。圖中設(shè)定的反應(yīng)參數(shù)是94℃變性1min，60℃退火1min，72℃延伸1.5min。如此周而復(fù)始，重復(fù)進(jìn)行，直至擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量滿足實(shí)驗(yàn)需求為止。①模板DNA（templateDNA）:0.1-100ng,PCR對(duì)模板的要求不高；②寡核苷酸引物（primers）：

0.1～0.5μmol/L③dNTP

：50～200μmol/L；④BufferwithMg2+:10Xbuffer(10mmol/LTris-HCl，pH8.3，50mmol/LKCl，1.5mmol/LMg2+)，Mg2+:0.5～2.5mmol/L；⑤TaqDNA聚合酶：0.5～2U。2、PCR反應(yīng)體系移液器3.PCR循環(huán)參數(shù)溫度、時(shí)間1）變性溫度和時(shí)間:92-95℃,2-12min對(duì)于富含G和C的序列，可適當(dāng)提高，但過高或時(shí)間過長(zhǎng)都會(huì)導(dǎo)致酶活性損失。2）退火溫度與時(shí)間:50～60℃,30-60s退火溫度決定PCR的擴(kuò)增特異性，確定退火溫度常依據(jù)引物的堿基組成、引物長(zhǎng)度和濃度。引物長(zhǎng)度在15～25堿基時(shí)，可根據(jù)公式Tm＝4(G＋C)＋2(A＋T)估計(jì)退火溫度。3）延伸溫度和時(shí)間：72℃，45s-2min4）循環(huán)次數(shù):25～35次循環(huán)過多，非特異性產(chǎn)物大量增加1.高靈敏度，適于陳舊、降解、腐敗檢材；2.特異性高；3.可復(fù)合擴(kuò)增；4.混合檢材的個(gè)體識(shí)別；5.種屬特異性；6.實(shí)驗(yàn)周期短，設(shè)備條件和操作相對(duì)簡(jiǎn)單。PCR技術(shù)用于法醫(yī)學(xué)的特點(diǎn)PCR產(chǎn)物檢測(cè)方法-DNADNA-DNA-DNADNA-原理瓊脂糖電泳-EB染色聚丙烯酰胺凝膠電泳-銀染、熒光顯色毛細(xì)管電泳-熒光顯色+①.瓊脂糖凝膠電泳與EB染色法

(agrosegelelectrophoresisandEB-stain,AE)1）配置瓊脂糖凝膠：

T：1％～2％，凝膠buffer：0.5×TBE，L：>14cm2）上樣：5～15ulPCR擴(kuò)增產(chǎn)物與loadingbuffer混合加樣。電泳buffer：0.5×TBE，電壓：100～200V0.5～1.0h;3）EB染色，紫外燈觀察，照相記錄。

EB的替代物：

SYBRGreen，Goldview等。常用的電泳緩沖液4℃保存?zhèn)溆贸Ｓ玫?X載樣緩沖液Ⅰ0.25%溴酚藍(lán)，0.25%二甲苯青，40%蔗糖水溶液

Ⅱ0.25%溴酚藍(lán)，0.25%二甲苯青，30%甘油水溶液溴乙錠染色溴乙錠（ethidiumbromide，EB）是一種小分子熒光染料，可以嵌入雙鏈DNA配對(duì)堿基之間，在紫外線激發(fā)下發(fā)出紅色的熒光；發(fā)出的熒光與DNA含量成正比；由于EB-DNA復(fù)合物中的熒光強(qiáng)度比溶液中游離的EB熒光大10倍左右，被染色的DNA電泳區(qū)帶很容易鑒別；將電泳后的凝膠直接放入0.5μl/ml溴乙錠溶液染色10min后，在紫外線照射下觀察并判定基因型別；也可以在凝膠中加入0.5μl/ml濃度的溴乙錠；溴乙錠是強(qiáng)致變劑，操作中應(yīng)加強(qiáng)自我保護(hù)。瓊脂糖電泳的優(yōu)點(diǎn)（1）瓊脂糖含液體量大，可達(dá)98-99%，近似自由電泳，但是樣品的擴(kuò)散度比自由電泳小。（2）電泳速度快。（3）透明而不吸收紫外線，可以直接用紫外檢測(cè)儀作定量測(cè)定。（4）樣品易回收，可重復(fù)利用。缺點(diǎn)：分辨率不高聚丙烯酰胺凝膠(PAG)由丙烯酰胺(Acr)和亞甲基雙丙烯酰胺(Bis)聚合而成。原理：在凝膠聚合中，丙烯酰胺單體分子中的雙鍵先打開，相互連接形成脂肪族長(zhǎng)鏈分子，再由交聯(lián)劑亞甲基雙丙烯酰胺隨機(jī)地與長(zhǎng)鏈上的游離功能機(jī)團(tuán)反應(yīng)，構(gòu)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。打開丙烯酰胺雙鍵必需的自由基由引發(fā)劑過硫酸銨(APS)提供。凝膠聚合反應(yīng)的催化劑為四乙基乙二胺(TEMED)。兩個(gè)技術(shù)參數(shù)：凝膠濃度(T)和交聯(lián)度(C)

②.聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染聚丙烯酰胺凝膠的制備丙稀酰胺（單體）＋N,N-甲叉雙丙稀酰胺（交聯(lián)劑）→（催化劑）→聚合催化劑：過硫酸銨＋四甲基乙二胺（TEMED）T(6％)、C(3％)使用TBE電泳緩沖液。凝膠在垂直裝置中制備成分量30％丙烯酰胺貯存液(Acr︰Bis=29：1)7ml5×TBE7ml10％過硫酸銨(APS)150μl四甲基乙二胺(TEMED)15μlDDH2O補(bǔ)至35ml聚丙烯酰胺凝膠制膠裝置電泳參數(shù)：500-550V,2-7h銀染法原理：銀染液中的Ag+與DNA形成穩(wěn)定的復(fù)合物，在甲醛的作用下，Ag+被還原成銀顆粒，DNA譜帶呈黑褐色。分成5個(gè)基本步驟：

1）浸入10%乙醇：固定10min，用蒸餾水清洗1次；

2）1％HNO3：1-5min，用蒸餾水清洗1次；

3）0.1%AgNO3：染色20min，蒸餾水清洗2次；

4）顯色液（Na2CO3和甲醛）：顯帶約5～10min，至譜帶清晰。

5）10%乙酸中停顯30s-1min，水漂洗。凝膠干燥后，分型結(jié)果可以長(zhǎng)期保存。聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染ABI377：變性聚丙烯酰胺凝膠電泳ABI310016-capillaryarrayABI310singlecapillary③.毛細(xì)管電泳-熒光顯色法CE電泳、收集信號(hào)GeneMapperIDsoftwareABI3130遺傳分析儀FTA卡FTA卡在室溫下對(duì)各種生物樣品進(jìn)行收集、運(yùn)輸、存檔和純化其核酸并進(jìn)行PCR、SNP、RFLP以及限制酶解作用等分析而設(shè)計(jì)的?？蓱?yīng)用的樣品包括：血液、口腔細(xì)胞、組織細(xì)胞、培養(yǎng)細(xì)胞、微生物以及植物組織等。FTA卡經(jīng)過專利的化學(xué)配方浸漬，能溶解細(xì)胞膜并改變蛋白質(zhì)特性,核酸被固定下來,并可保護(hù)共免于UV光線損害、以及微生物和真菌的侵蝕，F(xiàn)TA是目前唯一的在實(shí)驗(yàn)室外收集樣品的遺傳分析工具?；駾NA在FTA卡上可在室溫下儲(chǔ)存14年以上而不會(huì)減少PCR效率。FTA卡進(jìn)行PCR操作步驟點(diǎn)樣取樣洗滌沖洗干燥PCRDNA多態(tài)性分析技術(shù)長(zhǎng)度多態(tài)性序列多態(tài)性VNTR/小衛(wèi)星DNASTR/微衛(wèi)星DNASNPmtDNARFLP-PCR、ASO-PCRDHPLC、SSCPMALDI-TOFMVR-PCR、DNAChipSequencing，etalRFLPDNA指紋Amp-FLPMVR-PCRAmp-FLPSTR-PCR

限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)：指不同個(gè)體基因組內(nèi)的核苷酸序列因某種原因產(chǎn)生堿基突變后，改變了某種限制性內(nèi)切酶的剪切位點(diǎn)，使此酶在該位點(diǎn)不能剪切，形成了長(zhǎng)度不等的限制性片段。這些限制性片段在人類不同個(gè)體間呈現(xiàn)的多態(tài)性現(xiàn)象稱為限制片段長(zhǎng)度多態(tài)性。

第一節(jié)限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性RFLP不同個(gè)體提取的基因組DNA限制性內(nèi)切酶酶切凝膠電泳分開DNA片段印跡轉(zhuǎn)移southernblot探針雜交、放射自顯影顯示圖譜及數(shù)據(jù)分析一、RFLP技術(shù)實(shí)驗(yàn)流程RFLPusingSouthernblot酶切電泳探針雜交顯帶限制性核酸內(nèi)切酶及作用原理識(shí)別特定DNA序列（4-6bp)-回文結(jié)構(gòu)

水解序列內(nèi)磷酸二酯鍵

DNA雙鏈斷裂

長(zhǎng)度不同的DNA片段

兩斷端分別有突出的數(shù)個(gè)堿基兩斷端沒有伸出的單鏈堿基酶切影響因素DNA方面

純度、量、甲基化、分子結(jié)構(gòu)特征。酶因素種類、活性、用量。酶切條件反應(yīng)體系、溫度、時(shí)間。單基因座探針（與單個(gè)小衛(wèi)星具有同源性）

--DNA紋印(DNAprofile)多基因座探針（與多個(gè)小衛(wèi)星具有同源性）

DNA指紋(DNAfingerprint)探針（probe）33.6、33.15、α珠蛋白-3’-HVRMyo、MZ13等常用的多基因座探針探針的標(biāo)記

非同位素標(biāo)記物有生物素，半抗原地高辛，熒光素以及酶標(biāo)記等。

同位素標(biāo)記檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高，分辨率高，但因?yàn)榉派湫晕廴?、同位素半衰期限制等原因，目前已較少應(yīng)用。分子雜交：預(yù)雜交，雜交和洗膜三個(gè)步驟譜帶顯示：酶反應(yīng)偶聯(lián)化學(xué)發(fā)光--光學(xué)顯影RFLP技術(shù)優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)：

數(shù)據(jù)多態(tài)信息量大，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好，探針多。缺點(diǎn)：

技術(shù)復(fù)雜，周期長(zhǎng)，費(fèi)用高；檢測(cè)中需放射性物質(zhì)，限制了廣泛應(yīng)用；檢測(cè)多態(tài)性水平過分依賴限制性內(nèi)切酶，使多態(tài)性降低；DNA模板用量大，分析速度慢。二、DNA紋印?

單基因座探針識(shí)別特異基因座?雜交錯(cuò)配低?檢測(cè)單個(gè)VNTR基因座的等位基因?清楚分別雜合子/純合子?可獲得明確的群體“等位基因頻率”

?共顯性遺傳標(biāo)記，遵循孟德爾遺傳規(guī)律?多態(tài)性較好?具有種屬特異性和組織同一性?突變率偏高：基因座突變率超過0.002，則考慮不能用于親子鑒定DNA紋印結(jié)果分析中可能出現(xiàn)的問題多余譜帶酶切不全突變混合樣本譜帶丟失DNA降解電泳分辨率低污染片段在電泳中泳出凝膠?探針識(shí)別多個(gè)同源基因座?低強(qiáng)度雜交錯(cuò)配高

?個(gè)體可檢出多至30條譜帶?多態(tài)性非常高?不能判斷譜帶來源和分別雜合子/純合子?不能獲得明確的群體“等位基因頻率”?片段傳遞符合孟德爾遺傳規(guī)律?具有組織同一性?突變率偏高三、DNA指紋?靈敏度低?對(duì)基因組DNA的質(zhì)量要求高?操作煩瑣、費(fèi)時(shí)，技術(shù)要求嚴(yán)格?沒有種屬特異性?統(tǒng)計(jì)學(xué)方法與傳統(tǒng)的遺傳統(tǒng)計(jì)學(xué)不同，存在爭(zhēng)議?非同一凝膠上的樣本之間，難于比較?不能用于混合斑檢測(cè)?標(biāo)準(zhǔn)化困難DNA指紋技術(shù)特點(diǎn)RFLP技術(shù)分析層現(xiàn)的圖譜，稱為RFLP圖譜；核心技術(shù)：DNA分子雜交；RFLP圖譜個(gè)體特異性因素：限制性內(nèi)切酶和探針的特異性；基因組DNA、不同人存在不同的酶切位點(diǎn)；探針：?jiǎn)位蜃结樅投嗷蜃结?；圖譜：DNA紋印和DNA指紋圖譜。DNA指紋DNA紋印靶DNA多個(gè)VNTR位點(diǎn)等位基因,探針無位點(diǎn)特異性單個(gè)VNTR位點(diǎn)等位基因探針有位點(diǎn)特異性檢材DNA量至少需要0.5～1ug不少于10-50ng，部分降解檢材可用混合DNA檢材不能檢測(cè)混合DNA檢材能檢測(cè)混合DNA檢材片段特征檢出片段15條以上，片段長(zhǎng)度3-30kb,小片段分辨率低檢出片段1-2條，分辨率好片段長(zhǎng)度0.5-4kb雜交條件低強(qiáng)度雜交條件高強(qiáng)度雜交條件概率計(jì)算無群體頻率分布資料可用于群體資料種屬特異性探針與多種動(dòng)物DNA有交叉反應(yīng),無種屬特異性探針具有種屬特異性信息量單次檢測(cè)信息量大，只需1-2個(gè)探針單次檢測(cè)信息量小，需要4個(gè)以上探針聯(lián)合檢測(cè)DNA指紋和DNA紋印的區(qū)別不同個(gè)體提取的基因組DNA限制性內(nèi)切酶酶切凝膠電泳分開DNA片段印跡轉(zhuǎn)移southernblot探針雜交、放射自顯影顯示圖譜及數(shù)據(jù)分析PCR擴(kuò)增目的片段PCR-RFLPAmp-FLP技術(shù)第四章DNA長(zhǎng)度多態(tài)性教學(xué)要求：掌握：Amp-FLP技術(shù)分型原理;STR-PCR分型技術(shù)；實(shí)驗(yàn)室常用的STR遺傳標(biāo)記；X-STR及Y-STR的遺傳特點(diǎn)及常用遺傳標(biāo)記。熟悉：VNTR-PCR分型技術(shù)的優(yōu)勢(shì)及局限性。第二節(jié)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性

(amplifiedfragmentlengthpolymorphism,Amp-FLP)一、概述1.概念：根據(jù)VNTR或STR基因座側(cè)翼序列，設(shè)計(jì)、合成與側(cè)翼互補(bǔ)的寡核苷酸作為PCR引物，應(yīng)用PCR技術(shù)擴(kuò)增包含VNTR或STR基因座側(cè)翼和重復(fù)單位序列，凝膠電泳分離片段長(zhǎng)度不同的擴(kuò)增產(chǎn)物，根據(jù)擴(kuò)增片段長(zhǎng)度差異確定其基因型。因此，稱這種用PCR技術(shù)檢測(cè)VNTR或STR基因座長(zhǎng)度多態(tài)性的分析方法稱為AMP-FLP。

PCR-STR

主要特點(diǎn)：快速、高效擴(kuò)增

第二代DNA分型技術(shù)PCR擴(kuò)增+電泳+顯帶檢測(cè)VNTR或STR基因座二、小衛(wèi)星VNTR分型(一）小衛(wèi)星VNTR基因座分型基本技術(shù)DNA提?。悍樱确路ǎ珻helex－100法等DNA定量：PCR擴(kuò)增:50ul或25ul；電泳分離：瓊脂糖凝膠電泳與EB染色垂直非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳與銀染顯色基因型判定：基因型判定Amp-FLP分析VNTR基因座，等位基因按長(zhǎng)度命名，有兩種命名方式；

1）直接用片段長(zhǎng)度bp命名，在加樣電泳分離時(shí)，同時(shí)加DNA片段長(zhǎng)度標(biāo)準(zhǔn)物(molecularmarker)。顯帶后參照分子量標(biāo)準(zhǔn)確定靶基因的長(zhǎng)度，命名等位基因；

2）按照重復(fù)單位的重復(fù)次數(shù)命名，命名參照等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物(alleleladder)，在同一電泳條件下，等位基因與標(biāo)準(zhǔn)物比對(duì)即可確定等位基因和基因型。（二）主要的VNTR基因座D1S80基因座（PMCT118）基因定位染色體1p，Coresequence：GNNGACCACCGGNAAC(16bp）常規(guī)的D1S80檢測(cè)引物序列為：

forward:5’-GAAACTGGCCTCCAAACACTGCCCGGCG-3’reverse:5’-GTCTTGTTGGAGATGCACGTGCCCCTTGC-3’PCRthermalcycle：

95℃預(yù)變性2min，然后95℃1min，65℃1min，70℃3min，30個(gè)循環(huán)，最后72℃,延伸7min。Alleles：36個(gè)（13～45，50）Size：260～900bp中國(guó)漢族人群:發(fā)現(xiàn)29個(gè)等位基因，基因座雜合度0.84，Dp值0.96，具有高度多態(tài)性。gaaactggcctccaaacactgcccgccgtccacggccggccggtcctgcgtgtgaatgactcaggagcgtattccccacgcgccagcactgcattcagataagcgctggctcagtgtcagcccaaggaagacagaccacaggcaaggaggaccaccggaaaggaagaccaccggaaaggaagaccaccggaaaggaagaccacaggcaaggaggaccaccggaaaggaagaccaccggcaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccagcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccggcaaggaggaccaccaggaaggagaaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccaccaggaaggaggaccactggcaaggaagaccaccggcaagcctgcaaggggcacgtgcatctccaacaagacD1S80基因座AB121716.1GI:39748687

D1S80分型結(jié)果圖

應(yīng)用Amp-FLP方法檢測(cè)的小衛(wèi)星VNTR基因座還有ApoB，D17S30、D1S111、D1S118、D4S95、COL2A1基因座等。(二）小衛(wèi)星VNTR分型常用基因座(三）小衛(wèi)星VNTR分型的局限性及注意事項(xiàng)1.污染2.模板DNA:qualityandquantity3.優(yōu)先擴(kuò)增4.降解DNA樣本大片段等位基因的丟失5.試劑、儀器質(zhì)量和性能三、STR-PCR

短串聯(lián)重復(fù)序列，又稱微衛(wèi)星DNA或簡(jiǎn)單重復(fù)序列。是目前在法醫(yī)物證中應(yīng)用最廣泛的長(zhǎng)度多態(tài)性遺傳標(biāo)記，它的重復(fù)單位短，僅2～6bp，其長(zhǎng)度多態(tài)性來源于重復(fù)單位串聯(lián)重復(fù)次數(shù)的個(gè)體差異。4bp重復(fù)的STR基因座最常用。STR適用于法醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)廣泛存在于人類基因組，數(shù)目眾多，是個(gè)體識(shí)別的豐富資源；片段長(zhǎng)度短(約200bp)，易于擴(kuò)增，適用于陳舊、降解生物檢材的DNA分析；靈敏度高，所需檢材量少，適用于微量、超微量檢材的鑒定；Allele長(zhǎng)度差異小(2-6bp)，優(yōu)先擴(kuò)增現(xiàn)象不明顯；STR基因座擴(kuò)增片段相近，擴(kuò)增條件類似，能夠進(jìn)行多個(gè)位點(diǎn)的復(fù)合擴(kuò)增，一次檢驗(yàn)?zāi)塬@得較多的多態(tài)性信息，節(jié)省檢材和試劑，提高工作效率；分型程序簡(jiǎn)便、明確、規(guī)范，有利于實(shí)現(xiàn)分型標(biāo)準(zhǔn)化、自動(dòng)化和DNA數(shù)據(jù)庫的建立。（一）基本分型技術(shù)（單基因座）

1.模板DNA提?。撼２捎肅helex-100提取DNA法。2.PCR擴(kuò)增

：采用標(biāo)準(zhǔn)的25μl體積PCR擴(kuò)增體系，模板DNA用量10～100ng，常能夠得到滿意的擴(kuò)增產(chǎn)物；3.電泳分離：常用T6%、C3%的PAG電泳，凝膠厚1mm，擴(kuò)增產(chǎn)物加等體積的載樣緩沖液混合后點(diǎn)樣，同時(shí)加樣等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物(allelicladder)；4.顯帶與基因型判定：常用銀染法顯示基因條帶，參照分型標(biāo)準(zhǔn)物確定樣本的基因型。PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系成分終濃度1×buffer量10×buffer（withMg2+）

2.5μl單核苷酸（dNTPs）0.2mol/L2.5μl引物（Primer）各0.1μmol/L2μlTaqDNA聚合酶0.5u0.25μl模板DNA10-100ng5μl超純水H2O

加至25μl1）標(biāo)記離心管；2）確定反應(yīng)管數(shù)；3）加樣：超純水、緩沖液、dNTPs、引物、酶；4）按（25－X）μl分裝到每一離心管，X為模板DNA用量；5）加入模板DNA;6）設(shè)定PCR熱循環(huán)參數(shù)，擴(kuò)增。Ladder5-12Ladder5-12Ladder5-12123456基因型1:(8,8);2:(8,10)3:(8,8);4:(7,9)5:(8,8);6:(8,9)HX76110534710710412空白HX76:(7,13);HX110:(8,12)HX53:(9,11);HX47:(10,12)HX107:(11,11);HX12:(13,14)基因型單位點(diǎn)STR擴(kuò)增、分型（熒光標(biāo)記）87654321Sample+in-lanestd.AllelicLadder160bp200bpFlFl4bp（二）多基因座復(fù)合擴(kuò)增（multiplexamplification）在一個(gè)PCR體系中同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)基因座的方法稱為復(fù)合擴(kuò)增。如果同時(shí)檢測(cè)8～16個(gè)STR基因座，鑒別能力能夠達(dá)到DNA指紋的水平。優(yōu)點(diǎn)：高效，經(jīng)濟(jì)，快速。目前常用的復(fù)合擴(kuò)增方法有兩種：

銀染系統(tǒng)：各基因座等位基因片段范圍不重疊。

多色熒光自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)：不同顏色熒光染料標(biāo)記可以有重疊。1.銀染系統(tǒng)復(fù)合擴(kuò)增方法用銀染顯示各基因座等位基因沒有基因座特異性，所以復(fù)合擴(kuò)增體系中多個(gè)基因座的基因長(zhǎng)度范圍必須互不重疊，也就是經(jīng)PAG電泳分離后銀染，各基因座的等位基因分別在不同片段長(zhǎng)度范圍內(nèi)顯示，互不干擾；例如CTTv四基因座復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)。銀染復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是操作比較簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用;但是，片段長(zhǎng)度范圍選擇的限制，能夠同時(shí)擴(kuò)增的基因座個(gè)數(shù)有限，一般3-4個(gè)；CTTv295～327bp224～252bp179～203bp134～170bp例如CTTv四基因座復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)是由CSF1PO，TPOX，TH01和vWA構(gòu)成。CTTCTTvFFFLGammaSTR2.熒光染料標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增熒光染料通常標(biāo)記在每個(gè)基因座中一條引物的5’端，不同基因座引物標(biāo)記不同的熒光標(biāo)識(shí)物；經(jīng)過擴(kuò)增后的等位基因產(chǎn)物均攜有熒光，電泳分離長(zhǎng)度等位基因，用熒光掃描系統(tǒng)對(duì)凝膠檢測(cè)；按照熒光的顏色區(qū)別基因座，根據(jù)片段的遷移率確定片段長(zhǎng)度等位基因；熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)不受各基因座基因長(zhǎng)度重疊的影響，可以設(shè)計(jì)更多的基因座復(fù)合擴(kuò)增，明顯提高了檢測(cè)信息量；常用的熒光復(fù)合擴(kuò)增試劑盒。FluorescentDyesUsedin4-ColorDetectionFAM(Blue)JOE(Green)TAMRA(Yellow)ROX(Red)NEDFLCXREmission520

Emission548Emission580Emission605ScannedGelImageCapillaryElectropherogram1)熒光復(fù)合擴(kuò)增特點(diǎn)8repeats10repeatsLocus18repeats9repeatsLocus2靈敏度高:低至0.01ng；混合和降解生物檢材；不同顏色熒光染料標(biāo)記可以有重疊。Identifiler?kit(AppliedBiosystems)multiplexSTRresultAMELD3TH01TPOXD2D19FGAD21D18CSFD16D7D13D5VWAD8PowerPlex?16kit(PromegaCorporation)multiplexSTRresultAMELD3TH01TPOXPentaDPentaEFGAD21D18CSFD16D7D13D5VWAD8CommercialSTR16plexKitsAMELD3S1358TH01TPOX