實(shí)驗(yàn)三霉菌、放線菌及土壤微生5課件

實(shí)驗(yàn)三霉菌、放線菌的形態(tài)觀察及微生物的分離純化主講：裴國風(fēng)程國軍一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察放線菌、霉菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)特征學(xué)習(xí)掌握霉菌染色的基本方法

基本掌握細(xì)菌、放線菌、霉菌菌落形態(tài)特征實(shí)驗(yàn)（一）霉菌、放線菌的形態(tài)觀察二、實(shí)驗(yàn)原理放線菌:是一類介于細(xì)菌和真菌之間的微生物，個(gè)體形態(tài)復(fù)雜，G＋，具多核的單細(xì)胞原核生物，是抗生素的主要產(chǎn)生菌。它由不同長短的纖細(xì)的菌絲形成單細(xì)胞菌絲體。菌絲體分為兩部分，即潛入培養(yǎng)基中的營養(yǎng)菌絲（或稱基內(nèi)菌絲）和生長在培養(yǎng)基表面的氣生菌絲。有些氣生菌絲分化成孢子絲，呈螺旋形、波浪形或分枝狀等。氣生菌絲及孢子的形狀和顏色常作為分類的重要依據(jù)。

霉菌：凡在營養(yǎng)基質(zhì)上形成絨毛狀、棉絮狀或蜘蛛網(wǎng)形絲狀菌體的真菌，統(tǒng)稱為霉菌。霉菌包括分類學(xué)上許多不同綱或類的真菌，它們分別屬于藻狀菌綱、子囊菌綱、擔(dān)子菌綱和半知菌類。霉菌菌絲分為有隔菌絲和無隔菌絲兩類.黑曲霉屬于半知菌亞門,菌絲有隔,細(xì)胞多核；部分氣生菌絲細(xì)胞形成特化的厚壁、膨大的足細(xì)胞，由足細(xì)胞的中間稍呈垂直地向上延長，形成分生孢子梗。

青霉屬于半知菌亞門,分生孢子梗基部無足細(xì)胞，孢子梗頂端不膨大成囊，而是多次分枝形成掃帚狀，小梗末端形成分生孢子。主要觀察黑曲霉菌絲分隔情況和分生孢子著生情況（辨認(rèn)頂囊、分生孢子梗、足細(xì)胞和分生孢子）用解剖針挑取少量曲霉菌塊（適當(dāng)帶一點(diǎn)培養(yǎng)基）放在載玻片的一側(cè),在菌塊上滴50％乙醇一滴,輕輕撥動(dòng)、洗滌菌塊，在同一玻片的另一側(cè)加一滴水滴（或棉藍(lán)染液），將洗去分生孢子的菌塊置于棉藍(lán)染液中，用解剖針將菌絲盡量分散，蓋上蓋玻片，用橡皮或塑料請輕輕敲擊，10x,40x觀察。四、實(shí)驗(yàn)步驟插片法培養(yǎng)放線菌取插片一片，直接在顯微鏡下進(jìn)行觀察，注意分界面兩側(cè)菌絲形態(tài)的差異觀察放線菌氣生菌絲和基內(nèi)菌絲、孢子絲的區(qū)別載玻片直接觀察法方法同霉菌

五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄所觀察到的放線菌基內(nèi)菌絲和氣生菌絲的差別繪制青霉（40x）、黑曲霉（40x）的形態(tài)，注明各部分名稱。六、思考題鏡撿時(shí)，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲?

你主要根據(jù)哪些形態(tài)特征來區(qū)分上述霉菌?你認(rèn)為在顯微鏡下，細(xì)菌、放線菌和霉菌的主要區(qū)別是什么？

實(shí)驗(yàn)(二)、從土壤中稀釋分離微生物一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)微生物稀釋平板計(jì)數(shù)及劃線分離技術(shù)二、實(shí)驗(yàn)原理:采用適宜（選擇）培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，或加入某種抑制劑有利于目標(biāo)微生物的生長，從而分離獲得目標(biāo)微生物的純培養(yǎng)：常用稀釋平板分離法和劃線分離法在固體培養(yǎng)基上形成單個(gè)菌落。分離細(xì)菌用牛肉膏培養(yǎng)基，分離真菌用馬丁-孟加拉紅培養(yǎng)基。依據(jù)一個(gè)單細(xì)胞在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后可以長成一菌落從而推算樣品中含有多少細(xì)菌或真菌的活菌數(shù)目分離細(xì)菌的同學(xué)（1-4組）取一瓶牛肉膏培養(yǎng)基（250ml／瓶）熔化后倒12個(gè)平皿。分離真菌的同學(xué)（5組）取一瓶馬丁培養(yǎng)基（250ml／瓶）熔化后，置水浴鍋中55℃保溫，于無菌臺(tái)上加鏈霉素和孟加拉紅各1ml，混勻后倒12個(gè)平皿。三、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）土樣的采集菜園中采集土樣，扒開表土層大約5cm厚，取土樣10g左右，裝于滅菌后的牛皮袋中，封口帶回。

（二）土壤懸液制備準(zhǔn)備1瓶土壤懸液：稱10克土壤放入帶玻璃珠的90ml瓶裝無菌水中，手搖振蕩（20min），使土樣分散。（三）倒固體瓊脂培養(yǎng)基平板(每組12皿)

（四）懸液稀釋

無菌操作（從稀至濃將菌液涂布均勻）采用－2，－3，－4稀釋液涂布馬丁－孟加拉紅平板；采用－3，－4，－5稀釋液涂布牛肉膏蛋白胨平板;每個(gè)稀釋度2個(gè)重復(fù)。每人用剩下的1個(gè)平板做劃線分離，從三角瓶中取土壤懸液作劃線分離.每個(gè)培養(yǎng)皿加0.1ml稀釋液(五)平板涂布簡單易行，但易造成機(jī)械損傷Liquidspecimenisspreadonthesurfaceofsolidagarwithasterilebentglassrod.（六）吹干將已涂布好的平皿皿蓋半揭開，置于無菌臺(tái)上吹干。（七）培養(yǎng)：待吹干后，將平板用報(bào)紙包好（每個(gè)平板方向一致），寫上班級和姓名，皿底朝上，置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)(溫度?)。（八）檢查結(jié)果結(jié)果分析:1.我所涂平板種類：

（牛肉膏或馬丁氏）2.計(jì)數(shù)：牛肉膏平板取單菌落數(shù)目在30～300個(gè)左右的稀釋度來計(jì)數(shù)，馬丁氏平板取單菌落數(shù)目在10～100個(gè)左右的稀釋度來計(jì)數(shù)3.我所計(jì)數(shù)的平板稀釋度是：

單菌落數(shù)目：

、

、

。4.計(jì)算：活菌數(shù)目/每克土壤＝

（計(jì)算過程）＝

個(gè)/每克土壤5.對你和同伴的細(xì)菌及真菌計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行分析平皿劃線分離法試管斜面接種1.兩支試管呈“V”字形

2.拔下試管塞3.火焰上微燒一周

4.接種環(huán)灼燒、冷卻5.接種、劃線

6.塞上塞子，灼燒接種環(huán)實(shí)驗(yàn)報(bào)告從土壤中稀釋分離微生物的原理、方法、步驟。2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個(gè)關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。(4)當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時(shí)，你認(rèn)為問題出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法計(jì)數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時(shí)間(48h)后觀察結(jié)果?本次實(shí)驗(yàn)課結(jié)束

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