總抗氧化能力(ABTS法)試劑盒說(shuō)明書(shū)

第第頁(yè)總抗氧化本領(lǐng)（ABTS法）試劑盒說(shuō)明書(shū)總抗氧化本領(lǐng)（ABTS法）試劑盒說(shuō)明書(shū)微量法100T/96S注意：正式測(cè)定之前選擇23個(gè)預(yù)期差別大的樣本做猜測(cè)定。研究意義：測(cè)定對(duì)象中各種抗氧化物質(zhì)和抗氧化酶等構(gòu)成總抗氧化水平。在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和藥學(xué)研究中常常檢測(cè)血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細(xì)胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液及各種抗氧化物（antioxidant）溶液的總抗氧化本領(lǐng)。測(cè)定原理：ABTS法是使用Z廣泛的間接檢測(cè)方法，可用于親水性和親脂性物質(zhì)抗氧化本領(lǐng)測(cè)定。ABTS經(jīng)氧化后生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽(yáng)離子自由基ABTS+，能溶于水相或酸性乙醇介質(zhì)中，在734nm處有最大汲取。被測(cè)物質(zhì)加入ABTS+溶液后，所含抗氧化成分能與ABTS+發(fā)生反應(yīng)而使反應(yīng)體系褪色。在734nm檢測(cè)吸光度的變動(dòng)，并以Trolox作為對(duì)照體系量化抗氧化物質(zhì)的抗氧化本領(lǐng)。自備試驗(yàn)用品：恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。試劑構(gòu)成和配制：提取液：液體120mL×1瓶，4℃保管。試劑一：液體24mL×1瓶，4℃避光保管。試劑二：粉劑×2瓶，4℃避光保管。樣品的制備：（1）血清、血漿、唾液或尿液等液體樣品血漿（制備時(shí)可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用EDTA抗凝）4℃，5000rpm離心10min，取上清待測(cè)。血清、唾液或尿液樣品直接用于測(cè)定，也可以80℃凍存（不宜超出30d）后再測(cè)定。（2）組織樣品依照組織質(zhì)量（g）：提取液體積（mL）為1：5～10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。（3）細(xì)胞樣品依照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500～1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波碎裂（功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。操作步驟：1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)整波長(zhǎng)至734nm。2、工作液的配置：臨用前取試劑二一瓶，加入11mL試劑一，震蕩混勻20min后，靜置，取上清使用。（注意，現(xiàn)配現(xiàn)用）3、操作表（在EP管中反應(yīng)）空白管測(cè)定管提取液（μL）10樣品（μL）10工作液（μL）190190充分混勻，10min內(nèi)測(cè)定734nm吸光值，△A=A空白A測(cè)定注意：空白管只需測(cè)定一次，吸取工作液時(shí)不要吸到底部沉淀，若A測(cè)定小于0.4，需用提取液稀釋后檢測(cè)?？偪寡趸绢I(lǐng)計(jì)算公式：1、以自由基清除率表示：ABTS自由基清除率（％）=（A空白A測(cè)定）÷A空白×100％2、以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑Trolox的量表示：標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.7021x0.0012R2=0.9985x:Trolox濃度（μmol/mL）y:吸光值差值△A單位定義:以標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得的抗氧化劑Trolox的量來(lái)表示樣本的ABTS自由基清除本領(lǐng)。（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算總抗氧化本領(lǐng)（μmolTrolox/g鮮重）=（△A+0.0012）÷0.7021×V樣÷（V樣÷V樣總×W）=1.424×（△A+0.0012）÷W（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算總抗氧化本領(lǐng)（μmolTrolox/mgprot）=（△A+0.0012）÷0.7021×V樣÷（V樣÷V樣總×Cpr）=1.424×（△A+0.0012）÷Cpr（3）按細(xì)胞計(jì)算總抗氧化本領(lǐng)（μmolTrolox/104cell）=（△A+0.0012）÷0.7021×V樣÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））=1.424×（△A+0.0012）÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）（3）按液體體積計(jì)算總抗氧化本領(lǐng)（μmolTrolox/mL）=（△A+0.0012）÷0.7021=1.424×（△A+0.0012）V樣總：加入提取液體積，1mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，10μL；W：樣品質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL注意事項(xiàng)：1.盡量避開(kāi)使用在中堿性