亳菊組培快繁與脫毒技術(shù)規(guī)程

亳菊組培快繁與脫毒技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了亳菊（Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.）組培育苗中的普通術(shù)語、組培育苗過程中外植體材料的選擇、消毒滅菌、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽及苗床管理。本標(biāo)準(zhǔn)適用于亳菊在全國(guó)范圍內(nèi)的工廠化組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程GB3095環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國(guó)藥典》（一部）2020版3普通術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1植物組培planttissueculture將從植物體分離出的符合需要的組織、器官或細(xì)胞及原生質(zhì)體等材料，通過無菌操作接種在含有各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及植物激素的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株的技術(shù)。3.2接種inoculation將消毒后的外植體或干凈培養(yǎng)材料在無菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過程。3.3消毒disinfection通過物理、化學(xué)方法去除物體表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的過程。3.4滅菌sterilization通過物理、化學(xué)及一些理化方法殺滅一切微生物（包括孢子等）的過程。3.5外植體explant從自然生長(zhǎng)的活體植物上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。3.6初代培養(yǎng)primaryculture指直接從機(jī)體取下的細(xì)胞、組織和器官等材料的培養(yǎng)。3.7繼代培養(yǎng)subculture將培養(yǎng)材料從原來的培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過程。3.8生根培養(yǎng)rootingculture將繼代增殖后的無根芽苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)生根得到完整植株的過程。3.9組培工廠planttissuecultureproductionlaboratory利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)植物組培苗的工廠。3.10煉苗acclimatization

煉苗是在溫室中采取放風(fēng)、降溫、適當(dāng)控水等措施對(duì)幼苗強(qiáng)行鍛煉的過程。4組培4.1外植體材料選擇將新鮮采挖、大小適宜的亳菊嫩莖作為外植體材料。4.2消毒滅菌先在流水下沖洗30分鐘，然后移至超凈工作臺(tái)。將嫩莖置于無菌瓶中，倒入適量75%乙醇，使嫩莖浸泡并震蕩無菌瓶消毒30s，迅速倒出酒精，用適量無菌水沖洗兩次，然后用0.1%升汞浸泡消毒約8min，期間不斷震蕩，倒出升汞后用無菌水沖洗嫩莖四到五次，靜置晾干待用。4.3初代培養(yǎng)取消毒處理后的亳菊嫩莖1mm左右的莖尖及1.5-2cm帶有1-2個(gè)葉片的莖段；以每瓶1株分別接種至初代培養(yǎng)基（MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L）上進(jìn)行初代培養(yǎng)，然后在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強(qiáng)度1500~2000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，25d左右可進(jìn)行轉(zhuǎn)接。4.4繼代培養(yǎng)將經(jīng)過初代誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的組培苗切成1.5-2cm帶有2-3個(gè)葉片的莖段，以每瓶6株接種至增殖壯苗培養(yǎng)基（MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L）上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，然后在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強(qiáng)度2200~4000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，25d左右可進(jìn)行轉(zhuǎn)接。4.5生根培養(yǎng)將增殖壯苗培養(yǎng)獲得的高度約為7-8cm的亳菊叢芽分離成單株，并切成3-4cm帶有3-4個(gè)葉片的莖段，以每瓶6株接種至生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA0.03mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂6g/L+活性炭3g/L）上進(jìn)行生根培養(yǎng)，然后在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強(qiáng)度2200~4000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，25-30d即可出瓶。4.6病毒檢測(cè)對(duì)即將煉苗的植株進(jìn)行病毒檢測(cè)。采用PCR法對(duì)亳菊組培苗中的TAV、CMV、CVB、CSVD等病毒進(jìn)行檢測(cè)。5煉苗5.1生根苗移栽標(biāo)準(zhǔn)在組培瓶中生長(zhǎng)的根、莖、葉俱全的完整植株，苗高3.5-5.5cm，基部長(zhǎng)出不定根時(shí)，即可進(jìn)行煉苗。5.2煉苗方法將生長(zhǎng)健壯、葉色正綠平展、根長(zhǎng)2-4cm、高4-6cm的亳菊生根苗在溫室內(nèi)進(jìn)行強(qiáng)光閉瓶煉苗，馴化3-5d后進(jìn)行溫室煉苗。6移栽6.1栽培基質(zhì)及準(zhǔn)備在保證組培穴盤苗正常生長(zhǎng)的前提下，可因地制宜選擇基質(zhì)種類?；|(zhì)開袋倒槽，裝入穴盤中并稍壓緊待用。6.2洗苗將水池用75%酒精噴灑消毒5min，隨后用自來水沖洗干凈。蓄水池內(nèi)加入適量的水，輕輕取出馴化后的組培苗，用水洗凈根部附著的培養(yǎng)基且盡量防止傷苗，對(duì)洗凈后的亳菊苗進(jìn)行75%酒精噴灑消毒，放置1-2min后清水沖凈。6.3移栽將穴盤基質(zhì)挖出深2-4cm，直徑3cm的槽，然后把清洗處理后的苗移栽到槽中，填土輕輕按平。6.4消毒配置2000倍枯草芽孢桿菌和1000倍礦源黃腐酸鉀用噴霧機(jī)進(jìn)行噴灑，使其充分澆勻澆透。6.5擺放穴盤苗分移栽日期，在苗床上整齊擺放。7苗床管理7.1遮陽移栽后用遮陽網(wǎng)遮陽，煉苗后遮陽時(shí)間不少于7天，然后遮陽率調(diào)為75%左右最適宜亳菊苗健康生長(zhǎng)。7.2水肥管理?yè)?jù)天氣情況與季節(jié)特性及時(shí)澆水，保持土壤含水