亳菊組培快繁與脫毒技術(shù)規(guī)程

亳菊組培快繁與脫毒技術(shù)規(guī)程1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了亳菊（Dendranthemamorifolium(Ramat.)Tzvel.‘Boju’cv.nov.）組培育苗中的普通術(shù)語、組培育苗過程中外植體材料的選擇、消毒滅菌、初代培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗移栽及苗床管理。本標(biāo)準(zhǔn)適用于亳菊在全國范圍內(nèi)的工廠化組織培養(yǎng)育苗生產(chǎn)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標(biāo)準(zhǔn)。NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程GB3095環(huán)境質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《中華人民共和國藥典》（一部）2020版3普通術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。3.1植物組培planttissueculture將從植物體分離出的符合需要的組織、器官或細胞及原生質(zhì)體等材料，通過無菌操作接種在含有各種營養(yǎng)物質(zhì)及植物激素的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)以獲得再生的完整植株的技術(shù)。3.2接種inoculation將消毒后的外植體或干凈培養(yǎng)材料在無菌條件下接入培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)基中的過程。3.3消毒disinfection通過物理、化學(xué)方法去除物體表面大部分有害病原微生物（孢子除外）的過程。3.4滅菌sterilization通過物理、化學(xué)及一些理化方法殺滅一切微生物（包括孢子等）的過程。3.5外植體explant從自然生長的活體植物上獲取的用于建立植物組培快繁體系的起始材料。3.6初代培養(yǎng)primaryculture指直接從機體取下的細胞、組織和器官等材料的培養(yǎng)。3.7繼代培養(yǎng)subculture將培養(yǎng)材料從原來的培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)接入新鮮培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)的過程。3.8生根培養(yǎng)rootingculture將繼代增殖后的無根芽苗轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基上進行誘導(dǎo)生根得到完整植株的過程。3.9組培工廠planttissuecultureproductionlaboratory利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)大規(guī)模生產(chǎn)植物組培苗的工廠。3.10煉苗acclimatization

煉苗是在溫室中采取放風(fēng)、降溫、適當(dāng)控水等措施對幼苗強行鍛煉的過程。4組培4.1外植體材料選擇將新鮮采挖、大小適宜的亳菊嫩莖作為外植體材料。4.2消毒滅菌先在流水下沖洗30分鐘，然后移至超凈工作臺。將嫩莖置于無菌瓶中，倒入適量75%乙醇，使嫩莖浸泡并震蕩無菌瓶消毒30s，迅速倒出酒精，用適量無菌水沖洗兩次，然后用0.1%升汞浸泡消毒約8min，期間不斷震蕩，倒出升汞后用無菌水沖洗嫩莖四到五次，靜置晾干待用。4.3初代培養(yǎng)取消毒處理后的亳菊嫩莖1mm左右的莖尖及1.5-2cm帶有1-2個葉片的莖段；以每瓶1株分別接種至初代培養(yǎng)基（MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L）上進行初代培養(yǎng)，然后在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強度1500~2000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，25d左右可進行轉(zhuǎn)接。4.4繼代培養(yǎng)將經(jīng)過初代誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得的組培苗切成1.5-2cm帶有2-3個葉片的莖段，以每瓶6株接種至增殖壯苗培養(yǎng)基（MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂7.5g/L）上進行繼代培養(yǎng)，然后在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強度2200~4000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，25d左右可進行轉(zhuǎn)接。4.5生根培養(yǎng)將增殖壯苗培養(yǎng)獲得的高度約為7-8cm的亳菊叢芽分離成單株，并切成3-4cm帶有3-4個葉片的莖段，以每瓶6株接種至生根培養(yǎng)基（1/2MS+IBA0.03mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖40g/L+瓊脂6g/L+活性炭3g/L）上進行生根培養(yǎng)，然后在溫度25±2℃，光照16h/天，光照強度2200~4000lx的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，25-30d即可出瓶。4.6病毒檢測對即將煉苗的植株進行病毒檢測。采用PCR法對亳菊組培苗中的TAV、CMV、CVB、CSVD等病毒進行檢測。5煉苗5.1生根苗移栽標(biāo)準(zhǔn)在組培瓶中生長的根、莖、葉俱全的完整植株，苗高3.5-5.5cm，基部長出不定根時，即可進行煉苗。5.2煉苗方法將生長健壯、葉色正綠平展、根長2-4cm、高4-6cm的亳菊生根苗在溫室內(nèi)進行強光閉瓶煉苗，馴化3-5d后進行溫室煉苗。6移栽6.1栽培基質(zhì)及準(zhǔn)備在保證組培穴盤苗正常生長的前提下，可因地制宜選擇基質(zhì)種類?；|(zhì)開袋倒槽，裝入穴盤中并稍壓緊待用。6.2洗苗將水池用75%酒精噴灑消毒5min，隨后用自來水沖洗干凈。蓄水池內(nèi)加入適量的水，輕輕取出馴化后的組培苗，用水洗凈根部附著的培養(yǎng)基且盡量防止傷苗，對洗凈后的亳菊苗進行75%酒精噴灑消毒，放置1-2min后清水沖凈。6.3移栽將穴盤基質(zhì)挖出深2-4cm，直徑3cm的槽，然后把清洗處理后的苗移栽到槽中，填土輕輕按平。6.4消毒配置2000倍枯草芽孢桿菌和1000倍礦源黃腐酸鉀用噴霧機進行噴灑，使其充分澆勻澆透。6.5擺放穴盤苗分移栽日期，在苗床上整齊擺放。7苗床管理7.1遮陽移栽后用遮陽網(wǎng)遮陽，煉苗后遮陽時間不少于7天，然后遮陽率調(diào)為75%左右最適宜亳菊苗健康生長。7.2水肥管理據(jù)天氣情況與季節(jié)特性及時澆水，保持土壤含水