方法對比及偏差評估的方法-付紅偉

方法比照及偏差評估的方法

---介紹NCCLS文件EP9-A2報告人：付紅偉醫(yī)大總醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗科2021.07.27編輯課件NCCLS(美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會〕NCCLS是一個國際性、多學(xué)科、非盈利、制定標(biāo)準(zhǔn)、教育型組織，在臨床檢驗界內(nèi)促進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)和指南的使用和開展。NCCLS制定標(biāo)準(zhǔn)的原那么是從質(zhì)量效益和本錢效益兩方面考慮，為患者檢驗和臨床檢驗組織效勞。大多數(shù)NCCLS文件有“建議〞和“批準(zhǔn)〞兩個層次的認(rèn)同過程。建議：作為NCCLS的建議標(biāo)準(zhǔn)或指南處在被臨床檢驗界評審的第一階段，此文件需接受廣泛、全面的技術(shù)審核，包括對范圍、方法、用途及技術(shù)和編寫內(nèi)容的逐行逐字的審核。批準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)或指南已在臨床檢驗界得到認(rèn)同。應(yīng)審核并評價最終文件的有效性，確保到達(dá)認(rèn)同。2編輯課件EP9-A2文件內(nèi)容NCCLS文件EP9-A2〔用患者標(biāo)本進(jìn)行方法比對及偏倚評估；批準(zhǔn)指南-第二版〕是為實驗室人員和生產(chǎn)廠商制定的。它表達(dá)了測定兩種方法之間相對偏倚的程序，也表達(dá)了采用一分為二的患者樣本設(shè)計方法比對試驗時所需要考慮的因素。3編輯課件方法學(xué)比對具體流程1儀器熟悉階段2.質(zhì)量控制分析3方法比對試驗3.1實驗樣本的選擇3.2實驗樣本的測定4初步數(shù)據(jù)檢查4.1方法內(nèi)雙份數(shù)據(jù)的離群值檢驗4.2數(shù)據(jù)作圖4.3線性相關(guān)的目測檢查4.4方法間離群值的目測檢查4.5X值適宜范圍的檢驗5線性回歸5.1計算5.2分散均勻性的目測檢查6計算預(yù)期偏倚及其可信區(qū)間6.1線性回歸法〔當(dāng)數(shù)據(jù)通過適宜范圍及均勻離散度檢查時〕6.2當(dāng)數(shù)據(jù)未通過適宜范圍及均勻離散度檢查時，使用分部偏倚法6.3當(dāng)數(shù)據(jù)有不恒定〔可變的〕精密度時，用分部殘差計算預(yù)期偏倚7結(jié)果解釋以及內(nèi)部性能標(biāo)準(zhǔn)比較4編輯課件工作組建議在至少5個工作日內(nèi)最少要分析完40個患者樣本。增加測定樣本數(shù)及測定天數(shù)，可以提高實驗的可靠性及有效性。應(yīng)盡可能使至少50％樣本的測定結(jié)果處于實驗室的參考區(qū)間之外。如果從一個患者得不到所需的樣本量，可以將兩個〔但不能多于兩個〕病史相同，被測物濃度也大致相近的患者標(biāo)本混合使用，成為“微混合樣本〞。3.1實驗樣本的選擇5編輯課件分別用兩種方法對待測標(biāo)本進(jìn)行雙份重復(fù)測定。指定第一次測定順序，按反向順序檢測第二次〔雙份〕。即：樣品可以按下述順序進(jìn)行，1、2、3、4、5、6、7、8和8、7、6、5、4、3、2、1。對于全部標(biāo)本，均應(yīng)在兩小時內(nèi)測定完畢。如果可能，最好使用測定當(dāng)天的標(biāo)本。如果使用儲存標(biāo)本，儲存方式必須能確保樣本的穩(wěn)定性，以滿足參比方法和待評方法的要求。3.2實驗樣本的測定6編輯課件4初步數(shù)據(jù)檢查4.1方法內(nèi)雙份數(shù)據(jù)的離群值檢驗計算每個方法雙份測定的差值絕對值的均值，取各方法的平均絕對差值的四倍作為每個方法的“可接受〞限如果刪除的數(shù)據(jù)超出一個，那么需擴(kuò)大調(diào)查范圍，查找出現(xiàn)偏差的原因。如果能夠找到問題所在并能追蹤到引起偏差的樣品，那么應(yīng)替換這些樣品，且將問題記錄在案。判斷有7編輯課件4.2數(shù)據(jù)作圖圖1：重復(fù)檢測均值散點圖〔試驗方法均值比照較方法均值〕4.3線性相關(guān)目測檢測4.4方法間離群值目測檢測8編輯課件4.2數(shù)據(jù)作圖4.4方法間離群值目測檢測圖2：均值差異與二種方法的均值的偏倚圖〔試驗方法均值—比較方法均值〕對〔試驗方法均值+比較方法均值〕/25.2分散均勻性的目測檢查9編輯課件一般情況下，如果r≥0.975〔或r2≥0.95〕，那么可認(rèn)為X值取值范圍適宜。如果根據(jù)測定數(shù)據(jù)算出的r能滿足上述要求，那么可認(rèn)為X的誤差已被數(shù)據(jù)范圍所抵消。這時就可用簡單的直線回歸來估計斜率和截距。如果r2≤0.95，那么必須分析更多的樣品以擴(kuò)大數(shù)據(jù)濃度分布范圍，然后再重新分析全部數(shù)據(jù)。如果X的取值范圍無法擴(kuò)大，那么可采用6.2節(jié)中描述的分部偏倚法代替回歸方法來評價平均偏倚。4.2X值適宜范圍的檢驗10編輯課件5線性回歸分析平均Y對平均X值斜率b和截距a的計算公式如下：可用以下方程表示：其中：11編輯課件6計算預(yù)期偏倚及其可信區(qū)間6.1線性回歸法〔當(dāng)數(shù)據(jù)通過適合范圍和均勻離散度的檢查〕在給定的醫(yī)學(xué)決定水平Xc處的預(yù)期偏倚〔Bc〕的估計值，按以下公式計算：Bc的95%可信區(qū)間〔在Xc處的真正偏倚〕按以下公式計算：12編輯課件6.2當(dāng)數(shù)據(jù)未通過適合范圍檢查時，使用分部個別差異法計算平均偏倚〔分部偏倚法〕6.3當(dāng)數(shù)據(jù)有非恒定精密度時，用分部殘差計算預(yù)期偏倚〔分部殘差法〕6計算預(yù)期偏倚及其可信區(qū)間13編輯課件7.結(jié)果的解釋以及與內(nèi)部性能標(biāo)準(zhǔn)的比較根據(jù)數(shù)據(jù)的檢查結(jié)果，使用簡單的線性回歸方法估計在醫(yī)學(xué)決定水平處的預(yù)期偏倚的可信區(qū)間。然后把此評價結(jié)果與廠家聲明或內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較以判斷方法是否可以接受〔CLIA88/2)。如果兩種方法不相當(dāng)，但仍相信候選方法更特異，那么不要拒絕新方法，在常規(guī)應(yīng)用前收集新的臨床數(shù)據(jù)〔如建立新的參考范圍〕。應(yīng)注意實驗室要建立兩種方法之間的允許差異的標(biāo)準(zhǔn)。14編輯課件實例分析-1結(jié)論：兩種儀器間ALT測試結(jié)果有顯著差異，不符合CLIA88要求，應(yīng)及時進(jìn)行校正工作。R2=0.997>0.95，X分布范圍合適預(yù)期偏差評估醫(yī)學(xué)決定值預(yù)期偏差相對偏差CLIA88/250.61112.22%±10%40-0.579-1.45%100-2.619-2.62%R2=0.995>0.95，X分布范圍合適預(yù)期偏差評估醫(yī)學(xué)決定值預(yù)期偏差相對偏差CLIA88/255.66113.20%±10%408.1820.45%10012.1512.15%結(jié)論：兩種儀器間ALT測試結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異，除低值區(qū)域外偏差均符合CLIA88要求，在可接受范圍內(nèi)。15編輯課件實例分析-2R2=0.889<0.95，應(yīng)擴(kuò)大樣本量，增加X分布寬度后再行比對預(yù)期偏差評估醫(yī)學(xué)決定值預(yù)期偏差相對偏差CLIA88/2136-0.0040.00%±2mmol/L145-0.292-0.20%R2=0.6648<0.95，應(yīng)擴(kuò)大樣本量，增加X分布寬度后再行比對預(yù)期偏差評估醫(yī)學(xué)決定值預(yù)期偏差相對偏差CLIA88/2136-3.42-2.52%±2mmol/L145-5.416-3.74%結(jié)論：兩種儀器間Na測試結(jié)果有顯著差異，偏差不符合CLIA88要求，應(yīng)及時進(jìn)行校準(zhǔn)工作。16編輯課件連續(xù)5天雙份重復(fù)測定40份樣本方法內(nèi)離群點的排除數(shù)據(jù)作圖線性回歸R2>=0.95與否預(yù)期偏差評估比對實驗--小結(jié)17方法間離群點排除分散均勻性目測檢查編輯課件試劑性能指標(biāo)評價準(zhǔn)確度驗證精密度驗證線性范圍驗證參考范圍制定干擾實驗驗證18編輯課件準(zhǔn)確度驗證—回收實驗準(zhǔn)確度評估資料是評價檢測系統(tǒng)有效性的重要依據(jù)。定量檢測方法的回收實驗是評估準(zhǔn)確度的方法之一，用于評估定量檢測方法準(zhǔn)確測定參加純分析物的能力，結(jié)果用回收率表示。10斤蘋果2斤蘋果？19編輯課件回收實驗具體步驟20編輯課件回收實驗數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告21編輯課件實例分析-1

基礎(chǔ)樣本

基礎(chǔ)樣本+C.fas

基礎(chǔ)樣本+高值質(zhì)控

項目第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值TP68706868.6773737373.0073727573.33ALB42444242.6747474546.3346464746.33GLO26262626.0026262826.6727262827.00ALT18191818.3328282828.0030313130.67AST21212020.6732323131.6737363636.33ALP102103102102.33125125126125.33124123125124.00GGT16171716.6727272827.3340414140.67LDH155156156155.67183181182182.00184185186185.00測定濃度加入濃度回收濃度回收率基本樣本分析樣本1分析樣本2樣本制備：根本樣本：自制基質(zhì)血清0.9mL+超純潔水0.1mL分析樣本1：自制基質(zhì)血清0.9mL+C.FAS定標(biāo)液0.1mL分析樣本2：自制基質(zhì)血清0.9mL+高值指控血清0.1mL分別對上述三種樣本連續(xù)測定三次求均值，并將數(shù)值填入下述表格22編輯課件

生化分析儀準(zhǔn)確度驗證試驗

項目：血糖GLU單位：mmol/L驗證方法：回收實驗儀器Roche7600試劑批號658081標(biāo)準(zhǔn)液批號161454操作者付紅偉審核者王倩

測定濃度加入濃度回收濃度回收率%

基礎(chǔ)樣本4.67

分析樣本15.971.111.30117.12

分析樣本26.231.501.56104.00

平均回收率%110.56

比例系統(tǒng)誤差%10.56

TEa/25%

可接受性判斷：比例系統(tǒng)誤差大于CLIA88允許總誤差的1/2

日期：2012-08-06

生化分析儀準(zhǔn)確度驗證試驗

項目：谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT單位：U/L驗證方法：回收實驗儀器Roche7600試劑批號660856標(biāo)準(zhǔn)液批號161454操作者付紅偉審核者王倩

測定濃度加入濃度回收濃度回收率%

基礎(chǔ)樣本18.33

分析樣本1288.679.67111.53

分析樣本230.6711.712.34105.47

平均回收率%108.50

比例系統(tǒng)誤差%8.50

TEa/210%

可接受性判斷：比例系統(tǒng)誤差小于CLIA88允許總誤差的1/2

驗證日期：2012-08-06

結(jié)果報告23編輯課件精密度驗證—參考EP5-A文件批內(nèi)精密度評估對低值質(zhì)控血清同一天內(nèi)連續(xù)測定20次，排除離散點后求其均值、SD及CV值與試劑說明書比較，看與試劑盒標(biāo)注的批內(nèi)精密度是否一致；項目第1次第2次第3次-----第19次第20次均值標(biāo)準(zhǔn)差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲稱CV%結(jié)論TP666666-----656666.100.790.590.991.190.50精密度欠佳ALB485050-----494950.101.170.871.462.330.90精密度欠佳ALT414141-----403940.600.820.621.032.022.90精密度良好AST686968-----696967.900.790.590.991.162.10精密度良好ALP868686-----858686.350.990.741.241.140.70精密度欠佳GGT444444-----434343.150.670.500.841.550.50精密度欠佳LDH165162164-----163162162.601.230.921.540.761.30精密度良好TBIL23.520.220.6-----20.420.420.590.730.550.923.573.10精密度良好DBIL14.414.214.6-----1414.214.190.380.290.482.700.85精密度欠佳24編輯課件批間精密度驗證方法：參考EP5-A文件，對質(zhì)控血清連續(xù)測定5日，每日測定2批次，每批次重復(fù)測定8次，得到80個數(shù)據(jù)，排除離散點后，求其均值、SD及CV值與試劑說明書比較，看與試劑盒標(biāo)注的批間精密度是否一致；項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標(biāo)準(zhǔn)差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論ALT第一天4142404040414240.730.810.611.011.993.7精密度良好

第二天41414042404139

第三天40404042404041

第四天42414140414142

第五天41414041404241項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標(biāo)準(zhǔn)差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論AST第一天6463656564646466.461.811.362.262.723.2精密度良好

第二天68696767686967

第三天68676868676668

第四天65656564636564

第五天68696868676668項目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值標(biāo)準(zhǔn)差SD95%置信區(qū)間CV%廠商聲明CV%結(jié)論ALP第一天8888888888878787.341.050.791.321.210.5精密度欠佳

第二天8686