DB34-T 4205-2022 禽蛋中9種禁用藥物的殘留量檢測(cè) 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

ICS

67.120.20CCS

X

1834 DB34/T

4205—2022禽蛋中

9

種禁用藥物的殘留量檢測(cè)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determination

of

9

banned

drugs

in

poultry

high

performance

chromatography-tandem

發(fā)布

實(shí)施安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局 發(fā)

布DB34/T

4205—2022 本文件按照GB/T

1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由安徽省獸藥飼料監(jiān)察所提出。本文件由安徽省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳歸口。安全中心。昊、許世富、詹凱、吳敏、李佳慶、操軍、吳蕾、劉紅云、宋亞偉、劉舜舜、馮成、郝金華、宋祥軍、趙瑞宏、劉發(fā)全。DB34/T

4205—2022

1 范圍本文件規(guī)定了禽蛋中甲硝唑、金剛烷胺、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、氯霉素殘留量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)方法。本文件適用于禽蛋中甲硝唑、金剛烷胺、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩諾沙星、強(qiáng)力霉素、氟苯尼考、氯霉素殘留量的檢測(cè)。2 規(guī)范性引用文件文件。GB/T

6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4 原理試樣經(jīng)

80%

-定量。5 試劑和材料試劑除非另有說(shuō)明，本法所用試劑均為分析純，水為符合

GB/T

6682

規(guī)定的一級(jí)水的要求。甲醇，色譜純。乙腈，色譜純。乙酸銨，色譜純。溶液配制如下：——10%

甲醇溶液：取甲醇

mL，加水定容至

1000

，混勻；——80%

mL，加水定容至

1000

，混勻；——流動(dòng)相由

A、B

兩種溶液按比例隨時(shí)間梯度混合而成：5? A：

mmol/L

0.385

g

1000

mL5? B：乙腈。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)如下：——甲硝唑標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)：

≥

；——金剛烷胺標(biāo)準(zhǔn)品（

768-94-5），純度

≥

97.5%；DB34/T

4205—2022——諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品（

70458-96-7

≥

97.2%；——氧氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品（

82419-36-1

≥

95.7%；——培氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品（

70458-96-6

≥

92.1%；——恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品（

93106-60-6

≥

99.9%；——強(qiáng)力霉素標(biāo)準(zhǔn)品（

24390-14-5

≥

98.7%；——氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品（

73231-34-2

≥

99.9%；——氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品（CAS

號(hào)：56-75-7），純度

≥

99.2%。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱(chēng)取

25

mg

甲硝唑、金剛烷胺、強(qiáng)力霉素、諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、恩諾沙星、氟苯尼考、氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品，分別置于

25

mL

容量瓶中，用甲醇溶解并定容，充分搖勻，制得

1

的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，密封，

-18℃保存，有效期

6

個(gè)月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)液（

μg/mL）：精確量取

9

種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，各

0.1

mL

于

10

mL

容量瓶中，用甲醇定容，制得

10

μg/mL

的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，密封，

℃保存，有效期

3

個(gè)月?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作液：取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（

μ）適量，用

為

1

ng/mL、

5

ng/mL、

ng/mL、

20

ng/mL、

ng/mL、

ng/mL

的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，

4℃保存，有效期

1

6 儀器和設(shè)備如下：——高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（配電噴霧離子源）；——高速冷凍離心機(jī)：≥

16000

r/min；——氮吹儀；——渦旋混合儀；——PRiME

HLB

固相萃取柱：

60

mg，

3

mL——分析天平：感量

0.1

g、

0.1

mg、

0.01

mg；——微孔濾膜：

0.22

μm

無(wú)機(jī)濾膜。7 試樣的制備將禽蛋去殼后混合均勻，℃

保存?zhèn)溆茫?/p>

3

個(gè)月內(nèi)進(jìn)行分析測(cè)試。8 測(cè)定步驟提取稱(chēng)取試料

2

g（精確至

0.1

g

50

乙腈水溶液

mL

1

，高速振蕩提取

5

，

10000

r/min

10

min，取上清液用于固相萃取柱凈化。取

mL上清液到PRiME

固相萃取柱中，保持一秒一滴的流速，收集全部流出液。于

45℃

水浴中用氮?dú)獯蹈桑?0%

甲醇水溶液

溶解，渦旋混勻，經(jīng)

0.22

μm微孔濾膜過(guò)濾后供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。色譜條件如下：定性、定量離子對(duì)（m/zE/V碰撞能量（E/V172.2/127.9*+ESI38020172.2/8237152.1/135*+ESI38025152.1/9338320.1/276.1*+ESI38026320.1/233.135362.2/318.1*+ESI38026362.2/261.138334.1/316.1*+ESI38027334.1/290.225360.1/316.1*+ESI38025360.1/245.135時(shí)間（min）流動(dòng)相

A（%）流動(dòng)相

B（%）0901029010830708.019010109010DB34/T

4205—2022——色譜柱：C18色譜柱（

2.1

mm

×

50

mm，1.8

μm），或相當(dāng)者；——流動(dòng)相：A（

5

mmol/L

乙酸銨溶液）、B（乙腈），采用梯度洗脫見(jiàn)表

1；——流速：

；——進(jìn)樣量：

5

μL；——柱溫：

30℃。表1表1

梯度洗脫程序如下：——離子源：電噴霧離子源（）；——電噴霧電壓（IS）：

5500

V；——掃描模式：ESI+和

ESI-同時(shí)掃描；——檢測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（）；——霧化氣溫度（

Temp

300℃；——霧化氣流量（

Flow

17

L/min

；——鞘氣溫度（Shealth

Gas

Temp

——鞘氣氣流量（

Flow）：

11

L/min；——定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、裂解電壓（Fragmentor

potential）和碰撞氣能量（CE）見(jiàn)表2。表2

定性、定量離子對(duì)及其他參數(shù)條件445.1/428.1*+ESI38024445.1/154.135356.1/119*-ESI38023356.1/184.912321/152.1*-ESI38024321/256.917

DB34/T

4205—2022??×??2??×??2×1000

(1)8.4.1 保留時(shí)間待測(cè)樣品中化合物色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液相比變化范圍應(yīng)在

±

2.5%

之內(nèi)。8.4.2 定量離子、定性離子及離子豐度比過(guò)表

3

規(guī)定的范圍。表3表3

定性時(shí)相當(dāng)離子豐度的最大允許偏差

9

種藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖見(jiàn)附錄A。結(jié)果的計(jì)算與表述8.6.1 結(jié)果計(jì)算試樣中

9

種藥物的含量利用數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)計(jì)算或按式（1）計(jì)算：????

=

????×??1×??3×1000式中：X——試樣中藥物含量，單位為微克每千克（μg/kgC——試樣色譜峰對(duì)應(yīng)的藥物濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；M——試樣質(zhì)量，單位為克（gV——提取液體積，單位為毫升（mL）。V——過(guò)柱上清液體積，單位為毫升（mL）；V——溶解液體積，單位為毫升（mL）。8.6.2 結(jié)果表示/%88.9%

88.6%

85.6%

81.5%

80.3%

81.9%

77.2%

89.6%

79.5%

DB34/T

4205—2022測(cè)定結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后

1

位有效數(shù)字。9 靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度靈敏度本方法

9

種藥物的檢測(cè)限均為

μg/kg，9種藥物的定量限均為

μg/kg。準(zhǔn)確度本方法在禽蛋中

2.0

μ添加濃度水平上，9

種藥物的回收率結(jié)果見(jiàn)表

4。表4表4

9

種藥物的回收率結(jié)果本方法的批內(nèi)、批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均

≤

。DB34/T

4205—2022附 錄 A（資料性）9

種藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液的

MRM

色譜圖9

種藥物標(biāo)準(zhǔn)溶液的MRM色譜圖見(jiàn)圖。圖A.1

甲硝唑定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

色譜圖圖A.2

甲硝唑定量離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

色譜圖圖A.3

強(qiáng)力霉素定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖DB34/T

4205—2022圖A.4

強(qiáng)力霉素定量離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖圖A.5

氧氟沙星定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖圖A.6

氧氟沙星定量離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖DB34/T

4205—2022圖A.7

恩諾沙星定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖圖A.8

恩諾沙星定量離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖圖A.9

培氟沙星定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖DB34/T

4205—2022圖A.10

培氟沙星定量離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖圖A.11

諾氟沙星定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖圖A.12

諾氟沙星定量離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MRM

色譜圖DB34/T

4205—2022圖A.13

金剛烷胺定性離子對(duì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（20

ng/mL

MR