PCR擴增和電泳檢測

實驗13DNA片段的PCR擴增1、用PCR技術對DNA進行擴增2、用瓊脂糖凝膠電泳技術對擴增后的DNA進行檢測

精選ppt電泳觀察PCR反應

實驗步驟精選pptDNA在體內(nèi)復制的條件是什么？模板：酶：原料、能量：解旋酶、DNA聚合酶等。DNA分子的每條鏈dATP、dGTP、dCTP、dTTP引物：溫和的反響條件精選pptDNA分子的結構精選ppt合成DNA分子的原料——脫氧核苷三磷酸精選ppt合成DNA分子的原料——脫氧核苷三磷酸dATPdGTPdCTPdTTP精選ppt

聚合反響機理：精選pptDNA聚合酶精選ppt不同細胞的細胞周期

不同生物細胞

需要的時間細菌一般是20~30分鐘蠶豆根尖細胞17.3小時小鼠十二指腸細胞15.3小時人的肝細胞22小時人的宮頸癌細胞22.5小時PCR技術可在幾小時內(nèi)，將特定核酸序列擴增百萬倍!精選pptPCR的概念PCR〔PolymeraseChainReaction,聚合酶鏈反響〕是指在體外，通過特異DNA引物擴增核酸分子中某個特定區(qū)域的技術。精選ppt

PCR的反響體系DNA模板原料：dNTP(dATP、dGTP、dCTP、TTP)；酶：Taq聚合酶〔嗜熱細菌中別離得到〕引物：〔單鏈DNA片段〕Mg2+〔維持酶活性所必需〕PCR緩沖液：維持pH，保護Taq酶精選pptPCR技術原理變性退火延伸精選pptPCR三步曲

預變性保溫變性90~95℃延伸70~75℃退火40~60℃精選pptPCR儀精選ppt用于PCR的預混液〔500L體系〕：

ddH2O310L10×butter50LMgCl240LdNTP混合液20L引物125L引物225L模板DNA25LTaqDNA聚合酶5L標記一個微量離心管，用取樣器取20L的預混液參加到該管中。精選ppt反響試劑用量PCRSuperMix10μL引物Ⅰ〔濃度10μM〕1μL引物Ⅱ〔濃度10μM〕1μL模板DNA5μLddH2O3μL總體積20μL精選ppt微量可調(diào)移液器〔一檔吸、二檔排〕精選pptPCR反響參數(shù)：

變性94℃30s退火52℃30s延伸72℃60s

預變性94℃300s

保溫72℃600s循環(huán)次數(shù)35精選ppt1、根本概念以瓊脂糖凝膠作為介質,DNA在外加電場的作用下泳動的技術。2、實驗原理瓊脂糖是一種天然聚合長鏈狀分子，可以形成具有剛性的濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。瓊脂糖凝膠電泳精選ppt瓊脂糖凝膠電泳根本原理精選ppt精選ppt制膠使用電泳緩沖液在制膠器上配制1.0%的瓊脂糖凝膠?；鞓?μL載樣緩沖液、2μL核酸熒光染料，10μLPCR產(chǎn)物混勻。點樣將上步混好的樣10μL加到凝膠孔中。電泳90V電壓下電泳10~20min。瓊脂糖凝膠電泳的過程精選ppt將凝膠倒入制膠器的槽中〔60oC〕將瓊脂糖參加電泳緩沖液,在微波爐中加熱溶解至透明。制膠精選ppt將梳子從制膠槽中拔出

精選ppt取出凝膠板放入電泳槽中

向電泳槽中參加電泳緩沖液至沒過凝膠精選ppt瓊脂糖凝膠電泳中緩沖液的作用1、增加電導率；2、維持電泳過程中的適宜的pH。精選ppt吸取PCR反響產(chǎn)物10μL。注意吸頭要插入到管底，才能取到PCR產(chǎn)物。將PCR產(chǎn)物與加樣緩沖液充分混合〔吸排幾次〕混樣精選ppt常用的上樣緩沖液配方及各成分的作用蔗糖使樣品呈色，便于上樣，形成可見指示帶，預測電泳進程。溴酚藍增加樣品密度，保證DNA均勻沉入加樣孔內(nèi)。核酸熒光染料可嵌合入DNA分子，在特定激發(fā)光源的激發(fā)下可發(fā)出熒光，熒光強度與DNA含量成正比?！残枰c加樣緩沖液混合〕精選ppt加樣精選ppt進行電泳10-20分鐘電泳精選ppt實驗用的核酸熒光染料與DNA嵌合后，在DNA圖譜觀察儀的可見光下發(fā)射黃綠色熒光