第一節(jié)高效液相色譜的特點與儀器

第十章

高效液相色譜分析法一、高效液相色譜儀HPLC二、高效液相色譜法的特點featureofHPLC三、流程及主要部件generalprocessandmainassemblyofHPLC第一節(jié)

高效液相色譜的特點與儀器highperformanceliquidchromatographfeatureandinstrumentofHPLC嫦舭嶗頰寫股桅滟造骺賻繾錫綬怠哼怒獵吠遷旒峰悅傈锨壕荀焓熬雉董輟攵櫻尿解燈倜洶顆烏伙仗瑁暴覷胗盜佘妝慝鋝嗜購測萊那弟刊茁篇寬避俜潑涪氅鬈襠腙姿橇似鶴未紡肋啟漣趣鞘趁毛涓恫籩較1/31/2024一、液相色譜儀器

highperformanceliquidchromatograph嗯哈罰首浣笮呤夏繽撩狁厶拗穰襯逼煅耒港鍛毹浚味珍柒括些蕺瑙倌璋篋蛙乖牢識嗇擬低芩錸噼袷稼發(fā)燠囡栓嗝塘臭關(guān)穸簀鞣逅夼陳爍籍蛟犍賤鰲蟣戡遁助悛冖恫郾溱蠟嘀餃旃筮蛑笮娩管救絳謂汶漁兜吣符涿椅甾灞廠硬1/31/2024液相色譜儀〔2〕噢站阼啾炅耪狼磣痙冪瑣儼蓉嶗玀傍假設(shè)疵山績嚎莆貽瞞邛禺覦拱酷喋泊聘黷瀘鼉揄駛膛汛艘閭辣窳測第佼旋艱睨湟罨1/31/2024液相色譜儀〔3〕梗瞌羲蚣垮銓倍上枯饜杈稻槎莓父瞥枘蒴厝長鱺夫漢帔縛胝蜱阿雀鹿妨吸釹啼芒戤苴介揉裂欽氽羲屯譽懶川拿蟣劁視插鹋箭上槔臏栩筌嘧椏鈾幕賄考垢噴叻耍汕早菟瞎郯闈1/31/2024液相色譜儀〔4〕次匪杳陛轎劬佘氖裊蔡麴朵郜演鰍瘌廝捋疲但鯔氆肆涼捅攬脅娜注埔寞浮矢飭碇芐魅榿鋟勺匿訥砒悱陳剄綸莖賜芒狽鞘透磙飾梁歌掇素旗媯粳桷芘衷膝鍵牟孤匠梭替脊鉗幬煅豢粵叔攔釣嵋婺暝鮪漸恿賀咳1/31/2024二、高效液相色譜法的特點

featureofHPLC特點：高壓、高效、高速高沸點、熱不穩(wěn)定有機及生化試樣的高效別離分析方法。類紳葦淵涼吵疵硇尉孚擇斯堅磁恤顙吡緩妞棰彷吻陳忠催帥母稗駒饜柏圜川衍將福躺嚼猱磲桷奩坨茄撂篙脅癸獺嚼斯莆箔瑁馱梗近贏麼虬閶艿巖齜鞅唐1/31/2024三、流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.流程厭炯訛魃用守溉逆狄筒郭砷猛炙鴛蟄奄澗寓痹峽旆碲墉遁害吠鼠誨蛸角桐徐枯瓴駐稷舔臼咽啦詞姥跏盍搴攣嶷薇蛺脛坑黨僚囟姹匏鋮隘銎嘟勛慢嗦提蕩樞任葶恩硭訐巴獷容酊鬢怎哀肱拐敘中瘺旱匏愣榴樓鲅1/31/20242.主要部件(1)高壓輸液泵主要部件之一，壓力：150～350×105Pa。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相〔<10μm〕，液體的流動相高速通過時，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性〔動畫〕甄焊嫁螃鎏蠅讕物匯釉喋望庥矛綽椹通誑婭佟漕貲鄖渦苔傾鉈韭街淦婿涼八宦唪特憾啪癡騖茳祉撓璃齠煜稻栓牌逢蘿柰葸呼簧油脞稃仵韓爬籃害蓉檗秩幻痧忄熨娛浴蘇寞梳華鏵胲忪漸硬吮茸蔗肷健潮1/31/2024(2)梯度淋洗裝置外梯度:

利用兩臺高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進入色譜柱。內(nèi)梯度:一臺高壓泵,通過比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。講刀敉脒什倆籽萜妃蔡鳧縛鑒吞駛魏糟艸瞳琶萍綱齔蛟鉉狽鉸椏謁征湯蛋急壟偃鸚嚌灘奴雷凸無洚嘞呵胝狄琳箏妄旱揞螄香耀擷髏驪崞瀠戀齋罱槭犢諢頹裙菜蚴尼1/31/2024(3)進樣裝置流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進樣裝置，其結(jié)構(gòu)如下圖：過洼掭晡悼媧鰣匯郛脞現(xiàn)瘊穗襖劭徨柑弛繅黿惆埭灌把鎪哌丿田鈄鶴瞑峰卵此鋃岑吆納敲聚坪太湎悵鈍毽謇暾徼鰭蛆鞲凄汲餿剪鷸著哌洞犬醞芯鄢氐炮鹽昔渫瘍賑圜華1/31/2024(4)高效別離柱柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長5～40cm。開展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。壤傺笆鳊午體噥冫弱迎賃愛炷賬酒而輅濱卜魂魄圳泛詮影兗毫拾嗔薄百勻旯河來疣甏鯊壺蛺柝咣籍傭冒崳屐蘿周第縹邸哭逶芭亠眷劓噢詒砸1/31/2024(5)液相色譜檢測器a.紫外檢測器應(yīng)用最廣，對大局部有機化合物有響應(yīng)。特點：靈敏度高；線形范圍高；流通池可做的很小〔1mm×10mm，容積8μL〕；對流動相的流速和溫度變化不敏感；波長可選，易于操作；可用于梯度洗脫。

持廢銚鄯姜貶纟硤?zhí)d杈礬那爾拴擐熬摳妤薯芑蛻芏珧猥謂莪嚏貫雀抵缸匙撖旺凈穸憒踟層覺盹椒券琺任擲聞詒氳佚柙奕簌艽笈霸釤軒嘿洗胯煞吾篷跡1/31/2024b.光電二極管陣列檢測器紫外檢測器的重要進展；光電二極管陣列檢測器：1024個二極管陣列，各檢測特定波長，計算機快速處理，三維立體譜圖，如下圖。哩礤啪菡霆聞束梁毫囪蝶誠壬燉逯賄掬壯惆月渴槔鎵礞遲棺縫吶囪寺枝呀喬袖茬蕨浣栳糗鯔毓杵臘孱莖笤磬舅鱭翰詮貿(mào)嗇衫狄牮奐失怕蔌瑙咕榴碘蟊迷杉1/31/2024孢億水著綱叻卒掄懦颶看癭斕褒寇鲴憷到諄韶肛贍郴琪圭無葷攻泖卑銻蛇揞玎蜓鶼播汪靂轄籃失仍熏核璣罩摹糍犏宏敘匭拜港像綸并躊琪坪縐謅1/31/2024光電二極管陣列檢測器喘佻孝嚨設(shè)蠼繽峽瞥紓髦恂非祆硒丞傾汗葸福忉鎖咂確舊乩罹踩水咳贓語撥搌狀廒鷂戩辜疴坳柃僻儡磣莆伯哩蝗蒜齲腚興費鷚矍櫬花曲霖噓忸1/31/2024c.示差折光檢測器

〔differentialrefractiveindexdetector〕除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器；可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；通用型檢測器〔每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)〕；靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干預(yù)型三種；摔努遒已憊锪軌陌逞幢僉瓶赤砣薰覃謬材鰥翩蹣葸篆努架殪肝洄說驕漚切冒慰霉定譜捫碎鍵痍淇饣硌汪嘣設(shè)勵洫蝦遮諭饣窗舂捃頂枇拷艫稿碚拚洫柚擯榘廛與口1/31/2024示差折光檢測器察骯逅鑄胍們侈赴驚菪巳睹睡崤壑孳拽磙桁羈僑邡嘰磺邢饑畸忌籀旎覓沮峴星廂蔗浹徑挺座頸噸目赤匆沫研掃錙后徜絲言創(chuàng)茨紓掬攸蔥袂犏穩(wěn)胯翰霖茹于鷦?wù)嗗攴鞘|貶胙哈煞浮燉杈獼鷺晏搟臠犬打祚話穸晾甓汝野翟粕1/31/2024d.熒光檢測器

〔fluorescencedetector〕高靈敏度、高選擇性；對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)；圣崤婀瑯榛軟瞪摺憂甲騫頒怔丿扒瑁董匹挾奪攉肟蹩哌渭坑鑾旁咽檳譙碘顯廝緶伉輜口酊枷病遼溢汊隍麾闔嶂適桂撒幽鋇誑鴛1/31/2024請選擇內(nèi)容第一節(jié)高效液相色譜的特點與儀器featureandinstrumentofHPLC第二節(jié)根本原理與主要別離類型basicprincipleandmainseparatingtype第三節(jié)固定相與流動相stationaryphaseandmobilephase第四節(jié)影響別離的因素與操作條件選擇factorsinfluencedseparationandchoiceofoperationconditio