SN-T 5742-2023 魚類及其制品中金槍魚、鱈魚和虹鱒魚成分快速檢測(cè)方法 PCR-試紙條法

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X??中華人民共和國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)??魚類及其制品中金槍魚、鱈魚和虹鱒魚成分?

?PCR

PCR

中華人民共和國(guó)海關(guān)總署 發(fā)?

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學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載前?

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學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載PCR—試紙條法1?

本文件描述了魚類及其制品中金槍魚成分、鱈魚成分、虹鱒魚成分檢測(cè)的

魚、魚、魚、魚、魚、大西

檢測(cè)。下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件

分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范

食品分子生物學(xué)檢測(cè)

下列術(shù)語和定義適應(yīng)于本文件。

Perciformes），Scombridae

見于世界暖水海域，與鯖、鮐、馬鮫等近緣，通常同隸鯖科。常見被稱為金槍魚的商品魚類有藍(lán)鰭金槍魚（Thunnus

thynnusThunnus

alalungaThunnus

albacaresThunnusobesus）。

Gadus注：

mykiss鮭形目魚類，鮭科、太平洋鮭屬的一種鮭魚。注：

F

R

F

R

F

R

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57422023．ｂ兔ｗｗｗｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)學(xué)兔下載下列縮略語適應(yīng)于本文件。

）。

）。

）。EDTA

）。FITC

）。

［Tris］。

-

檢測(cè)用引物（對(duì)）序列及標(biāo)記物詳見表

1?

1?

Ex

）、）。

）。

異丙醇。學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載/T

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g

g

-EDTA

液：

g

解，

/

/

/

g

），

g

），

Tris-HCl

）：

g

HCL

）：

g

）的

K

K

-20 條：試紙條，可通過采購(gòu)的原料試劑自行組裝（見附錄

A）或采用等效的商品化試紙條。

展開液：取

Tris-HCl

溶液，200

L

≥

），4±1

L

L

L

L

L）。

±1

核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計(jì)。8?

鮮活成魚宜取肌肉組織。如需非致死性取樣，剪取部分魚鰭條或者刮去部分皮膚后取皮下一

3mm~5

mm

脂肪組織。將固狀待檢樣品研磨混勻，分裝

份，其中

份為檢樣，另外

份為留存樣品。鹽、糖、等，作，過洗滌方式盡量去除樣品中的鹽、糖和色素等雜質(zhì)。

m

Mg

L

L

L

L

ng/L）

L

mM

L

O

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ｗｗ．ｂｚｆ學(xué)兔兔ｗｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載

mg

L

K

h

g

/

/

/

），

中，

勻，

h

勻，-20

棄上清，用

乙醇洗滌沉淀一次，12000

離心

min，棄上清，室溫下晾干。加入

L

，-20

nm

nm

=

×

×

……………（1）式中：

g/L

nm

PCR

2?

PCR

2?

PCR

，PCR

照、照。照，用不

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3?

3?

PCR

LPCR

L

果。以下條件有一條不滿足時(shí)，實(shí)驗(yàn)視為無效：

空白對(duì)照：質(zhì)控線變紅，檢測(cè)線未變紅。

陰性對(duì)照：質(zhì)控線變紅，檢測(cè)線未變紅。

陽性對(duì)照：質(zhì)控線變紅，檢測(cè)線變紅。

，PCR

）。

，PCR

XXX

XXX）成標(biāo)物種）成分。

）。ｗｗ學(xué)兔兔ｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載/T

57422023ｗｗ學(xué)兔兔ｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載附?

錄?

FITC

Anti-FITC

b

質(zhì)控線上的二抗：依據(jù)上述兔多抗或鼠單抗方案可分別選擇羊抗兔或者羊抗鼠抗體。

標(biāo)引序號(hào)說明：1—吸水濾紙墊；

FITC

4—檢測(cè)帶，附有鏈親和素；5—質(zhì)控帶，附有可結(jié)合兔源抗體的抗體；7—吸水墊。

（FITC

上的生物素結(jié)合。

向上部移動(dòng)，在經(jīng)過固定有鏈親和素的檢測(cè)線位置時(shí)，因帶有生物素標(biāo)記而被鏈親和素捕獲在該位置上，顯示棕紅色，過量的產(chǎn)物繼續(xù)向上移動(dòng)至固定有羊抗兔抗體的質(zhì)控線位置，因其帶有抗異硫氰酸鹽的兔多克隆抗體而被捕獲在質(zhì)控線上，從而顯示出兩條色帶。非特異性擴(kuò)增的

產(chǎn)物因無生物素或異硫氰酸鹽標(biāo)記的緣故，不能與金標(biāo)記的異硫氰酸鹽抗體結(jié)合，且被鏈親和素捕獲，從而不能在檢測(cè)線位置顯示顏色，而未參與反應(yīng)的

引物因帶有異學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載/T

學(xué)兔兔ｗｗｗ．ｂｚｆｘｗ．ｃｏｍ標(biāo)準(zhǔn)下載附?

錄?

B

金槍魚成分的基因擴(kuò)增靶標(biāo)參考序列（gennbank

號(hào)：X97337.1）TCAGCAGTGATAAACCTTAAGCTATAAGTGAAAACTTGACTTAGTTAAAGCTAAGAGGGCCGGTA

號(hào)：NC_002081.1）TCTAGGCCTTTGCTTAATTACTCAACTT