TNAIA 0256-2023 羊多動(dòng)物鏈球菌病防治技術(shù)規(guī)程

ICSICS65.020.30ICSCCSA031

T/NAIA團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/NAIA0256-2023羊多動(dòng)物鏈球菌病防治技術(shù)規(guī)程Technicalproceduresfordiagnosisandpreventionofmulti-animalstreptococcaldiseaseofsheep2023-12-18發(fā)布 2023-12-31實(shí)施寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì) 發(fā)布T/NAIA0256-2023T/NAIA0256-2023前言GB/T1.1-20201定起草。本文件由寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)提出并歸口。寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院、寧夏農(nóng)業(yè)學(xué)校、固原市農(nóng)業(yè)綜合培訓(xùn)服務(wù)中心、固原市職業(yè)技術(shù)學(xué)校。知新、費(fèi)媛媛、趙娜、梁小軍、謝建亮、毛磊、施安、康曉冬、高?；邸埦帽P(pán)、于有利。本文件為首次發(fā)布。羊多動(dòng)物鏈球菌病防治技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了羊場(chǎng)多動(dòng)物鏈球菌病防治技術(shù)的術(shù)語(yǔ)和定義、診斷、預(yù)防和治療、無(wú)害化處理。本文件適用于規(guī)模羊場(chǎng)多動(dòng)物鏈球菌病的防治。其他羊場(chǎng)參照?qǐng)?zhí)行。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14926.42實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌學(xué)檢測(cè)標(biāo)本采集GB16548病害動(dòng)物和病害動(dòng)物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程GB18596畜禽養(yǎng)殖業(yè)污染物排放標(biāo)準(zhǔn)術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。多動(dòng)物鏈球菌病（Streptococcuspluranimalium）由多動(dòng)物鏈球菌引發(fā)羊的一種呈現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)的傳染病。5%脫纖維羊血培養(yǎng)基由豆粉瓊脂培養(yǎng)基添加5%脫纖維羊血組成，主要用于多動(dòng)物鏈球菌的分離。診斷流行病學(xué)多動(dòng)物鏈球菌可造成羊、多個(gè)組織器官感染。長(zhǎng)途運(yùn)輸、飼養(yǎng)環(huán)境變化、氣候變化等因素可誘發(fā)多動(dòng)物鏈球菌病的發(fā)生?？赏ㄟ^(guò)呼吸道和消化道等途徑傳播。臨床癥狀診斷體溫升高、四肢乏力、行動(dòng)困難、呼吸急促、咳嗽。病理變化診斷全身多處可見(jiàn)水泡，肺組織、氣管等出現(xiàn)腫脹、表面淤血、出血。病原學(xué)診斷樣本采集爛 爛按照GB/T14926.42執(zhí)行。如果24h內(nèi)不能送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，-20℃保存。樣品解凍時(shí)，置于38℃～40℃水浴解凍。病原分離及鏡檢將采集的肺臟組織表面消毒后，剪取肺臟深部組織一小塊，然后無(wú)菌操作條件下接種于脫纖維羊血固體培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，無(wú)菌操作條件下挑取單菌落接種在新的5%脫纖維羊血固體培養(yǎng)基上，5%CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)24h后，可觀察到散在的淡灰色、透明，小針狀菌落，菌落周圍呈現(xiàn)溶血現(xiàn)象；經(jīng)革蘭氏染色后，鏡檢觀察到呈鏈狀的革蘭氏陽(yáng)性菌。PCR診斷Forward primer： 5'-GAATTCCGAGAGTTTGATCCTGGCT-3'，Reverse primer：5'-AAGCTTGAGGTAATCCATCCCCACGTTC-3'。PCR反應(yīng)體系為50uL體系：模板2uL，上下游引物各1uL（10umol/L），2×TaqMasterMix25uL，ddH2O1uL。反應(yīng)條件：95℃2min；95℃30s，53℃20s，72℃2min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸8min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析，用凝膠回收試劑盒純化回收PCR產(chǎn)物，將PCR純化產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序并NCBI進(jìn)行BLAST分析。結(jié)果判定符合4.1、4.2和4.3的特征判斷為疑似病例。同時(shí)符合4.4的特征判斷為確診病例。預(yù)防和治療預(yù)防加強(qiáng)飼養(yǎng)及環(huán)境衛(wèi)生管理，定期消毒，定期監(jiān)測(cè)。不從疫區(qū)或發(fā)病區(qū)引進(jìn)羊。羊只引進(jìn)后應(yīng)隔離觀察并采取應(yīng)激預(yù)防措施，確保無(wú)病后方可混群。治療可使用青霉素類、喹諾酮類、磺胺類等藥物，使用劑量參照說(shuō)明