杭白菊脫毒種苗生產(chǎn)技術規(guī)程

2杭白菊脫毒種苗生產(chǎn)技術規(guī)程CMV）和馬鈴薯Y病毒（PotatovirusY，PVY）等的脫毒組培瓶苗、脫毒原種苗及脫毒生產(chǎn)用苗。NY/T401脫毒馬鈴薯種薯（苗）病毒檢測技術規(guī)程SN/T2122-2015進出境植物及植物產(chǎn)品檢通過植物脫病毒方法獲得的不攜帶本標準規(guī)定檢測病毒的組織培養(yǎng)3脫毒組培瓶苗移栽于無病原、蟲源的種苗圃內(nèi)存活不攜帶本標準規(guī)定檢測病毒的植株數(shù)占所檢測植株4生產(chǎn)技術4.1脫毒組培瓶苗4.1.1外植體選擇4.1.2無菌苗繁育莖段經(jīng)無菌水清洗后置于超凈工作臺，切取帶生長點的面1min后，經(jīng)次氯酸鹽和Tween-4.1.3脫毒苗培育4.1.4脫毒苗快繁4.1.5培養(yǎng)條件光照強度30μmol·m-2·s-1～60μmol·m-2·s-1，白天溫度25℃±2℃,晚上溫度18℃±2℃（黑暗培養(yǎng)）。4.2脫毒原種苗和脫毒生產(chǎn)用苗4.2.1脫毒原種苗生產(chǎn)4.2.1.1基質(zhì)準備建議基質(zhì)栽培?；|(zhì)配比為泥炭:珍珠巖:蛭石=3:44.2.1.2定植方式4.2.2.1苗床準備2度三元復合肥15kg。按畦寬1.2m～1.5m，溝寬30cm～35cm，溝深25cm～35cm，4.2.2.2繁殖方式4.2.2.2.1生產(chǎn)用苗的繁殖可以采用扦插繁殖或壓條繁殖。持75%～90%，等莖段基部發(fā)出根，掀5分級與質(zhì)量要求5.1脫毒苗按繁育過程可分為脫毒組培瓶苗、脫毒原5.2脫毒組培瓶苗按質(zhì)量要求分為優(yōu)質(zhì)苗和合格苗。5.3脫毒組培瓶苗、脫毒種苗的質(zhì)量等級指標、檢驗方法、檢驗規(guī)則參見附錄A。5組培瓶苗常溫弱光照條件下可以貯存7d～10d，脫毒種苗出圃6脫毒組培瓶苗、脫毒種苗的質(zhì)量要求、檢驗方法、檢驗規(guī)則A.1質(zhì)量要求A.1.1脫毒組培瓶苗質(zhì)量等級指標A.1.2脫毒種苗質(zhì)量等級指標A.2檢驗方法A.3檢驗規(guī)則A.3.1組批規(guī)則A.3.2檢驗分類7A.3.2.2型式檢驗A.4判定原則8煙草花葉病毒（Tobaccomosaicvirus，TMV）、黃瓜花葉病毒（Cucumbermosaicvirus，CMV）和馬鈴薯Y病毒（PotatovirusY，PVY）。B.2.1雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附(DAS-EL檢測方法按NY/T401-2000中附錄菊花B病毒是單分體線形正義ssRNA病毒。取各編號植株的葉片，提取總RNA，利用寡聚胸腺嘧啶T-ACCGAATTCTTAGTCACAATGCC質(zhì)粒，陽性重組質(zhì)粒測序，序列與CVB一致的啶T引物oligo-dT將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用番茄不孕病毒的特異引物（上游引物5’95’-ACGTCCAAAATGAGAATGCC-3’和下游引物電鏡檢測法主要用于檢測菊花B病毒、番茄不孕病毒、煙病葉組織超薄切片法觀察：將病葉片切成1mm2～2mm2小塊，用2.5狀，直徑約為18nm，長度為300nm～310nm，主要分布在感病植株細胞質(zhì)及液屬于馬鈴薯Y病毒科（Potyviridae）、馬鈴薯Y病毒屬（Potyvirus為彎曲線狀病毒顆粒，直徑11nm～13nm，長度為680nm～900nm，分布在感病植株的HH編號選擇品種特性純豐產(chǎn)性能好、無采樣最佳時間為10月～11月晴天的10:00~長點的2cm～3莖段經(jīng)無菌水清洗后置于70%～75%的乙醇沖洗表面1min后，經(jīng)次氯酸鹽和Tween-20消毒8min～10無菌水沖洗5次～8次，用無菌濾紙吸干水分，剝?nèi)?.3mm～0.5mm的莖尖分無菌植株培養(yǎng)至1.5cm～2.0種于莖尖培養(yǎng)種于生根培養(yǎng)經(jīng)病毒檢測合格的cm～8cm時，切取含有1個～2個節(jié)間的莖段進行擴繁。接種到增殖培養(yǎng)基中，每20d～30d定植方