實(shí)驗(yàn)02酵母菌的純培養(yǎng)_第1頁(yè)
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實(shí)驗(yàn)02酵母菌的純培養(yǎng)配制培養(yǎng)基:稱去皮馬鈴薯200g、切塊加水1000ml,加熱煮沸紗布過濾加20g葡萄糖加20g瓊脂用蒸餾水定容至1000ml滅菌滅菌培養(yǎng)基:高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)皿滅菌:干熱滅菌法倒平板條件:50℃左右(酒精燈旁)操作步驟接種和分離:平板劃線法培養(yǎng)酵母菌方法:將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置放到恒溫箱中培養(yǎng)。條件:28℃左右。一、平板劃線法注意問題:1、在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)的原因:劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免污染環(huán)境和感染操作者。2、在第二次以及其后的劃線操作時(shí),從上一次劃線的末端開始劃線的原因:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。3、接種結(jié)束后,要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基一起培養(yǎng)原因:培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對(duì)照,未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過培養(yǎng)后無菌落生長(zhǎng),說明培養(yǎng)基的制備是成功的;4、未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長(zhǎng),說明:培養(yǎng)基滅菌不徹底,或培養(yǎng)基被污染了,需要重新制備。二、無菌技術(shù)的三個(gè)主要注意點(diǎn)①實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)操作空間、操作人員進(jìn)行消毒,對(duì)所用器具和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。②實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作。③避免已殺菌處理的材料再次污染。三、倒平板時(shí)的注意事項(xiàng)①瓊脂是一種多糖,在98℃以上熔化,在44℃以下凝固。倒平板時(shí)高于50℃則會(huì)燙手,低于50℃時(shí)若不及時(shí)操作,瓊脂會(huì)凝固。②可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。1.(2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題)下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是()A.通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B.通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快,菌落比酵母菌落大C.通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌,酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定,也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定【答案】A【分析】培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成:各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽,此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。滅菌常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等。【詳解】A、細(xì)菌是原核生物,酵母菌是真核生物,不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣,通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比,A正確;B、通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快,但形成的菌落,不一定細(xì)菌的大于酵母菌的,與細(xì)菌的種類有關(guān),部分細(xì)菌的菌落小于酵母菌,B錯(cuò)誤;C、通常細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌,C錯(cuò)誤;D、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板適用于真菌的計(jì)數(shù),細(xì)菌計(jì)數(shù)板用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定等,D錯(cuò)誤。故選A。2.(2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題)細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度(菌落數(shù)/m3)。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無菌處理B.細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置C.同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值D.稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高【答案】D【分析】稀釋涂布平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落,即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法,即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí),首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液,盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開,使成單個(gè)細(xì)胞存在(否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞),再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中,使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后,由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落,統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目,即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)?!驹斀狻緼、為防止雜菌感染,接種前需要對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進(jìn)行滅菌,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒,A正確;B、純化培養(yǎng)時(shí),為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā),培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),B正確;C、微生物計(jì)數(shù)時(shí)在同一稀釋度下,應(yīng)至少需要對(duì)3個(gè)菌落數(shù)目在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性,C正確;D、使用稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù),數(shù)值往往偏小,原因是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),在平板上只能觀察到一個(gè)菌落,D錯(cuò)誤。故選D。3.(2023·山東·高考真題)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是(

)A.不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B.平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C.接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D.利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì),是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、按照培養(yǎng)基的用途,可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。3、消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念,消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物的方法殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子?!驹斀狻緼、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng),A錯(cuò)誤;B、平板涂布時(shí)涂布器使用前必須浸在酒精中,然后在火焰上灼燒滅菌,這種操作屬于滅菌,不屬于消毒,B錯(cuò)誤;C、使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理,不能直接丟棄,以免污染環(huán)境,C錯(cuò)誤;D、脲酶可以催化尿素分解,在以尿素為唯一氮源的平板上,能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖,但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無法生長(zhǎng),因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物,D正確。故選D。4.(2023·廣東·統(tǒng)考高考真題)研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(如圖)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷,下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是(

)A.a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B.b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C.b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D.c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【分析】篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌,要用角蛋白氮源培養(yǎng)基。【詳解】研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌,因此既要耐高溫,又要能夠高效降解角蛋白,所以在c點(diǎn)取樣,并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng),所以D正確,ABC錯(cuò)誤。故選D。5.(2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題)為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時(shí)出現(xiàn)微生物污染風(fēng)險(xiǎn),需要對(duì)航天器及潔凈的組裝車間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)。下列敘述錯(cuò)誤的是(

)A.航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物B.細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕C.在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品D.采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物,觀察菌落特征【答案】D【分析】微生物常見的接種的方法:①平板劃線法:將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板,接種,劃線,在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分,微生物往往連在一起生長(zhǎng),隨著線的延伸,菌數(shù)逐漸減少,最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后,均勻涂布在培養(yǎng)皿表面,經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。【詳解】A、嗜極微生物適應(yīng)極端環(huán)境的特性使它們有在空間暴露環(huán)境或地外星球環(huán)境中存活的可能,因此航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物,A正確;B、細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕,會(huì)腐蝕艙內(nèi)材料以及設(shè)備線路、元器件,B正確;C、對(duì)航天器及潔凈的組裝車間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè),需要在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品,C正確;D、航天器及潔凈的組裝車間環(huán)境微生物很少,分離培養(yǎng)微生物,觀察菌落特征,不需要采用平板劃線法,D錯(cuò)誤。6.(2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題)下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),不合理的是(

)A.選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B.在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C.適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D.可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【分析】為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源,含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng),其它微生物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長(zhǎng),可用于分離含脲酶的微生物?!驹斀狻緼、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物,A正確;B、為了篩選可分解尿素的細(xì)菌,配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源,含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng),B正確;C、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌,C正確;D、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中,細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨,氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高,酚紅指示劑將變紅,因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,能對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定,D錯(cuò)誤。故選D。7.(2021·北京·統(tǒng)考高考真題)人體皮膚表面存在著多種微生物,某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是()A.對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B.使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C.用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D.觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷【答案】C【分析】實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法的比較:1、消毒:煮沸消毒法(一般物品)、巴氏消毒法(一些不耐高溫的液體,如牛奶)、化學(xué)藥劑消毒法(如用酒精擦拭雙手,用氯氣消毒水源等)、紫外線消毒法(接種室、操作臺(tái));2、滅菌:灼燒滅菌(接種工具)、干熱滅菌(玻璃器皿、金屬用具)、高壓蒸汽滅菌(培養(yǎng)基及容器)?!驹斀狻緼、為避免雜菌污染干擾,需對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,A正確;B、葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離,為避免雜菌污染,故需要使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣,B正確;C、用取樣后的棉拭子浸出液在固體培養(yǎng)基上涂布,C錯(cuò)誤;D、根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別,D正確。故選C。8.(2021·山東·統(tǒng)考高考真題)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲,乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色,乙菌菌落周圍不變色,下列說法錯(cuò)誤的是(

)A.甲菌屬于解脂菌B.實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C.可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比D.該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力【答案】B【分析】選擇培養(yǎng)基:根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌,從而提高該菌的篩選率。鑒別培養(yǎng)基:依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng),產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)。【詳解】A、根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”,說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸,脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色,因此甲菌屬于解脂菌,A正確;B、乙菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色,說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶,不能利用脂肪為其供能,但乙菌落也可以在培養(yǎng)基上生存,說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源,B錯(cuò)誤;C、可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比,更加直觀,C正確;D、可以利用該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力,觀察指標(biāo)可以以菌落周圍深藍(lán)色圈的大小,D正確。故選B。9.(2021·山東·統(tǒng)考高考真題)含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力,用穿刺接種的方法,分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等,下列說法錯(cuò)誤的是(

)A.乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)B.為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基C.該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D.穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染【答案】B【分析】圖中是穿刺接種的方法,根據(jù)題干中的信息“硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀”,所以根據(jù)黑色沉淀的多少,比較兩種菌產(chǎn)生硫化氫的能力?!驹斀狻緼、從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌,說明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng),A正確;B、為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基,B錯(cuò)誤;C、根據(jù)題意,黑色區(qū)域的面積大小反映兩種菌運(yùn)動(dòng)能力的大小,而不能表示二者產(chǎn)生硫化氫的能力大小,C正確;D、微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染,D正確。10.(2021·廣東·統(tǒng)考高考真題)中國(guó)科學(xué)家運(yùn)用合成生物學(xué)方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H,以糖蜜(甘蔗榨糖后的廢棄液,含較多蔗糖)為原料,在實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料,期望提高甘蔗的整體利用價(jià)值。工藝流程如圖。回答下列問題:(1)為提高菌株H對(duì)蔗糖的耐受能力和利用效率,可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為,并不斷提高其濃度,經(jīng)多次傳代培養(yǎng)(指培養(yǎng)一段時(shí)間后,將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng))以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用的方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),評(píng)估菌株增殖狀況。此外,選育優(yōu)良菌株的方法還有等。(答出兩種方法即可)(2)基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性,研究人員設(shè)計(jì)了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng),其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L,pH為10,菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是。(答出兩點(diǎn)即可)(3)研究人員在工廠進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),在適宜的營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵,結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期,并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì),說明發(fā)酵條件中可能是高密度培養(yǎng)的限制因素。(4)菌株H還能通過分解餐廚垃圾(主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等)來生產(chǎn)PHA,說明其能分泌?!敬鸢浮课ㄒ惶荚聪♂屚坎颊T變育種、基因工程育種鹽濃度為60g/L的條件下,其他雜菌因失水過多而死亡;pH為10的條件下,其他雜菌的酶變性失活,生長(zhǎng)繁殖受抑制氧氣(O2或溶解氧)蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等【分析】微生物的篩選和計(jì)數(shù)方法:(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理實(shí)驗(yàn)室篩選:人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件(包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等),同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。(2)微生物常見的接種方法:稀釋涂布平板法、平板劃線法。(3)測(cè)定微生物數(shù)量的方法:①直接計(jì)數(shù)法:常用顯微鏡直接技術(shù)法,一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)。②間接計(jì)數(shù)法:常用稀釋平板計(jì)數(shù)法,平板培養(yǎng)基上長(zhǎng)出一個(gè)菌落就代表原待測(cè)樣品中一個(gè)微生物個(gè)體。【詳解】(1)根據(jù)題意分析,該實(shí)驗(yàn)的目的是提高菌株H對(duì)蔗糖的耐受能力和利用效率,結(jié)合微生物的代謝需求,其液體培養(yǎng)基應(yīng)該以蔗糖作為唯一碳源。并不斷提高其濃度,經(jīng)多次傳代培養(yǎng)(指培養(yǎng)一段時(shí)間后,將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng))以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用稀釋涂布的方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù),評(píng)估菌株增殖狀況。此外,選育優(yōu)良菌株的方法還有誘變育種、基因工程育種等。(2)已知,菌株H具有嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性,因此當(dāng)培養(yǎng)基鹽濃度為60g/L,pH為10時(shí),菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上,而鹽濃度為60g/L的條件下,其他雜菌因失水過多而死亡;pH為10的條件下,其他雜菌的酶變性失活,生長(zhǎng)繁殖受抑制,故該系統(tǒng)不需要滅菌。(3)分析題意,擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí),營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、pH等條件下適宜,而發(fā)酵液中菌株H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期,并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì),說明發(fā)酵條件中氧氣不足,使菌種進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乙醇,即氧氣(O2或溶解氧)是限制高密度培養(yǎng)的重要因素。(4)根據(jù)酶的專一性可知,菌株H之所以能通過分解主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等的餐廚垃圾來生產(chǎn)PHA,說明其能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。1.金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物,其具有耐高鹽的特性,在環(huán)境中分布廣泛。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)A.可從食物和人的糞便中分離得到金黃色葡萄球菌B.培養(yǎng)過金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基要滅菌后才能丟棄C.分離樣品中的金黃色葡萄球菌時(shí),用高鹽液體培養(yǎng)基培養(yǎng)不能增加該菌的濃度D.在固體選擇培養(yǎng)基上采用平板劃線法接種,可獲得金黃色葡萄球菌的純培養(yǎng)物【答案】C【分析】培養(yǎng)基(1)概念:人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求,配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)組成:一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。此外,還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。(3)種類:①按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。②按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等?!驹斀狻緼、金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物,因此可從食物和人的糞便中分離得到金黃色葡萄球菌,A正確;B、使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄,B正確;C、金黃色葡萄球菌可在鹽濃度接近8%的環(huán)境中生長(zhǎng),具有耐高鹽的特性,因此分離樣品中的金黃色葡萄球菌時(shí),用高鹽液體培養(yǎng)基培養(yǎng)可以增加該菌的濃度,C錯(cuò)誤;D、對(duì)微生物進(jìn)行分離、純化可用平板劃線法或稀釋涂布法,因此,在固體選擇培養(yǎng)基上采用平板劃線法接種,可獲得金黃色葡萄球菌的純培養(yǎng)物,D正確。故選C。2.下列關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)操作的敘述正確的是(

)A.對(duì)酵母菌細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),通常使用細(xì)菌計(jì)數(shù)板B.平板劃線時(shí),只有在最后一個(gè)劃線區(qū)域才可得到所需單菌落C.在統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)時(shí),需對(duì)每個(gè)稀釋度進(jìn)行涂布培養(yǎng)并計(jì)數(shù)D.在平板上劃線和涂布時(shí),均需避免弄破培養(yǎng)基表面【答案】D【分析】統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理:利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量;②方法:用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù);③缺點(diǎn):不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)①原理:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。【詳解】A、酵母菌屬于真菌,對(duì)酵母菌細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí),通常使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板,A錯(cuò)誤;B、平板劃線時(shí),一般在最后一個(gè)劃線區(qū)域可得到所需單菌落,B錯(cuò)誤;C、在統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)時(shí),并不需對(duì)每個(gè)稀釋度進(jìn)行涂布培養(yǎng)并計(jì)數(shù),較為理想的計(jì)數(shù)平板在涂布培養(yǎng)后菌落數(shù)應(yīng)在30300之間,要得到這樣的適合計(jì)數(shù)的平板,C錯(cuò)誤;D、在平板上劃線和涂布時(shí),均需避免弄破培養(yǎng)基表面,否則會(huì)導(dǎo)致不能形成正常菌落,D正確。3.酵母菌的品質(zhì)影響葡萄酒的產(chǎn)量和質(zhì)量,研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌菌株,進(jìn)行了如圖Ⅰ所示實(shí)驗(yàn),甲、乙、丙、丁錐形瓶?jī)?nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基。下列說法正確的是(

)A.傳統(tǒng)葡萄酒發(fā)酵時(shí),將葡萄沖洗去梗后榨汁裝滿消毒后的玻璃瓶B.對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,需在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下C.用稀釋涂布平板法計(jì)算出葡萄酒過濾液的活菌數(shù)為6.8×106個(gè)/L,此數(shù)值可能低于實(shí)際的活菌數(shù)D.由圖Ⅱ可知,丙瓶出現(xiàn)的原因可能是培養(yǎng)瓶密封不嚴(yán),丁組酵母菌產(chǎn)酒精能力比乙弱【答案】B【分析】實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法:①灼燒滅菌:將微生物的接種工具,如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具,直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒,可以迅速?gòu)氐椎販缇?,此外,在接種過程中,試管口或瓶口等容易被污染的部位,也可以通過火焰燃燒來滅菌。②干熱滅菌:能耐高溫的,需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)和金屬用具等,可以采用這種方法滅菌。③高壓蒸汽滅菌:將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),為達(dá)到良好的滅菌效果,一般在壓力為100kPa,溫度為121℃的條件下,維持15~30min?!驹斀狻緼、傳統(tǒng)葡萄酒發(fā)酵時(shí),將葡萄沖洗去梗后榨汁裝到消毒后的玻璃瓶,留1/3的空間,A錯(cuò)誤;B、培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基都可以用高壓蒸滅菌法進(jìn)行滅菌,在壓力100kpa,溫度121℃條件下1530min后,讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降,當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí),打開排氣閥,B正確;C、若對(duì)菌液計(jì)數(shù),需選取菌落數(shù)處于30~300的培養(yǎng)皿計(jì)數(shù)據(jù)圖可知,該培養(yǎng)基的菌落數(shù)為(62+68+74)÷3÷0.1mL×104(稀釋倍數(shù))×103=6.8×109個(gè)/L,由于計(jì)數(shù)過程中兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞連在一起,平板上生長(zhǎng)出一個(gè)菌落,所以數(shù)目偏小,C錯(cuò)誤;D、甲接種無菌水,瓶中無菌,說明培養(yǎng)基滅菌徹底,無菌操作正常,丁組的活菌數(shù)比乙組少,但是產(chǎn)生的酒精和乙組一樣多,所以丁組產(chǎn)生酒精能力比乙強(qiáng),D錯(cuò)誤。故選B。4.下圖為不同稀釋度的酵母菌培養(yǎng)液涂布后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖,下列敘述正確的是(

)A.實(shí)驗(yàn)中使用接種環(huán)完成上述涂布過程B.涂布時(shí)避免涂布到瓊脂邊緣,因?yàn)檠刂傊吘売?jì)數(shù)菌落更加困難C.酵母菌擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要使用液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)D.計(jì)數(shù)105稀釋度下培養(yǎng)皿的菌落數(shù),可以計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液的酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)【答案】B【分析】微生物常見的接種的方法:①平板劃線法:將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板,接種,劃線,在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分,微生物往往連在一起生長(zhǎng),隨著線的延伸,菌數(shù)逐漸減少,最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后,均勻涂布在培養(yǎng)基表面,經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?!驹斀狻緼、由圖可知,培養(yǎng)基上菌落分布均勻,使用的接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法,故應(yīng)用涂布器完成上述涂布過程,A錯(cuò)誤;B、由于菌落生長(zhǎng)在邊緣時(shí),且易連成片,不容易計(jì)數(shù),故涂布時(shí)避免涂布到瓊脂邊緣,B正確;C、酵母菌在氧氣充足的條件下大量增殖,酵母菌擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要使用液體培養(yǎng)基需震蕩培養(yǎng),增大培養(yǎng)液中氧氣的含量,C錯(cuò)誤;D、符合計(jì)數(shù)的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)在30300之間,105稀釋度下培養(yǎng)皿的菌落數(shù)很少,故不可用于計(jì)算每毫升培養(yǎng)液的酵母細(xì)胞個(gè)數(shù),D錯(cuò)誤。故選B。5.某學(xué)習(xí)小組采用如下培養(yǎng)基進(jìn)行酵母菌的純化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(

)組分馬鈴薯濾液葡萄糖瓊脂水含量200g20g15g定容至1000mLA.該培養(yǎng)基是以葡萄糖為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基B.裝有培養(yǎng)基的錐形瓶、培養(yǎng)皿等應(yīng)進(jìn)行干熱滅菌C.將接種后的平板置于28℃左右的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)D.若同時(shí)計(jì)數(shù)酵母菌數(shù)量,應(yīng)采用稀釋涂布平板法接種【答案】ABC【分析】酵母菌的純化培養(yǎng)的步驟是配制培養(yǎng)基、滅菌、倒平板、接種、分離和培養(yǎng)【詳解】A、葡萄糖不是酵母菌生長(zhǎng)繁殖的唯一碳源,馬鈴薯濾液也能為酵母菌提供碳源、氮源和無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分,A錯(cuò)誤;B、裝有培養(yǎng)基的錐形瓶、培養(yǎng)皿不能進(jìn)行干熱滅菌,可進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,B錯(cuò)誤;C、平板不適宜在搖床上振蕩培養(yǎng),C錯(cuò)誤;D、稀釋涂布平板法可對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)和分離,D正確。故選ABC。6.產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株,科研人員開展了相關(guān)研究如圖,據(jù)圖回答下列問題:(1)圖中I號(hào)培養(yǎng)基稱為培養(yǎng)基(按功能分);③過程所用的接種方法統(tǒng)計(jì)數(shù)目會(huì)比活菌實(shí)際數(shù)目少,原因是。(2)該培養(yǎng)基中加入的脂肪可以為目的菌提供。(3)在培養(yǎng)基的配制過程中,操作方法包括以下步驟,其正確順序?yàn)?。①溶化②調(diào)整pH③培養(yǎng)基的分裝④稱量⑤滅菌⑥倒平板(4)可用于判斷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落種類的依據(jù)是菌落的(至少寫出兩點(diǎn))(5)在處理含油廢水的同時(shí),可獲得蛋白質(zhì),實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能,進(jìn)行了培養(yǎng)研究,結(jié)果如下圖,據(jù)圖分析,應(yīng)選擇菌株進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究,理由是。(6)根據(jù)下圖結(jié)果,計(jì)算每克土壤樣品約含細(xì)菌個(gè)。【答案】(1)選擇當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí),培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的是一個(gè)菌落(2)碳源、能源(3)④①②③⑤⑥(4)形態(tài)特征、顏色、隆起程度、分布狀況等(5)B與菌株A比較,B菌株增殖速度快,蛋白產(chǎn)量高,降解脂肪能力強(qiáng),凈化效果好(6)1.7×109【分析】微生物常見的接種的方法:①平板劃線法:將已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板,接種,劃線,在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的過程中,隨著線的延伸,微生物的數(shù)逐漸減少,最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法:將待分離的菌液經(jīng)過適宜倍數(shù)稀釋后,均勻涂布在培養(yǎng)基表面,經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?!驹斀狻浚?)培養(yǎng)基按功能主要分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基,其中選擇培養(yǎng)基指的是在微生物學(xué)中,將允許特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻止其它種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。圖中I號(hào)培養(yǎng)基加入適量的脂肪用于篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株,因此屬于選擇培養(yǎng)基。通過稀釋涂布平板法測(cè)得的菌落數(shù)值往往比活菌的實(shí)際數(shù)值偏小,這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌落連在一起時(shí),觀察計(jì)數(shù)只能計(jì)為一個(gè)菌落。(2)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),而脂肪是有機(jī)物,該培養(yǎng)基中加入的脂肪可以為目的菌提供碳源、能源。(3)培養(yǎng)基的配制過程中正確的操作步驟是稱量、溶化、調(diào)整pH、培養(yǎng)基的分裝、滅菌最后倒平板,其正確順序?yàn)棰堍佗冖邰茛蕖#?)不同微生物形成的菌落形態(tài)、顏色、隆起程度、分布狀況等特征不相同,因此可以用于判斷菌落種類。(5)由曲線圖分析可知,相同時(shí)間內(nèi),菌株B的細(xì)胞密度高于菌株A,而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量,故進(jìn)行相關(guān)研究可選擇菌株B,原因是菌株B增殖速度快,同時(shí)降解脂肪的能力強(qiáng),凈化效果更好。(6)稱取10g某土壤樣品,用無菌水定容到100mL,再按圖所示進(jìn)行梯度稀釋,最終分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上,培養(yǎng)后平均酵母菌落目為(168+175+167)÷3=170,相當(dāng)于稀釋了106倍,故該樣本中每克土壤約含酵母菌(170÷0.1)×106=1.7×109個(gè)/g。7.酵母菌作為白酒發(fā)酵生產(chǎn)中的主酵菌群,通常在整個(gè)發(fā)酵過程中的前期,對(duì)發(fā)酵原料的轉(zhuǎn)化利用能力及乙醇的生產(chǎn)能力較強(qiáng),但隨著發(fā)酵過程的進(jìn)行,在窖池酸度下降至pH≤4.5后,酵母菌的生理代謝活動(dòng)逐漸受到抑制,對(duì)發(fā)酵原料的轉(zhuǎn)化利用能力及乙醇的發(fā)酵生產(chǎn)能力也逐漸下降,甚至停止。酒用耐酸性酵母菌的篩選及應(yīng)用,將改善傳統(tǒng)的白酒生產(chǎn)工藝,促進(jìn)白酒生產(chǎn)的產(chǎn)量與產(chǎn)值的提高,將產(chǎn)生較大的經(jīng)濟(jì)效益。現(xiàn)開展對(duì)五糧液酒廠耐酸性釀酒酵母菌的分離與篩選。請(qǐng)回答下列問題:(1)從窖池底泥,黃漿水(窖底部的水,呈黃色,含有豐富的有機(jī)酸)中尋找耐酸酵母菌的原因是。(2)過程②需充分振蕩的主要目的是。過程②所用培養(yǎng)基為酵母菌提供了營(yíng)養(yǎng)。(3)過程③所用接種工具是,劃線順序是。釀酒酵母不能采用賴氨酸作為酵母氮源,因而在賴氨酸培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。將④中菌株經(jīng)饑餓處理后接種到賴氨酸培養(yǎng)基,直到15d后仍無菌落生長(zhǎng),說明④中的菌種是。(4)對(duì)麥芽汁培養(yǎng)48h的酵母菌株,以16×40倍的顯微鏡鏡檢,篩選出菌體上多端出芽菌株,目的是?!敬鸢浮?1)尋找目的菌株時(shí),要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找(或酵母菌生長(zhǎng)繁殖時(shí),將產(chǎn)生一定量的自發(fā)突變,一旦“耐酸突變”發(fā)生,耐酸突變個(gè)體因自然選擇存活于窖底泥、黃漿水等低pH環(huán)境中)(2)使菌體與培養(yǎng)液充分接觸;增大培養(yǎng)液的溶氧量水、無機(jī)鹽、碳源、氮源(3)接種環(huán)aedcb(或bcdea)釀酒酵母(4)得到繁殖能力強(qiáng)的酵母菌【分析】葡萄酒與白酒制作的原理是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳,酵母菌是兼性厭氧微生物,在缺氧條件下進(jìn)行無氧呼吸,在氧氣充足的條件下進(jìn)行有氧呼吸,酵母菌具有核膜包被的細(xì)胞核,屬于真核生物,適宜酵母菌生長(zhǎng)的溫度范圍是18~25℃?!驹斀狻浚?)尋找目的菌株時(shí),要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求,到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找,這樣才更容易成功。因此從窖池底泥,黃漿水(窖底部的水,呈黃色,含有豐富的有機(jī)酸)去尋找耐酸酵母菌。(2)充分振蕩可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸、增大培養(yǎng)液的溶氧量,有利于酵母菌的繁殖。過程②的液體培養(yǎng)基的成分適合酵母菌的生存繁殖,因此為其提供了水、無機(jī)鹽、碳源、氮源。(3)過程③采用的是平板劃線法,因此接種工具是接種環(huán)。每次劃線都要從上次劃線的末端開始,因此推測(cè)劃線的順序是:aedcb(或bcdea)。釀酒酵母不能采用賴氨酸作為酵母氮源,因而在賴氨酸培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。將④中菌株經(jīng)饑餓處理后接種到賴氨酸培養(yǎng)基,直到15d后仍無菌落生長(zhǎng),說明④中的菌種無法利用賴氨酸,那該菌種為釀酒酵母。(4)菌體上多端出芽菌株,這樣的菌

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