實(shí)驗(yàn)02酵母菌的純培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)02酵母菌的純培養(yǎng)配制培養(yǎng)基：稱去皮馬鈴薯200g、切塊加水1000ml，加熱煮沸紗布過濾加20g葡萄糖加20g瓊脂用蒸餾水定容至1000ml滅菌滅菌培養(yǎng)基：高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)皿滅菌：干熱滅菌法倒平板條件：50℃左右（酒精燈旁）操作步驟接種和分離：平板劃線法培養(yǎng)酵母菌方法：將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置放到恒溫箱中培養(yǎng)。條件：28℃左右。一、平板劃線法注意問題：1、在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)的原因：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。2、在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，從上一次劃線的末端開始劃線的原因：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。3、接種結(jié)束后，要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基一起培養(yǎng)原因：培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過培養(yǎng)后無菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基的制備是成功的；4、未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長(zhǎng)，說明：培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。二、無菌技術(shù)的三個(gè)主要注意點(diǎn)①實(shí)驗(yàn)前應(yīng)對(duì)操作空間、操作人員進(jìn)行消毒，對(duì)所用器具和培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。②實(shí)驗(yàn)進(jìn)行時(shí)需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作。③避免已殺菌處理的材料再次污染。三、倒平板時(shí)的注意事項(xiàng)①瓊脂是一種多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。倒平板時(shí)高于50℃則會(huì)燙手，低于50℃時(shí)若不及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。②可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。1．（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于細(xì)菌和酵母菌實(shí)驗(yàn)的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細(xì)菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細(xì)胞計(jì)數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測(cè)定，也可用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定【答案】A【分析】培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽，此外還要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。滅菌常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學(xué)藥物消毒法等。【詳解】A、細(xì)菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣，通常酵母菌培養(yǎng)基比細(xì)菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比，A正確；B、通常細(xì)菌的生長(zhǎng)速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定細(xì)菌的大于酵母菌的，與細(xì)菌的種類有關(guān)，部分細(xì)菌的菌落小于酵母菌，B錯(cuò)誤；C、通常細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯(cuò)誤；D、血細(xì)胞計(jì)數(shù)板適用于真菌的計(jì)數(shù)，細(xì)菌計(jì)數(shù)板用于細(xì)菌的數(shù)量測(cè)定等，D錯(cuò)誤。故選A。2．（2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細(xì)菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細(xì)菌形成的。利用空氣微生物采樣器對(duì)某市人員密集型公共場(chǎng)所采樣并檢測(cè)細(xì)菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．采樣前需對(duì)空氣微生物采樣器進(jìn)行無菌處理B．細(xì)菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時(shí)需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對(duì)3個(gè)平板計(jì)數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測(cè)的細(xì)菌氣溶膠濃度比實(shí)際值高【答案】D【分析】稀釋涂布平板計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個(gè)菌落，即是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計(jì)的計(jì)數(shù)方法，即一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。計(jì)數(shù)時(shí)，首先將待測(cè)樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個(gè)細(xì)胞存在（否則一個(gè)菌落就不只是代表一個(gè)細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可計(jì)算出樣品中的含菌數(shù)?！驹斀狻緼、為防止雜菌感染，接種前需要對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進(jìn)行滅菌，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手進(jìn)行消毒，A正確；B、純化培養(yǎng)時(shí)，為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；C、微生物計(jì)數(shù)時(shí)在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對(duì)3個(gè)菌落數(shù)目在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，C正確；D、使用稀釋涂布平板法對(duì)微生物計(jì)數(shù)，數(shù)值往往偏小，原因是兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，在平板上只能觀察到一個(gè)菌落，D錯(cuò)誤。故選D。3．（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。3、消毒和滅菌是兩個(gè)不同的概念，消毒是指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物的方法殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子?！驹斀狻緼、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；B、平板涂布時(shí)涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯(cuò)誤；C、使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無法生長(zhǎng)，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。故選D。4．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是（

）A．a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【分析】篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，要用角蛋白氮源培養(yǎng)基。【詳解】研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以在c點(diǎn)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，所以D正確，ABC錯(cuò)誤。故選D。5．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時(shí)出現(xiàn)微生物污染風(fēng)險(xiǎn)，需要對(duì)航天器及潔凈的組裝車間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物B．細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕C．在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品D．采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征【答案】D【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落。【詳解】A、嗜極微生物適應(yīng)極端環(huán)境的特性使它們有在空間暴露環(huán)境或地外星球環(huán)境中存活的可能，因此航天器上存在適應(yīng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物，A正確；B、細(xì)菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕，會(huì)腐蝕艙內(nèi)材料以及設(shè)備線路、元器件，B正確；C、對(duì)航天器及潔凈的組裝車間進(jìn)行環(huán)境微生物檢測(cè)，需要在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品，C正確；D、航天器及潔凈的組裝車間環(huán)境微生物很少，分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征，不需要采用平板劃線法，D錯(cuò)誤。6．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【分析】為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，其它微生物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長(zhǎng)，可用于分離含脲酶的微生物?！驹斀狻緼、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，B正確；C、當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，C正確；D、在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯(cuò)誤。故選D。7．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學(xué)擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是（）A．對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌B．使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C．用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D．觀察菌落的形態(tài)和顏色等進(jìn)行初步判斷【答案】C【分析】實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法的比較：1、消毒：煮沸消毒法（一般物品）、巴氏消毒法（一些不耐高溫的液體，如牛奶）、化學(xué)藥劑消毒法（如用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源等）、紫外線消毒法（接種室、操作臺(tái)）；2、滅菌：灼燒滅菌（接種工具）、干熱滅菌（玻璃器皿、金屬用具）、高壓蒸汽滅菌（培養(yǎng)基及容器）?！驹斀狻緼、為避免雜菌污染干擾，需對(duì)配制的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A正確；B、葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離，為避免雜菌污染，故需要使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣，B正確；C、用取樣后的棉拭子浸出液在固體培養(yǎng)基上涂布，C錯(cuò)誤；D、根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進(jìn)行鑒別，D正確。故選C。8．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲，乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．甲菌屬于解脂菌B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力【答案】B【分析】選擇培養(yǎng)基：根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選率。鑒別培養(yǎng)基：依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)。【詳解】A、根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍(lán)色”，說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色，因此甲菌屬于解脂菌，A正確；B、乙菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍(lán)色，說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌落也可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯(cuò)誤；C、可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比，更加直觀，C正確；D、可以利用該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標(biāo)可以以菌落周圍深藍(lán)色圈的大小，D正確。故選B。9．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說法錯(cuò)誤的是（

）A．乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)B．為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基C．該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染【答案】B【分析】圖中是穿刺接種的方法，根據(jù)題干中的信息“硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀”，所以根據(jù)黑色沉淀的多少，比較兩種菌產(chǎn)生硫化氫的能力?！驹斀狻緼、從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；B、為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；C、根據(jù)題意，黑色區(qū)域的面積大小反映兩種菌運(yùn)動(dòng)能力的大小，而不能表示二者產(chǎn)生硫化氫的能力大小，C正確；D、微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。10．（2021·廣東·統(tǒng)考高考真題）中國(guó)科學(xué)家運(yùn)用合成生物學(xué)方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整體利用價(jià)值。工藝流程如圖。回答下列問題：（1）為提高菌株H對(duì)蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為，并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時(shí)間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用的方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，評(píng)估菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良菌株的方法還有等。（答出兩種方法即可）（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性，研究人員設(shè)計(jì)了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是。（答出兩點(diǎn)即可）（3）研究人員在工廠進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，在適宜的營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中可能是高密度培養(yǎng)的限制因素。（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA，說明其能分泌?！敬鸢浮课ㄒ惶荚聪♂屚坎颊T變育種、基因工程育種鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長(zhǎng)繁殖受抑制氧氣（O2或溶解氧）蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等【分析】微生物的篩選和計(jì)數(shù)方法：（1）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選原理實(shí)驗(yàn)室篩選：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度、pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。（2）微生物常見的接種方法：稀釋涂布平板法、平板劃線法。（3）測(cè)定微生物數(shù)量的方法：①直接計(jì)數(shù)法：常用顯微鏡直接技術(shù)法，一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細(xì)胞菌體的計(jì)數(shù)。②間接計(jì)數(shù)法：常用稀釋平板計(jì)數(shù)法，平板培養(yǎng)基上長(zhǎng)出一個(gè)菌落就代表原待測(cè)樣品中一個(gè)微生物個(gè)體。【詳解】（1）根據(jù)題意分析，該實(shí)驗(yàn)的目的是提高菌株H對(duì)蔗糖的耐受能力和利用效率，結(jié)合微生物的代謝需求，其液體培養(yǎng)基應(yīng)該以蔗糖作為唯一碳源。并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時(shí)間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標(biāo)菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用稀釋涂布的方法進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)，評(píng)估菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良菌株的方法還有誘變育種、基因工程育種等。（2）已知，菌株H具有嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性，因此當(dāng)培養(yǎng)基鹽濃度為60g/L，pH為10時(shí)，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上，而鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長(zhǎng)繁殖受抑制，故該系統(tǒng)不需要滅菌。（3）分析題意，擴(kuò)大培養(yǎng)時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物濃度、溫度、pH等條件下適宜，而發(fā)酵液中菌株H細(xì)胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達(dá)到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中氧氣不足，使菌種進(jìn)行無氧呼吸產(chǎn)生乙醇，即氧氣（O2或溶解氧）是限制高密度培養(yǎng)的重要因素。（4）根據(jù)酶的專一性可知，菌株H之所以能通過分解主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等的餐廚垃圾來生產(chǎn)PHA，說明其能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。1．金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物，其具有耐高鹽的特性，在環(huán)境中分布廣泛。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．可從食物和人的糞便中分離得到金黃色葡萄球菌B．培養(yǎng)過金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基要滅菌后才能丟棄C．分離樣品中的金黃色葡萄球菌時(shí)，用高鹽液體培養(yǎng)基培養(yǎng)不能增加該菌的濃度D．在固體選擇培養(yǎng)基上采用平板劃線法接種，可獲得金黃色葡萄球菌的純培養(yǎng)物【答案】C【分析】培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。(2)營(yíng)養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。此外，還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。(3)種類：①按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。②按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等?！驹斀狻緼、金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物，因此可從食物和人的糞便中分離得到金黃色葡萄球菌，A正確；B、使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，B正確；C、金黃色葡萄球菌可在鹽濃度接近8％的環(huán)境中生長(zhǎng)，具有耐高鹽的特性，因此分離樣品中的金黃色葡萄球菌時(shí)，用高鹽液體培養(yǎng)基培養(yǎng)可以增加該菌的濃度，C錯(cuò)誤；D、對(duì)微生物進(jìn)行分離、純化可用平板劃線法或稀釋涂布法，因此，在固體選擇培養(yǎng)基上采用平板劃線法接種，可獲得金黃色葡萄球菌的純培養(yǎng)物，D正確。故選C。2．下列關(guān)于微生物實(shí)驗(yàn)操作的敘述正確的是（

）A．對(duì)酵母菌細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，通常使用細(xì)菌計(jì)數(shù)板B．平板劃線時(shí)，只有在最后一個(gè)劃線區(qū)域才可得到所需單菌落C．在統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)時(shí)，需對(duì)每個(gè)稀釋度進(jìn)行涂布培養(yǎng)并計(jì)數(shù)D．在平板上劃線和涂布時(shí)，均需避免弄破培養(yǎng)基表面【答案】D【分析】統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法（1）顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)；③缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計(jì)數(shù)法（活菌計(jì)數(shù)法）①原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。【詳解】A、酵母菌屬于真菌，對(duì)酵母菌細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)時(shí)，通常使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，A錯(cuò)誤；B、平板劃線時(shí)，一般在最后一個(gè)劃線區(qū)域可得到所需單菌落，B錯(cuò)誤；C、在統(tǒng)計(jì)樣品活菌數(shù)時(shí)，并不需對(duì)每個(gè)稀釋度進(jìn)行涂布培養(yǎng)并計(jì)數(shù)，較為理想的計(jì)數(shù)平板在涂布培養(yǎng)后菌落數(shù)應(yīng)在30300之間，要得到這樣的適合計(jì)數(shù)的平板，C錯(cuò)誤；D、在平板上劃線和涂布時(shí)，均需避免弄破培養(yǎng)基表面，否則會(huì)導(dǎo)致不能形成正常菌落，D正確。3．酵母菌的品質(zhì)影響葡萄酒的產(chǎn)量和質(zhì)量，研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強(qiáng)的酵母菌菌株，進(jìn)行了如圖Ⅰ所示實(shí)驗(yàn)，甲、乙、丙、丁錐形瓶?jī)?nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基。下列說法正確的是（

）A．傳統(tǒng)葡萄酒發(fā)酵時(shí)，將葡萄沖洗去梗后榨汁裝滿消毒后的玻璃瓶B．對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，需在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下C．用稀釋涂布平板法計(jì)算出葡萄酒過濾液的活菌數(shù)為6.8×106個(gè)/L，此數(shù)值可能低于實(shí)際的活菌數(shù)D．由圖Ⅱ可知，丙瓶出現(xiàn)的原因可能是培養(yǎng)瓶密封不嚴(yán)，丁組酵母菌產(chǎn)酒精能力比乙弱【答案】B【分析】實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法：①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速?gòu)氐椎販缇?，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達(dá)到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa,溫度為121℃的條件下，維持15～30min?！驹斀狻緼、傳統(tǒng)葡萄酒發(fā)酵時(shí)，將葡萄沖洗去梗后榨汁裝到消毒后的玻璃瓶，留1/3的空間，A錯(cuò)誤；B、培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基都可以用高壓蒸滅菌法進(jìn)行滅菌，在壓力100kpa，溫度121℃條件下1530min后，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當(dāng)壓力表的壓力降至0時(shí)，打開排氣閥，B正確；C、若對(duì)菌液計(jì)數(shù)，需選取菌落數(shù)處于30～300的培養(yǎng)皿計(jì)數(shù)據(jù)圖可知，該培養(yǎng)基的菌落數(shù)為（62+68+74）÷3÷0.1mL×104（稀釋倍數(shù)）×103=6.8×109個(gè)/L，由于計(jì)數(shù)過程中兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)胞連在一起，平板上生長(zhǎng)出一個(gè)菌落，所以數(shù)目偏小，C錯(cuò)誤；D、甲接種無菌水，瓶中無菌，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，無菌操作正常，丁組的活菌數(shù)比乙組少，但是產(chǎn)生的酒精和乙組一樣多，所以丁組產(chǎn)生酒精能力比乙強(qiáng)，D錯(cuò)誤。故選B。4．下圖為不同稀釋度的酵母菌培養(yǎng)液涂布后的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖，下列敘述正確的是（

）A．實(shí)驗(yàn)中使用接種環(huán)完成上述涂布過程B．涂布時(shí)避免涂布到瓊脂邊緣，因?yàn)檠刂傊吘売?jì)數(shù)菌落更加困難C．酵母菌擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要使用液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)D．計(jì)數(shù)105稀釋度下培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，可以計(jì)算出每毫升培養(yǎng)液的酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)【答案】B【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長(zhǎng)，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斀狻緼、由圖可知，培養(yǎng)基上菌落分布均勻，使用的接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，故應(yīng)用涂布器完成上述涂布過程，A錯(cuò)誤；B、由于菌落生長(zhǎng)在邊緣時(shí)，且易連成片，不容易計(jì)數(shù)，故涂布時(shí)避免涂布到瓊脂邊緣，B正確；C、酵母菌在氧氣充足的條件下大量增殖，酵母菌擴(kuò)大培養(yǎng)過程中需要使用液體培養(yǎng)基需震蕩培養(yǎng)，增大培養(yǎng)液中氧氣的含量，C錯(cuò)誤；D、符合計(jì)數(shù)的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)在30300之間，105稀釋度下培養(yǎng)皿的菌落數(shù)很少，故不可用于計(jì)算每毫升培養(yǎng)液的酵母細(xì)胞個(gè)數(shù)，D錯(cuò)誤。故選B。5．某學(xué)習(xí)小組采用如下培養(yǎng)基進(jìn)行酵母菌的純化培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）組分馬鈴薯濾液葡萄糖瓊脂水含量200g20g15g定容至1000mLA．該培養(yǎng)基是以葡萄糖為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基B．裝有培養(yǎng)基的錐形瓶、培養(yǎng)皿等應(yīng)進(jìn)行干熱滅菌C．將接種后的平板置于28℃左右的恒溫?fù)u床上振蕩培養(yǎng)D．若同時(shí)計(jì)數(shù)酵母菌數(shù)量，應(yīng)采用稀釋涂布平板法接種【答案】ABC【分析】酵母菌的純化培養(yǎng)的步驟是配制培養(yǎng)基、滅菌、倒平板、接種、分離和培養(yǎng)【詳解】A、葡萄糖不是酵母菌生長(zhǎng)繁殖的唯一碳源，馬鈴薯濾液也能為酵母菌提供碳源、氮源和無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分，A錯(cuò)誤；B、裝有培養(yǎng)基的錐形瓶、培養(yǎng)皿不能進(jìn)行干熱滅菌，可進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，B錯(cuò)誤；C、平板不適宜在搖床上振蕩培養(yǎng)，C錯(cuò)誤；D、稀釋涂布平板法可對(duì)微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)和分離，D正確。故選ABC。6．產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究如圖，據(jù)圖回答下列問題：(1)圖中I號(hào)培養(yǎng)基稱為培養(yǎng)基（按功能分）；③過程所用的接種方法統(tǒng)計(jì)數(shù)目會(huì)比活菌實(shí)際數(shù)目少，原因是。(2)該培養(yǎng)基中加入的脂肪可以為目的菌提供。(3)在培養(yǎng)基的配制過程中，操作方法包括以下步驟，其正確順序?yàn)?。①溶化②調(diào)整pH③培養(yǎng)基的分裝④稱量⑤滅菌⑥倒平板(4)可用于判斷培養(yǎng)基上生長(zhǎng)菌落種類的依據(jù)是菌落的（至少寫出兩點(diǎn)）(5)在處理含油廢水的同時(shí)，可獲得蛋白質(zhì)，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如下圖，據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是。(6)根據(jù)下圖結(jié)果，計(jì)算每克土壤樣品約含細(xì)菌個(gè)。【答案】(1)選擇當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的是一個(gè)菌落(2)碳源、能源(3)④①②③⑤⑥(4)形態(tài)特征、顏色、隆起程度、分布狀況等(5)B與菌株A比較，B菌株增殖速度快，蛋白產(chǎn)量高，降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好(6)1.7×109【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的過程中，隨著線的延伸，微生物的數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個(gè)菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過適宜倍數(shù)稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個(gè)菌落?！驹斀狻浚?）培養(yǎng)基按功能主要分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基，其中選擇培養(yǎng)基指的是在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其它種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。圖中I號(hào)培養(yǎng)基加入適量的脂肪用于篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，因此屬于選擇培養(yǎng)基。通過稀釋涂布平板法測(cè)得的菌落數(shù)值往往比活菌的實(shí)際數(shù)值偏小，這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)菌落連在一起時(shí)，觀察計(jì)數(shù)只能計(jì)為一個(gè)菌落。（2）培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而脂肪是有機(jī)物，該培養(yǎng)基中加入的脂肪可以為目的菌提供碳源、能源。（3）培養(yǎng)基的配制過程中正確的操作步驟是稱量、溶化、調(diào)整pH、培養(yǎng)基的分裝、滅菌最后倒平板，其正確順序?yàn)棰堍佗冖邰茛蕖＃?）不同微生物形成的菌落形態(tài)、顏色、隆起程度、分布狀況等特征不相同，因此可以用于判斷菌落種類。（5）由曲線圖分析可知，相同時(shí)間內(nèi)，菌株B的細(xì)胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故進(jìn)行相關(guān)研究可選擇菌株B，原因是菌株B增殖速度快，同時(shí)降解脂肪的能力強(qiáng)，凈化效果更好。（6）稱取10g某土壤樣品，用無菌水定容到100mL，再按圖所示進(jìn)行梯度稀釋，最終分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后平均酵母菌落目為（168+175+167）÷3=170，相當(dāng)于稀釋了106倍，故該樣本中每克土壤約含酵母菌（170÷0.1）×106=1.7×109個(gè)/g。7．酵母菌作為白酒發(fā)酵生產(chǎn)中的主酵菌群，通常在整個(gè)發(fā)酵過程中的前期，對(duì)發(fā)酵原料的轉(zhuǎn)化利用能力及乙醇的生產(chǎn)能力較強(qiáng)，但隨著發(fā)酵過程的進(jìn)行，在窖池酸度下降至pH≤4．5后，酵母菌的生理代謝活動(dòng)逐漸受到抑制，對(duì)發(fā)酵原料的轉(zhuǎn)化利用能力及乙醇的發(fā)酵生產(chǎn)能力也逐漸下降，甚至停止。酒用耐酸性酵母菌的篩選及應(yīng)用，將改善傳統(tǒng)的白酒生產(chǎn)工藝，促進(jìn)白酒生產(chǎn)的產(chǎn)量與產(chǎn)值的提高，將產(chǎn)生較大的經(jīng)濟(jì)效益。現(xiàn)開展對(duì)五糧液酒廠耐酸性釀酒酵母菌的分離與篩選。請(qǐng)回答下列問題：(1)從窖池底泥，黃漿水（窖底部的水，呈黃色，含有豐富的有機(jī)酸）中尋找耐酸酵母菌的原因是。(2)過程②需充分振蕩的主要目的是。過程②所用培養(yǎng)基為酵母菌提供了營(yíng)養(yǎng)。(3)過程③所用接種工具是，劃線順序是。釀酒酵母不能采用賴氨酸作為酵母氮源，因而在賴氨酸培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。將④中菌株經(jīng)饑餓處理后接種到賴氨酸培養(yǎng)基，直到15d后仍無菌落生長(zhǎng)，說明④中的菌種是。(4)對(duì)麥芽汁培養(yǎng)48h的酵母菌株，以16×40倍的顯微鏡鏡檢，篩選出菌體上多端出芽菌株，目的是?！敬鸢浮?1)尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找（或酵母菌生長(zhǎng)繁殖時(shí)，將產(chǎn)生一定量的自發(fā)突變，一旦“耐酸突變”發(fā)生，耐酸突變個(gè)體因自然選擇存活于窖底泥、黃漿水等低pH環(huán)境中）(2)使菌體與培養(yǎng)液充分接觸；增大培養(yǎng)液的溶氧量水、無機(jī)鹽、碳源、氮源(3)接種環(huán)aedcb（或bcdea）釀酒酵母(4)得到繁殖能力強(qiáng)的酵母菌【分析】葡萄酒與白酒制作的原理是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厭氧微生物，在缺氧條件下進(jìn)行無氧呼吸，在氧氣充足的條件下進(jìn)行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的細(xì)胞核，屬于真核生物，適宜酵母菌生長(zhǎng)的溫度范圍是18～25℃?！驹斀狻浚?）尋找目的菌株時(shí)，要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，這樣才更容易成功。因此從窖池底泥，黃漿水（窖底部的水，呈黃色，含有豐富的有機(jī)酸）去尋找耐酸酵母菌。（2）充分振蕩可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸、增大培養(yǎng)液的溶氧量，有利于酵母菌的繁殖。過程②的液體培養(yǎng)基的成分適合酵母菌的生存繁殖，因此為其提供了水、無機(jī)鹽、碳源、氮源。（3）過程③采用的是平板劃線法，因此接種工具是接種環(huán)。每次劃線都要從上次劃線的末端開始，因此推測(cè)劃線的順序是：aedcb（或bcdea）。釀酒酵母不能采用賴氨酸作為酵母氮源，因而在賴氨酸培養(yǎng)基上不能生長(zhǎng)。將④中菌株經(jīng)饑餓處理后接種到賴氨酸培養(yǎng)基，直到15d后仍無菌落生長(zhǎng)，說明④中的菌種無法利用賴氨酸，那該菌種為釀酒酵母。（4）菌體上多端出芽菌株，這樣的菌