實驗02酵母菌的純培養(yǎng)

實驗02酵母菌的純培養(yǎng)配制培養(yǎng)基：稱去皮馬鈴薯200g、切塊加水1000ml，加熱煮沸紗布過濾加20g葡萄糖加20g瓊脂用蒸餾水定容至1000ml滅菌滅菌培養(yǎng)基：高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)皿滅菌：干熱滅菌法倒平板條件：50℃左右（酒精燈旁）操作步驟接種和分離：平板劃線法培養(yǎng)酵母菌方法：將接種后的平板和一個未接種的平板倒置放到恒溫箱中培養(yǎng)。條件：28℃左右。一、平板劃線法注意問題：1、在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)的原因：劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。2、在第二次以及其后的劃線操作時，從上一次劃線的末端開始劃線的原因：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。3、接種結(jié)束后，要將一個未接種的培養(yǎng)基一起培養(yǎng)原因：培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對照，未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過培養(yǎng)后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的；4、未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長，說明：培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。二、無菌技術(shù)的三個主要注意點①實驗前應(yīng)對操作空間、操作人員進行消毒，對所用器具和培養(yǎng)基進行滅菌。②實驗進行時需在酒精燈火焰周圍無菌區(qū)操作。③避免已殺菌處理的材料再次污染。三、倒平板時的注意事項①瓊脂是一種多糖，在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。倒平板時高于50℃則會燙手，低于50℃時若不及時操作，瓊脂會凝固。②可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。1．（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關(guān)于細菌和酵母菌實驗的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細菌的數(shù)量測定【答案】A【分析】培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。滅菌常用的方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌。消毒常用的方法有煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外線或化學藥物消毒法等。【詳解】A、細菌是原核生物，酵母菌是真核生物，不同微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需求是不一樣，通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比，A正確；B、通常細菌的生長速度比酵母菌快，但形成的菌落，不一定細菌的大于酵母菌的，與細菌的種類有關(guān)，部分細菌的菌落小于酵母菌，B錯誤；C、通常細菌和酵母菌的培養(yǎng)基都可以用高壓蒸汽滅菌法滅菌，C錯誤；D、血細胞計數(shù)板適用于真菌的計數(shù)，細菌計數(shù)板用于細菌的數(shù)量測定等，D錯誤。故選A。2．（2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細菌形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并檢測細菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯誤的是（

）A．采樣前需對空氣微生物采樣器進行無菌處理B．細菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對3個平板計數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測的細菌氣溶膠濃度比實際值高【答案】D【分析】稀釋涂布平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。【詳解】A、為防止雜菌感染，接種前需要對培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、微生物采樣器進行滅菌，對實驗操作者的雙手進行消毒，A正確；B、純化培養(yǎng)時，為防止污染培養(yǎng)基和水分蒸發(fā)，培養(yǎng)皿應(yīng)倒置放在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，B正確；C、微生物計數(shù)時在同一稀釋度下，應(yīng)至少需要對3個菌落數(shù)目在30～300的平板進行計數(shù)，以確保實驗的準確性，C正確；D、使用稀釋涂布平板法對微生物計數(shù)，數(shù)值往往偏小，原因是兩個或多個細胞連在一起時，在平板上只能觀察到一個菌落，D錯誤。故選D。3．（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒C．接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物【答案】D【分析】1、培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。2、按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進所需要的微生物的生長。3、消毒和滅菌是兩個不同的概念，消毒是指使用較為溫和的物理、化學或生物的方法殺死物體表面或內(nèi)部的一部分微生物。滅菌則是指使用強烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子?！驹斀狻緼、不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯誤；B、平板涂布時涂布器使用前必須浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，不屬于消毒，B錯誤；C、使用后的培養(yǎng)基即使未長出菌落也要在丟棄前進行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯誤；D、脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素獲得氮源而進行生長繁殖，但是不能合成脲酶的微生物因缺乏氮源而無法生長，因此以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物，D正確。故選D。4．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標菌的條件組合是（

）A．a(chǎn)點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基【答案】D【分析】篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，要用角蛋白氮源培養(yǎng)基。【詳解】研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以在c點取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進行選擇培養(yǎng)，所以D正確，ABC錯誤。故選D。5．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務(wù)時出現(xiàn)微生物污染風險，需要對航天器及潔凈的組裝車間進行環(huán)境微生物檢測。下列敘述錯誤的是（

）A．航天器上存在適應(yīng)營養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物B．細菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕C．在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品D．采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征【答案】D【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)皿表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落?！驹斀狻緼、嗜極微生物適應(yīng)極端環(huán)境的特性使它們有在空間暴露環(huán)境或地外星球環(huán)境中存活的可能，因此航天器上存在適應(yīng)營養(yǎng)物質(zhì)匱乏等環(huán)境的極端微生物，A正確；B、細菌形成菌膜粘附于航天器設(shè)備表面產(chǎn)生生物腐蝕，會腐蝕艙內(nèi)材料以及設(shè)備線路、元器件，B正確；C、對航天器及潔凈的組裝車間進行環(huán)境微生物檢測，需要在組裝車間地面和設(shè)備表面采集環(huán)境微生物樣品，C正確；D、航天器及潔凈的組裝車間環(huán)境微生物很少，分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征，不需要采用平板劃線法，D錯誤。6．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【分析】為了篩選可分解尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，其它微生物在該培養(yǎng)基上因缺乏氮源而不能生長，可用于分離含脲酶的微生物。【詳解】A、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，B正確；C、當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；D、在細菌分解尿素的化學反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進一步鑒定，D錯誤。故選D。7．（2021·北京·統(tǒng)考高考真題）人體皮膚表面存在著多種微生物，某同學擬從中分離出葡萄球菌。下述操作不正確的是（）A．對配制的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌B．使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣C．用取樣后的棉拭子在固體培養(yǎng)基上涂布D．觀察菌落的形態(tài)和顏色等進行初步判斷【答案】C【分析】實驗室常用的消毒和滅菌方法的比較：1、消毒：煮沸消毒法（一般物品）、巴氏消毒法（一些不耐高溫的液體，如牛奶）、化學藥劑消毒法（如用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源等）、紫外線消毒法（接種室、操作臺）；2、滅菌：灼燒滅菌（接種工具）、干熱滅菌（玻璃器皿、金屬用具）、高壓蒸汽滅菌（培養(yǎng)基及容器）。【詳解】A、為避免雜菌污染干擾，需對配制的培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，A正確；B、葡萄球菌需從人體皮膚的微生物中分離，為避免雜菌污染，故需要使用無菌棉拭子從皮膚表面取樣，B正確；C、用取樣后的棉拭子浸出液在固體培養(yǎng)基上涂布，C錯誤；D、根據(jù)微生物在固體平板培養(yǎng)基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別，D正確。故選C。8．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色。將不能直接吸收脂肪的甲，乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色，乙菌菌落周圍不變色，下列說法錯誤的是（

）A．甲菌屬于解脂菌B．實驗中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比D．該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力【答案】B【分析】選擇培養(yǎng)基：根據(jù)某種微生物的特殊營養(yǎng)要求或其對某化學、物理因素的抗性而設(shè)計的培養(yǎng)基使混合菌樣中的劣勢菌變成優(yōu)勢菌，從而提高該菌的篩選率。鑒別培養(yǎng)基：依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中特定試劑或化學藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計?！驹斀狻緼、根據(jù)題干信息“甲菌菌落周圍呈現(xiàn)深藍色”，說明甲可以分泌脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸會使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{色，因此甲菌屬于解脂菌，A正確；B、乙菌落周圍沒有出現(xiàn)深藍色，說明乙菌落不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌落也可以在培養(yǎng)基上生存，說明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯誤；C、可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進行對比，更加直觀，C正確；D、可以利用該平板可用來比較解脂菌分泌脂肪酶的能力，觀察指標可以以菌落周圍深藍色圈的大小，D正確。故選B。9．（2021·山東·統(tǒng)考高考真題）含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運動能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說法錯誤的是（

）A．乙菌的運動能力比甲菌強B．為不影響菌的運動需選用液體培養(yǎng)基C．該實驗不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染【答案】B【分析】圖中是穿刺接種的方法，根據(jù)題干中的信息“硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀”，所以根據(jù)黑色沉淀的多少，比較兩種菌產(chǎn)生硫化氫的能力?！驹斀狻緼、從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說明了乙菌的運動能力比甲菌強，A正確；B、為不影響菌的運動需選用半固體培養(yǎng)基，B錯誤；C、根據(jù)題意，黑色區(qū)域的面積大小反映兩種菌運動能力的大小，而不能表示二者產(chǎn)生硫化氫的能力大小，C正確；D、微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確。10．（2021·廣東·統(tǒng)考高考真題）中國科學家運用合成生物學方法構(gòu)建了一株嗜鹽單胞菌H，以糖蜜（甘蔗榨糖后的廢棄液，含較多蔗糖）為原料，在實驗室發(fā)酵生產(chǎn)PHA等新型高附加值可降解材料，期望提高甘蔗的整體利用價值。工藝流程如圖?；卮鹣铝袉栴}：（1）為提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，可在液體培養(yǎng)基中將蔗糖作為，并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用的方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良菌株的方法還有等。（答出兩種方法即可）（2）基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，研究人員設(shè)計了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是。（答出兩點即可）（3）研究人員在工廠進行擴大培養(yǎng)，在適宜的營養(yǎng)物濃度、溫度、pH條件下發(fā)酵，結(jié)果發(fā)現(xiàn)發(fā)酵液中菌株H細胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中可能是高密度培養(yǎng)的限制因素。（4）菌株H還能通過分解餐廚垃圾（主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等）來生產(chǎn)PHA，說明其能分泌?！敬鸢浮课ㄒ惶荚聪♂屚坎颊T變育種、基因工程育種鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制氧氣（O2或溶解氧）蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等【分析】微生物的篩選和計數(shù)方法：（1）實驗室中微生物的篩選原理實驗室篩選：人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。（2）微生物常見的接種方法：稀釋涂布平板法、平板劃線法。（3）測定微生物數(shù)量的方法：①直接計數(shù)法：常用顯微鏡直接技術(shù)法，一般適用于純培養(yǎng)懸浮液中各種單細胞菌體的計數(shù)。②間接計數(shù)法：常用稀釋平板計數(shù)法，平板培養(yǎng)基上長出一個菌落就代表原待測樣品中一個微生物個體?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，該實驗的目的是提高菌株H對蔗糖的耐受能力和利用效率，結(jié)合微生物的代謝需求，其液體培養(yǎng)基應(yīng)該以蔗糖作為唯一碳源。并不斷提高其濃度，經(jīng)多次傳代培養(yǎng)（指培養(yǎng)一段時間后，將部分培養(yǎng)物轉(zhuǎn)入新配的培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)）以獲得目標菌株。培養(yǎng)過程中定期取樣并用稀釋涂布的方法進行菌落計數(shù)，評估菌株增殖狀況。此外，選育優(yōu)良菌株的方法還有誘變育種、基因工程育種等。（2）已知，菌株H具有嗜鹽、酸堿耐受能力強等特性，因此當培養(yǎng)基鹽濃度為60g/L，pH為10時，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上，而鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長繁殖受抑制，故該系統(tǒng)不需要滅菌。（3）分析題意，擴大培養(yǎng)時，營養(yǎng)物濃度、溫度、pH等條件下適宜，而發(fā)酵液中菌株H細胞增殖和PHA產(chǎn)量均未達到預(yù)期，并產(chǎn)生了少量乙醇等物質(zhì)，說明發(fā)酵條件中氧氣不足，使菌種進行無氧呼吸產(chǎn)生乙醇，即氧氣（O2或溶解氧）是限制高密度培養(yǎng)的重要因素。（4）根據(jù)酶的專一性可知，菌株H之所以能通過分解主要含蛋白質(zhì)、淀粉、油脂等的餐廚垃圾來生產(chǎn)PHA，說明其能分泌蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。1．金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物，其具有耐高鹽的特性，在環(huán)境中分布廣泛。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．可從食物和人的糞便中分離得到金黃色葡萄球菌B．培養(yǎng)過金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基要滅菌后才能丟棄C．分離樣品中的金黃色葡萄球菌時，用高鹽液體培養(yǎng)基培養(yǎng)不能增加該菌的濃度D．在固體選擇培養(yǎng)基上采用平板劃線法接種，可獲得金黃色葡萄球菌的純培養(yǎng)物【答案】C【分析】培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。(2)營養(yǎng)組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。(3)種類：①按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基。②按照成分的來源可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。③按照功能用途可分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等?！驹斀狻緼、金黃色葡萄球菌是一種常見的食源性致病微生物，因此可從食物和人的糞便中分離得到金黃色葡萄球菌，A正確；B、使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后才能丟棄，B正確；C、金黃色葡萄球菌可在鹽濃度接近8％的環(huán)境中生長，具有耐高鹽的特性，因此分離樣品中的金黃色葡萄球菌時，用高鹽液體培養(yǎng)基培養(yǎng)可以增加該菌的濃度，C錯誤；D、對微生物進行分離、純化可用平板劃線法或稀釋涂布法，因此，在固體選擇培養(yǎng)基上采用平板劃線法接種，可獲得金黃色葡萄球菌的純培養(yǎng)物，D正確。故選C。2．下列關(guān)于微生物實驗操作的敘述正確的是（

）A．對酵母菌細胞進行計數(shù)時，通常使用細菌計數(shù)板B．平板劃線時，只有在最后一個劃線區(qū)域才可得到所需單菌落C．在統(tǒng)計樣品活菌數(shù)時，需對每個稀釋度進行涂布培養(yǎng)并計數(shù)D．在平板上劃線和涂布時，均需避免弄破培養(yǎng)基表面【答案】D【分析】統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法（1）顯微鏡直接計數(shù)法①原理：利用特定細菌計數(shù)板或血細胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物數(shù)量；②方法：用計數(shù)板計數(shù)；③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。（2）間接計數(shù)法（活菌計數(shù)法）①原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌?！驹斀狻緼、酵母菌屬于真菌，對酵母菌細胞進行計數(shù)時，通常使用血細胞計數(shù)板，A錯誤；B、平板劃線時，一般在最后一個劃線區(qū)域可得到所需單菌落，B錯誤；C、在統(tǒng)計樣品活菌數(shù)時，并不需對每個稀釋度進行涂布培養(yǎng)并計數(shù)，較為理想的計數(shù)平板在涂布培養(yǎng)后菌落數(shù)應(yīng)在30300之間，要得到這樣的適合計數(shù)的平板，C錯誤；D、在平板上劃線和涂布時，均需避免弄破培養(yǎng)基表面，否則會導(dǎo)致不能形成正常菌落，D正確。3．酵母菌的品質(zhì)影響葡萄酒的產(chǎn)量和質(zhì)量，研究人員為分離出產(chǎn)酒精能力強的酵母菌菌株，進行了如圖Ⅰ所示實驗，甲、乙、丙、丁錐形瓶內(nèi)分別加入100mL完全培養(yǎng)基。下列說法正確的是（

）A．傳統(tǒng)葡萄酒發(fā)酵時，將葡萄沖洗去梗后榨汁裝滿消毒后的玻璃瓶B．對培養(yǎng)基進行高壓蒸汽滅菌，需在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下C．用稀釋涂布平板法計算出葡萄酒過濾液的活菌數(shù)為6.8×106個/L，此數(shù)值可能低于實際的活菌數(shù)D．由圖Ⅱ可知，丙瓶出現(xiàn)的原因可能是培養(yǎng)瓶密封不嚴，丁組酵母菌產(chǎn)酒精能力比乙弱【答案】B【分析】實驗室常用的滅菌方法：①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌。②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌。③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa,溫度為121℃的條件下，維持15～30min。【詳解】A、傳統(tǒng)葡萄酒發(fā)酵時，將葡萄沖洗去梗后榨汁裝到消毒后的玻璃瓶，留1/3的空間，A錯誤；B、培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基都可以用高壓蒸滅菌法進行滅菌，在壓力100kpa，溫度121℃條件下1530min后，讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降，當壓力表的壓力降至0時，打開排氣閥，B正確；C、若對菌液計數(shù)，需選取菌落數(shù)處于30～300的培養(yǎng)皿計數(shù)據(jù)圖可知，該培養(yǎng)基的菌落數(shù)為（62+68+74）÷3÷0.1mL×104（稀釋倍數(shù)）×103=6.8×109個/L，由于計數(shù)過程中兩個或兩個以上細胞連在一起，平板上生長出一個菌落，所以數(shù)目偏小，C錯誤；D、甲接種無菌水，瓶中無菌，說明培養(yǎng)基滅菌徹底，無菌操作正常，丁組的活菌數(shù)比乙組少，但是產(chǎn)生的酒精和乙組一樣多，所以丁組產(chǎn)生酒精能力比乙強，D錯誤。故選B。4．下圖為不同稀釋度的酵母菌培養(yǎng)液涂布后的實驗結(jié)果圖，下列敘述正確的是（

）A．實驗中使用接種環(huán)完成上述涂布過程B．涂布時避免涂布到瓊脂邊緣，因為沿著瓊脂邊緣計數(shù)菌落更加困難C．酵母菌擴大培養(yǎng)過程中需要使用液體培養(yǎng)基靜置培養(yǎng)D．計數(shù)105稀釋度下培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，可以計算出每毫升培養(yǎng)液的酵母細胞個數(shù)【答案】B【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)熔化的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過大量稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。【詳解】A、由圖可知，培養(yǎng)基上菌落分布均勻，使用的接種方法應(yīng)為稀釋涂布平板法，故應(yīng)用涂布器完成上述涂布過程，A錯誤；B、由于菌落生長在邊緣時，且易連成片，不容易計數(shù)，故涂布時避免涂布到瓊脂邊緣，B正確；C、酵母菌在氧氣充足的條件下大量增殖，酵母菌擴大培養(yǎng)過程中需要使用液體培養(yǎng)基需震蕩培養(yǎng)，增大培養(yǎng)液中氧氣的含量，C錯誤；D、符合計數(shù)的培養(yǎng)基上的菌落數(shù)在30300之間，105稀釋度下培養(yǎng)皿的菌落數(shù)很少，故不可用于計算每毫升培養(yǎng)液的酵母細胞個數(shù)，D錯誤。故選B。5．某學習小組采用如下培養(yǎng)基進行酵母菌的純化培養(yǎng)實驗。有關(guān)敘述錯誤的是（

）組分馬鈴薯濾液葡萄糖瓊脂水含量200g20g15g定容至1000mLA．該培養(yǎng)基是以葡萄糖為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基B．裝有培養(yǎng)基的錐形瓶、培養(yǎng)皿等應(yīng)進行干熱滅菌C．將接種后的平板置于28℃左右的恒溫搖床上振蕩培養(yǎng)D．若同時計數(shù)酵母菌數(shù)量，應(yīng)采用稀釋涂布平板法接種【答案】ABC【分析】酵母菌的純化培養(yǎng)的步驟是配制培養(yǎng)基、滅菌、倒平板、接種、分離和培養(yǎng)【詳解】A、葡萄糖不是酵母菌生長繁殖的唯一碳源，馬鈴薯濾液也能為酵母菌提供碳源、氮源和無機鹽等營養(yǎng)成分，A錯誤；B、裝有培養(yǎng)基的錐形瓶、培養(yǎng)皿不能進行干熱滅菌，可進行高壓蒸汽滅菌，B錯誤；C、平板不適宜在搖床上振蕩培養(yǎng)，C錯誤；D、稀釋涂布平板法可對微生物進行計數(shù)和分離，D正確。故選ABC。6．產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開展了相關(guān)研究如圖，據(jù)圖回答下列問題：(1)圖中I號培養(yǎng)基稱為培養(yǎng)基（按功能分）；③過程所用的接種方法統(tǒng)計數(shù)目會比活菌實際數(shù)目少，原因是。(2)該培養(yǎng)基中加入的脂肪可以為目的菌提供。(3)在培養(yǎng)基的配制過程中，操作方法包括以下步驟，其正確順序為。①溶化②調(diào)整pH③培養(yǎng)基的分裝④稱量⑤滅菌⑥倒平板(4)可用于判斷培養(yǎng)基上生長菌落種類的依據(jù)是菌落的（至少寫出兩點）(5)在處理含油廢水的同時，可獲得蛋白質(zhì)，實現(xiàn)污染物資源化。為評價A、B兩菌株的相關(guān)性能，進行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如下圖，據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株進行后續(xù)相關(guān)研究，理由是。(6)根據(jù)下圖結(jié)果，計算每克土壤樣品約含細菌個?！敬鸢浮?1)選擇當兩個或多個細胞連在一起時，培養(yǎng)基上長出的是一個菌落(2)碳源、能源(3)④①②③⑤⑥(4)形態(tài)特征、顏色、隆起程度、分布狀況等(5)B與菌株A比較，B菌株增殖速度快，蛋白產(chǎn)量高，降解脂肪能力強，凈化效果好(6)1.7×109【分析】微生物常見的接種的方法：①平板劃線法：將已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿制成平板，接種，劃線，在恒溫箱里培養(yǎng)。在劃線的過程中，隨著線的延伸，微生物的數(shù)逐漸減少，最后可能形成單個菌落。②稀釋涂布平板法：將待分離的菌液經(jīng)過適宜倍數(shù)稀釋后，均勻涂布在培養(yǎng)基表面，經(jīng)培養(yǎng)后可形成單個菌落。【詳解】（1）培養(yǎng)基按功能主要分為選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基，其中選擇培養(yǎng)基指的是在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其它種類微生物生長的培養(yǎng)基。圖中I號培養(yǎng)基加入適量的脂肪用于篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，因此屬于選擇培養(yǎng)基。通過稀釋涂布平板法測得的菌落數(shù)值往往比活菌的實際數(shù)值偏小，這是因為當兩個或多個菌落連在一起時，觀察計數(shù)只能計為一個菌落。（2）培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，而脂肪是有機物，該培養(yǎng)基中加入的脂肪可以為目的菌提供碳源、能源。（3）培養(yǎng)基的配制過程中正確的操作步驟是稱量、溶化、調(diào)整pH、培養(yǎng)基的分裝、滅菌最后倒平板，其正確順序為④①②③⑤⑥。（4）不同微生物形成的菌落形態(tài)、顏色、隆起程度、分布狀況等特征不相同，因此可以用于判斷菌落種類。（5）由曲線圖分析可知，相同時間內(nèi)，菌株B的細胞密度高于菌株A，而菌株B的脂肪剩余量低于菌株A的脂肪剩余量，故進行相關(guān)研究可選擇菌株B，原因是菌株B增殖速度快，同時降解脂肪的能力強，凈化效果更好。（6）稱取10g某土壤樣品，用無菌水定容到100mL，再按圖所示進行梯度稀釋，最終分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后平均酵母菌落目為（168+175+167）÷3=170，相當于稀釋了106倍，故該樣本中每克土壤約含酵母菌（170÷0.1）×106=1.7×109個/g。7．酵母菌作為白酒發(fā)酵生產(chǎn)中的主酵菌群，通常在整個發(fā)酵過程中的前期，對發(fā)酵原料的轉(zhuǎn)化利用能力及乙醇的生產(chǎn)能力較強，但隨著發(fā)酵過程的進行，在窖池酸度下降至pH≤4．5后，酵母菌的生理代謝活動逐漸受到抑制，對發(fā)酵原料的轉(zhuǎn)化利用能力及乙醇的發(fā)酵生產(chǎn)能力也逐漸下降，甚至停止。酒用耐酸性酵母菌的篩選及應(yīng)用，將改善傳統(tǒng)的白酒生產(chǎn)工藝，促進白酒生產(chǎn)的產(chǎn)量與產(chǎn)值的提高，將產(chǎn)生較大的經(jīng)濟效益?，F(xiàn)開展對五糧液酒廠耐酸性釀酒酵母菌的分離與篩選。請回答下列問題：(1)從窖池底泥，黃漿水（窖底部的水，呈黃色，含有豐富的有機酸）中尋找耐酸酵母菌的原因是。(2)過程②需充分振蕩的主要目的是。過程②所用培養(yǎng)基為酵母菌提供了營養(yǎng)。(3)過程③所用接種工具是，劃線順序是。釀酒酵母不能采用賴氨酸作為酵母氮源，因而在賴氨酸培養(yǎng)基上不能生長。將④中菌株經(jīng)饑餓處理后接種到賴氨酸培養(yǎng)基，直到15d后仍無菌落生長，說明④中的菌種是。(4)對麥芽汁培養(yǎng)48h的酵母菌株，以16×40倍的顯微鏡鏡檢，篩選出菌體上多端出芽菌株，目的是。【答案】(1)尋找目的菌株時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找（或酵母菌生長繁殖時，將產(chǎn)生一定量的自發(fā)突變，一旦“耐酸突變”發(fā)生，耐酸突變個體因自然選擇存活于窖底泥、黃漿水等低pH環(huán)境中）(2)使菌體與培養(yǎng)液充分接觸；增大培養(yǎng)液的溶氧量水、無機鹽、碳源、氮源(3)接種環(huán)aedcb（或bcdea）釀酒酵母(4)得到繁殖能力強的酵母菌【分析】葡萄酒與白酒制作的原理是酵母菌無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳，酵母菌是兼性厭氧微生物，在缺氧條件下進行無氧呼吸，在氧氣充足的條件下進行有氧呼吸，酵母菌具有核膜包被的細胞核，屬于真核生物，適宜酵母菌生長的溫度范圍是18～25℃?！驹斀狻浚?）尋找目的菌株時，要根據(jù)它對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找，這樣才更容易成功。因此從窖池底泥，黃漿水（窖底部的水，呈黃色，含有豐富的有機酸）去尋找耐酸酵母菌。（2）充分振蕩可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸、增大培養(yǎng)液的溶氧量，有利于酵母菌的繁殖。過程②的液體培養(yǎng)基的成分適合酵母菌的生存繁殖，因此為其提供了水、無機鹽、碳源、氮源。（3）過程③采用的是平板劃線法，因此接種工具是接種環(huán)。每次劃線都要從上次劃線的末端開始，因此推測劃線的順序是：aedcb（或bcdea）。釀酒酵母不能采用賴氨酸作為酵母氮源，因而在賴氨酸培養(yǎng)基上不能生長。將④中菌株經(jīng)饑餓處理后接種到賴氨酸培養(yǎng)基，直到15d后仍無菌落生長，說明④中的菌種無法利用賴氨酸，那該菌種為釀酒酵母。（4）菌體上多端出芽菌株，這樣的菌