SN 1356-2004棉花根腐病菌檢疫鑒定方法

中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)棉花根腐病菌檢疫鑒定方法omnivorum(Duggar)HennebertI本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄，附錄B、附錄C、附錄D為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國山東出入境檢驗檢疫局。本標(biāo)準(zhǔn)系首次發(fā)布的檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。Ⅱ棉花根腐病又稱得克薩斯根腐病，是棉花及多種植物上的毀滅性病害之一，目前我國尚未發(fā)生(參見附錄C)。其致病菌為多主擬瘤梗孢[Phymototrichopsisomnivorum(Duggar)Hennerbert]是我國對外植物檢疫二類危險性有害生物。病原菌寄主范圍極廣(參見附錄D),可侵染2300多種植物，使植物核，菌核在土壤內(nèi)至少存活5年，最長可達(dá)12年：病原菌可土傳、病根傳播。棉花根腐病是棉花上的一種毀滅性病害，減產(chǎn)可達(dá)15%以上。棉花是事關(guān)我國計民生的主要經(jīng)濟(jì)作物之一，防止該病菌傳入我在標(biāo)準(zhǔn)的制定過程中，吸收了國際最新研究成果，結(jié)合對病原菌的生物學(xué)特性、形態(tài)學(xué)特性等進(jìn)行深入研究的基礎(chǔ)上，確定了檢疫檢測和鑒定棉花根腐病菌的各項技術(shù)要求。1棉花根腐病菌檢疫鑒定方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進(jìn)境植物檢疫中棉花根腐病菌檢疫和鑒定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于棉花根腐病菌[Phymatotrichopsisomnivorum(Duggar)Hennebert]的寄主及土壤中棉花根腐病菌的檢疫和鑒定。2定義和術(shù)語下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。多主擬瘤梗孢Phymatotrichopsisomnivorum(Duggar)Hennebert一種病原真菌，是寄生于雙子葉植物(尤其是棉花)上的重要的病原菌之一。狀如針(參見附件B),分支的菌絲常交織在一起成菌絲束，初無色，成熟后呈肉桂色。分生孢子梗conidiophores產(chǎn)生在分生孢子梗上，多為球形，直徑為4.8μm～5.5μm;橢圓形孢子大小為(5～6)μm×初由白色的菌絲緊密交織而成，且成鏈狀，隨著時間的推移逐漸變成褐色至深褐色。成熟的菌核具有一個由薄壁細(xì)胞組成的中心髓部，外邊為由厚壁細(xì)胞組成的厚皮層，大小為1mm～2mm,圓形或不棉花根腐病菌隸屬于真菌界(KingdomFungi)、半知菌門(Deuteromycota)、絲孢綱(Hyphomyce-tes)、絲孢目(Moniliales)、淡色孢科(Moniliaceae)、擬瘤梗孢屬(Phymatotrichopsis),寄主植物范圍廣泛，是危害雙子葉植物，尤其是棉花的一種毀滅性病菌。病菌以菌核或以病殘體形式存在于土壤中，或以菌絲形式存在于植物中，借助人為力量進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播，或借助風(fēng)、水等途徑進(jìn)行近距離傳播。病原該病菌在寄主植物上的危害狀、在選擇性培養(yǎng)基上的菌落及菌絲的形態(tài)特征，是鑒定該病菌的主要24儀器及用具4.1超凈工作臺。4.2高壓滅菌鍋。4.3光照恒溫培養(yǎng)箱。4.4生物顯微鏡(帶照相系統(tǒng))。4.6電子天平(千分之一)。5試劑(藥品)與菌株5.1修改的No.70培養(yǎng)基(見附錄A)。5.270%乙醇。5.3其他常規(guī)試劑。5.4菌株：樣品菌株及其干制培養(yǎng)物保存在山東出入境檢驗檢疫局。6現(xiàn)場檢疫對經(jīng)過審批同意進(jìn)境的土壤，需進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，經(jīng)篩選發(fā)現(xiàn)菌核或植株殘體，應(yīng)及時送實驗室檢驗鑒定。檢查植株的根部，挑取有病變的根部送實驗室檢驗鑒定。7實驗室檢驗7.1.1菌核7.1.2挑取土壤中植物殘體對挑取的植物病殘體，尤其是根部病殘體，在無菌條件下，切取病變組織，經(jīng)70%的乙醇表面消毒，在無菌條件下，切取根部病變組織，經(jīng)70%的乙醇表面消毒和無菌水沖洗，培養(yǎng)于經(jīng)過修改的8鑒定特征8.1菌落特征棉花根腐病菌在經(jīng)過修改的No.70的培養(yǎng)基上，菌落疏松，白色，生長均勻，菌絲常交織在一起成38.2菌絲形態(tài)特征頂端尖狀如針狀。8.4分生孢子9結(jié)果評定9.2.發(fā)現(xiàn)棉花根腐病菌經(jīng)培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)所分離的真菌符合棉花根腐病菌的形態(tài)特征，可判定該菌為棉花根腐病菌。發(fā)現(xiàn)棉花根腐病菌，要進(jìn)行純化，制作標(biāo)本，保存在4℃冰箱中兩個月，以備復(fù)4(規(guī)范性附錄)修改的No.70的培養(yǎng)基成分硫酸鎂(MgSO?·7H?O)磷酸二氫鉀(KH?PO?)磷酸氫二鉀(K?HPO?)氯化鉀(KCl)硝酸銨(NH,NO?)硫酸鋅(ZnSO?·7H?O)硫酸鐵[Fe?(SO?)?]硫酸錳(MnSO?·7H?O)葡萄糖瓊脂以上加水至1L,常規(guī)滅菌。重量/g(資料性附錄)病原菌的形態(tài)特征圖圖B.1病原菌的形態(tài)特征圖5(資料性附錄)棉花根腐病菌的分布范圍該病原菌現(xiàn)分布于美國(西南部9個州，即得克薩斯州、新墨西哥州、亞利桑那州、阿肯色州、猶他(資料性附錄)高度感染和抗病植物D.1高度感染植物AbeliagrandifloraRehd.;AcacianeriifoliaCunn.,A.pendulaCunn.;Ailanthusaltissima(Mill.)Swingle;Althaeaficifolia(L..)Cav.,A.rosea(L.)Cav.;AnethumgraveolensL.;ArachishypogaeaL.;ArmoraciarusticanaGaertn.,Mey.&Scherb.;Asterspp.;BetavulgarisL.;Big-noniatweedianaLindl.(Doxanthaunguis-catiRehd.)Broussonetiapapyrifera(L.)Vent.;Bud-dleiadavidiFranch.,B.asiaticaLour.;CannabissativaL.;CapsicumfrutescensLmumhalicacabumL.;CatalpaspeciosaWarder;CeratoniasiliquaL.;CercischinensisBung,C.oc-cidentalisTorr.;ChrysanthemummaximumRam.,C.morifoliumRam.;CinnamomumcamphoraNees.&Eberm.;CitrusmedicaL.;ConvolvulusrepensL.;CotoneasterpannosaFrench;CydoniajaponicaPers.,C.vulgarisMill.;DahliaroseaCav.;DaucuscarotaL.var.sativaDC.:DiospyroskakiL.f.;ElaeagnusargenteaPursh.;EschscholtziacalifornicaCham.;EuonymusjaponicusL.;EuphorbiapulcherrimaWilld.:FicuscaricaL.;GaillardiaaristataPursh.;GinkgobilobaL.;GledilsiatriacanthosL.;GlycinemaxMerrill;GossypiumbarbadenseL..G.hirsutumL.;Gre-villearobuslaCunn.;HelianlhustuberosusL..;HibiscusesculentusL.,H.sabdariffaL.;lpomoeabatalas(L.)Lam.;LeucophyllumleranumBenth.;LigustrumamurenseCarr.,L.japonicumThunb.,L.nepalenseWall.,L.ovalifoliumHassk.,L.sinenseLour.;MedicagosativaL.;MeliaazedarachL.,M.azedarachL.var,umbraculiformisBerck.;MelilotusalbaDesr.,M.albavar.annuaCoe.,M.indica(L.)All.,M.officinalivLam.;MirabiisjalapaL.;MorusalbaL.var.lataricaLoudon;NandinadomeslicaThunb.;PassifloracaeruleaL.;PaslinacasalivaL.;PerseagratissimaGaertn.f.;PhaseolusacutifoliusA.Grayvar.latifoliusFreem.,P.vulgarisL.;Pilto-sporumlohiraAit.;Populusalbavar.pyramidalisBunge,P.arizonicaSarg.,P.delloidesMarsh.,P.eugeneiHort.exC.Koch,P.fremontiiS.Wats.,P.fremontiivar.macdougalliiJepson,P.jackiiSarg.,P.nigraL.var.italicaDuRoi;PrunusamygdalusBatsch.,P.armenia-caL.,P.communisL.,PmalusL.;QuercussuherL.;RheumrhaponticumL.;RibesvulgareLam.:RicinuscommumisL.;RobiniapseudoacaciaL.;RosamultifloraThunb.,R.odorata;Ru-husspp.,R.ulmifoliltsSchott.var.inermisFoche;SalixhahylonicaL.,S.nigraL.;Sapiumseb-iferumRoxb.;SchmusmolleL.,S.terebinthifoliaRaddi;SpartiumjunceumL.;Spiraeavanhoul-lei(Briot)Zabel;SterculiadiversifoliaDon.;SyringachinensisWilld.,S.persicaL.,S.vulgarisL.;Tragiasp.;TragopogonporrifoliusL.;UlmusamericanaL.,U.parvifoliaJacq..U.pumi-laL.;VignasinensisEndl.;VitislabruscaL.,V.viniferaL.;ZizylphusjujubaMill.6D.2易感染植物AcerinteriorBritton,A.negundoL.,A.pseudoplatanusL.;AleuritesfordiiHemsl.;Amaranl-husbliloidesS.Wats.,A.caudalusL.,A.h.ybridusL.var.hypochondriacus(L.)Bailey,A.paniculalusL.,A.tricolorL.;AmbrosiaconfertifloraDC.;AmorphafrulicosaL.;AmpelopsisquinquetifoliaMichx.;AntigononleplopusHook.&.Am.;AquilegiacanadensisL.;Berberisthun-bergiiDC.;Boerhaaviasp.;BoussingaultiabaselloidesH.B.K.;BuddleiaasiaticaLour.,B.da-vidiFranch.;CaesalpiniagilliesiiWall.;CalendulaofflcinalisI..;CallislemonrigidusR.Br.;Calonyctionaculeatum(L.)House;CaraganaarborescensLam.;CardiospermumhalicacahumL.;Caryaillinoensis(Wang.)K.Koch;CassiaarlemisioidesGaud.;CasuarinacunninghamiaCatalpaspeciosaWarder;CeltisoccidellfalisL.;CentaureacyanusL.,C.moschalaL.;Chrysan-themumcinerariifolium(Trcv.)Vis.,C.maximumRamond,C.morifolium(Ramat.)Hcmsl.CicerarietinumL.;Cinnamomumcamphora(L.)Nees.&.Eberm.;CitrullusvulgarisSchrad.;CitrusauranliumL.,C.medical..,C.mitisBlanco;CoreopsistinctoriaNutt.;CosmosbipinnatusCav.,C.sulphureusCav.;CrotalariajunceaL.;CucumismeloL.,C.meloL.var.inodorusNaud.,C.sulivusL.;CucurhilamarimaDcne.,C.moschataDcne.,C.pepoL..,C.pepovar.melopepo(L.)Alcf.;CupressusarizonicaGreene,C.macrocarpaHartw.exGord.,C.sempervi-rensL.;Cyamopsistetragonoloba(L.)Taub.;CynarascolymusL.;DelphiniumajacisL.;Dian-thusbarhatusL.,D.caryophyllusL.,D.chinensisL.;DiospyrosvirginianaL.;DolichoslablabL.;Doxanthaunguis-cati(L.)Rehd.;EleagnusangustifoliaL.;EucalyptuspolyanthemaSchauer.,E.rostrataSchlecht.,E.rudisEndl.;FeijoasellowianaBerg.;FrazinuspennsylvanicaMarsh.var.lanceolata(Borkh.)Sarg.,F.velulinaTorr.;GaillardiaaristalaPursh.,G.pulchel-laFoug.;Gymnocladusdioica(L.)K.Koch;GypsophilaelegansBieb.;HederahelixL.;Helian-thusannuusL.,H.maximilianiiSchrad.;ImpatiensbalsaminaL.;Ipomoeahederacea(L..)Jacq.,I.purpurea(L.)Roth;JacarandamimosaefoliaD.Don.;JasminumfloridumBunge,J.grandi-florumL.;J.humileL.;J.primulinumHemsl.;JuglanscalifornicaWals.,J.majorHeller,J.nigraL.,J.regiaL..,J.sieboldianaMaxim.;JuniperuschinensisL.var.pfitzerianaSpaeth.J.pachyphloeaTorr.,J.scopulorumSarg.,J.virginianaL.;Kochiascoparia(L.)Schrad,var.trichophyllaBailey;KoelreuteriapaniculataLaxm.;LagerstroemiaindicaL.;LantanacamaraL.L.sellowianaLink&.Otto;LathyrusodoratusL.;LavandulaspicataL.;LeucophyllumtezanumBenth.;LigustrumjaponicumThunb.,L.lucidumAit.,L.nepalenseWall.,L.ovalifoliumHas-sk.;LippiacanescensH.B.K.;LonicerajaponicaThunb.;LycopersiconesculentumMill.;Maclu-rapomifera(Raf.)Schneid.;MagnoliagrandijloraL.;Matthiolaincana(L.)R.Br.;MedicagoarabicaAll.;MorusalbaL.,M.albaL.var.tatarica(L.)Ser.;MyrtuscommunisL.,M.commu-nisL,var.microphilla;NandinadomesticaThunb.;NeriumoleanderL.;NigellOenotheraroseaAit.;OleaeuropaeaL.;Opuntiaspp.;PapaverrhoeasL.,P.somniferumL..;ParkinsoniaaculeataL.;PartheniumargentatumGray;PassifloracaerulaL.;PhaseolusaureusRoxb.;PittosporumtobiraAit.;PlatanusoccidentalisL.,P.orientalisL.,P.wrightiiS.Wats.;Poncirustrifoliata(L.)Raf.;PortulacagrandijloraHook.;PrunusamericanaMarsh.,P.dom-esticaL.,P.laurocerasusL.;Puerariathunbergiana(Sieb.&.Zucc.)Benth.;PunicagranatumL.;Pyracanthaangustifolia(Franch.)Schneid.,P.coccineaRoem.var.lalandiiDipp.,P.cre-nulata(Roxb.)Roem.,P.gibbsiiA.B.Jacks,var.yunnanensisOsborn;QuercussuberL.;RibesamericanumMill.,R.sativum(Reichb.)Syme;RubusidaeusL.var.strigosus(Michx.)Maxim.,R.loganobaccusBailey,R.strigosusMichx.var.idacusL.,R.ulmijoliusSchott.var.inermis(Willd.)Focke;SalviaofficinalisL.;ScabiosaatropurpureaL.;SesamumorientaleL.;Sesbaniacannabina(Retz.)Poir,S.macrocarpaMuhl.(exaltata);SolanummelogenaL.,S.rostratumDu-nal,S.tuberosumL.;SophorajaponicaL.;Stizolobiumutile(deeringianumBart);Tamarixartic-ulataVahl.,T.gallicaL.;Tecomariacapensis(Thunb,)Spach.;ThujaorientalisL.;Tithoniarotundifolia(Mill.)Blake;TrifoliumrepensL.;UlmuscrassifoliaNutt.;Verbenacanadensis(L.)Britton;Viteragnus-castusL.;Wistariaflorihunda(Willd.)DC.;ZinniaeAcaciafarnesiana(L.)Willd.;AgaveamericanaL..;AlliumcepaL.,A.sativumL.;AlyssummaritimumLam.;AmaranthusalbusL.;Amaryllisspp.;AmorphafruticosaL.;Antirrhinumma-jusL.;Argenomesp.;ArundodonaxL.;AsparagusofficinalisL.;AsterspinosaBenth.;Atri-plexwrightii;AvenasalivaL.;Bambusaspp.;CannaindicaL.;CaraganaarborescensLam.;Ce-losiaargenteaL.var.cristataKuntze;CeltisaustralisL.;CercidiumfloridumBenth.;Chilopsislinearis(Cav.);ColeusblumeiBenth.;Condalialycioidesvar.canescens(Gray);CordalineaustralisHook.;CortaderiaargenteaStepf.;Crinumspp.;Crocusspp.;Cynodondactylon(L.)Pers.;CyperusalternifoliusL.,C.papyrusL..;DasylirionwheeleriS.Wats.;DiosmaericoidesL..;Echinocylstislobata(Michx.)Torr.&.Gray;EleagnusangustifoliaL.;ErodiumcicutareumL’Her.,E.texanumGray;ErytheaarmataS.Wats.;EucalyptusrostrataSchlecht.,E.rudEndl.;EuphorbiaalbomarginataT.&G.;FeijoasellowianaBerg.;FragariachiloensisDuchesnevar.ananassaBailey;Gladiolusspp.;GomphrenaglobosaL.;GutierrezialucidaGreene;Gypsoph-ilapaniculataL.;HelichrysumbracteatumNdr.;HordeumvulgateL.;HyacinthusorientalisL.;IberisamaraL.,I.odorataL.;IrisgermanicaL.,I.versicolorL.;JasminumfloridumBunge.,J.grandiflorumL.;JuniperuschinensisL.var.pfitxerianaSpaeth.,J.pach.lphloea.J.scopu-lorumSarg.;KallstroemiahirsutissimaVail;LagenarialeucanthaRusby;LepidiumapetalumWilld.;LiliumlongiflorumThunb.;Lobulariamaritima(L.)Desv.;LuffaacutangulaRoxb.;Lyciumsp.;MalvaviscusconzattiiGreenm.;MarrubiumvulgareL.;Mentharotundifolia(L.)Huds.,M.spicataL.;MomordicabalsaminaL.;MusaenseteGmel.;Narcissusjonquil