SN-T 3335-2012進(jìn)出口紡織品微生物項(xiàng)目檢驗(yàn)規(guī)范

中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T3335—2012進(jìn)出口紡織品微生物項(xiàng)目檢驗(yàn)規(guī)范Rulesfortheinspectionofmicrobiologicalspecificationonimportandexporttextiles2012-12-12發(fā)布國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由國家認(rèn)證認(rèn)可監(jiān)督管理委員會(huì)提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國山東出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國廈門出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國上海出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局、中華人民共和國江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局。Ⅱ近年來，隨著人們生活水平的提高和近年來進(jìn)口紡織服裝的增多，中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局關(guān)于將進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫工作重點(diǎn)，轉(zhuǎn)移到安全、衛(wèi)生、環(huán)保、反欺詐等項(xiàng)目上來的要求，借鑒國外的先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)，特別是通過總結(jié)我國十年來進(jìn)出口紡織品衛(wèi)生項(xiàng)目檢驗(yàn)工作的經(jīng)驗(yàn)，制定一部檢驗(yàn)檢《進(jìn)出口紡織品微生物檢測規(guī)范》是對(duì)SN/T1649《進(jìn)出口紡織品安全項(xiàng)目檢驗(yàn)規(guī)范》在衛(wèi)生項(xiàng)目方面的補(bǔ)充和完善。本檢驗(yàn)規(guī)范中規(guī)定的檢測方法，一是采用我國近幾年來頒布實(shí)施的涉及紡織品微生物的檢測方法；二是采用已頒布實(shí)施的涉及紡織品微生物檢測的國際標(biāo)準(zhǔn)或國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)；三是采用有關(guān)進(jìn)出口合同或協(xié)議中規(guī)定的檢測方法。進(jìn)出口紡織品微生物項(xiàng)目檢驗(yàn)規(guī)范本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了進(jìn)出口紡織品的微生物項(xiàng)目的技術(shù)要求、試驗(yàn)方法和檢驗(yàn)規(guī)則。本標(biāo)準(zhǔn)適用于進(jìn)出口紡織品微生物項(xiàng)目的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB4789.4食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)沙門氏菌檢驗(yàn)SN/T1538.1培養(yǎng)基制備指南第1部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則SN/T1538.2培養(yǎng)基制備指南第2部分：培養(yǎng)基性能測試實(shí)用指南3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。直接接觸皮膚的產(chǎn)品productswithdirectcontacttoskin非直接接觸皮膚的產(chǎn)品productswithoutdirectcontacttoskin紡織品微生物項(xiàng)目紡織品微生物項(xiàng)目主要指涉及人身衛(wèi)生的微生物等項(xiàng)目。24要求4.1進(jìn)出口紡織品的微生物項(xiàng)目要求見表1,如合同或協(xié)議另有規(guī)定，按合同或協(xié)議執(zhí)行。標(biāo)明所符合的分類技術(shù)要求類別。菌落總數(shù)大腸菌群沙前氏菌致病性化膿菌*真菌菌落總數(shù)用品(A類)不得檢出不得檢出直接接觸皮膚用品(B類)不得檢出不得檢出非直接接觸皮膚用品(C類)——“致病性化膿菌含銅綠假單胞菌、金黃色葡尚球前與溶血性鏈球菌。4.2根據(jù)不同輸入國家或地區(qū)(組織)法律法規(guī)的要求，進(jìn)出口紡織品及輔料微生物項(xiàng)目限量要求參見5試驗(yàn)方法5.1樣品處理和檢驗(yàn)方法的選擇實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按要求盡快檢驗(yàn)，看及時(shí)檢取必要的持樣品的原有狀態(tài)，防止樣品中目標(biāo)微生物因客觀條件的于擾而發(fā)生變化。200mL滅菌生理鹽水中，充分混句，得到一個(gè)1:10生理老水樣液如被檢樣品含有大量吸水材料而導(dǎo)致不能吸出足夠樣液時(shí)，稀釋液量可按每次50mL遞增，直至能吸出足夠測試用樣液。在計(jì)算細(xì)菌葡落總數(shù)寫真菌菌落總數(shù)時(shí)相應(yīng)調(diào)整稀釋度。5.2菌落總數(shù)檢測方法5.2.1操作步驟從上述生理鹽水樣液中取上清液作菌落計(jì)數(shù)。用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10生理鹽水上清樣液1mL,沿管壁緩慢注于盛有9mL滅菌生理鹽水稀釋液的無菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面),振搖試管或換用1支無菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品勻根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液在進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，吸取1mL樣品勻液于無菌平皿內(nèi)，每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí)，分別吸取1mL空白稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。及時(shí)將15mL～20mL冷卻至46℃左右的熔化的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(可放置46℃±1℃恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置35.2.2結(jié)果報(bào)告5.2.2.1選取菌落數(shù)在30CFU～300CFU之間、無蔓延菌落生長的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于30CFU的平板記錄具體菌落數(shù)，大于300CFU的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。5.2.2.2若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)，計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每克樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。5.2.2.3若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí)，按式(1)計(jì)算結(jié)果： (1)式中：N——樣品中細(xì)菌菌落總數(shù)，CFU/g;ZC——平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)上的細(xì)菌菌落數(shù)之和；n?——第一稀釋度(低稀釋信數(shù))平板個(gè)數(shù)：n?——第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù)d——稀釋因子(第一稀釋度)。5.2.2.4若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于300CFO,則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。者所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于30CFU,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。5.2.2.5若所有稀釋度平板均無南落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。當(dāng)菌落數(shù)在100以內(nèi)，按實(shí)有數(shù)據(jù)報(bào)告，大于100時(shí)采用一位有效數(shù)字。5.3大腸菌群檢測方法5.3.1操作步驟取樣液5mL接種50mL,乳糖膽鹽發(fā)酵管，置35℃二2℃培養(yǎng)24h,如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報(bào)告為大腸菌群陰性。如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊藍(lán)京脂平版，置3℃±28h～24h,觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或色，網(wǎng)形，邊緣整齊，表面光滑濕涌，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。取疑似菌落1～2個(gè)作革蘭氏集色鏡檢，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，35℃±2℃培養(yǎng)24h,觀察產(chǎn)氣情況。5.3.2結(jié)果報(bào)告凡乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍(lán)平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，可報(bào)告被檢樣品檢出大腸菌群。5.4銅綠假單胞菌檢測方法5.4.1操作步驟取樣液10mL,加入到90mL,SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h。如有銅綠假單胞菌生長，培養(yǎng)液表層呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍(lán)綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷三甲基溴化銨瓊脂平板，置35℃±2℃培養(yǎng)18h～24h,觀察菌落特征。銅綠假單胞菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不長。取可疑菌落涂片作革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn)：4氧化酶試驗(yàn)：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻璃棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對(duì)苯二胺試液，30s內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗(yàn)陽性，不變色者為陰性。也可用商品化的試劑，按說明書操作進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。綠膿菌素試驗(yàn)；取2～3個(gè)可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面，35℃±2℃培養(yǎng)24h,加入三氯甲烷3mL～5mL,充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待三氯甲烷呈藍(lán)色時(shí)，用吸管移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL,振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)：挑取被檢菌落純培養(yǎng)物接種在硝酸鹽胨水培養(yǎng)基中，置35℃±2℃培養(yǎng)24h,培養(yǎng)基小倒管中有氣者即為陽性。明膠液化試驗(yàn)：取可疑菌落純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置35℃±2℃培養(yǎng)24h,取出放于4℃~10℃,如仍呈液態(tài)為陽性，凝固者為陰性。42℃生長試驗(yàn)：取可疑培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置42℃培養(yǎng)24h～48h,有銅綠假單胞菌生長為陽性。5.4.2結(jié)果報(bào)告被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)均為陽性者，即可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。如綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗(yàn)三者皆為陽性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出銅綠假單胞菌。5.5金黃色葡萄球菌檢測方法5.5.1操作步驟取樣液10mL,加入到90mLSCDLP培養(yǎng)液中，充分混均，置35℃±2℃培養(yǎng)24h。自上述增菌液中取1～2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，置35℃±2℃培養(yǎng)24h～48h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑。周圍有溶血圈。挑取典型菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽胞與莢膜。鏡檢符合上述情況，應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn)：甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：上述菌落接種在甘露醇培養(yǎng)液中，置35℃±2℃培養(yǎng)24h,發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者陽性。血漿凝固酶試驗(yàn)：玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿，挑取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5min如血漿內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均為無凝固則為陰性。凡玻片試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進(jìn)行試管凝固酶試驗(yàn)；試管法：吸取1:4新鮮血漿0.5mL,放入滅菌小試管中，加入等量待檢菌24h肉湯培養(yǎng)液0.5mL?；靹蚍?5℃±2℃溫箱或水浴中，每半小時(shí)觀察一次，24h之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基各0.5mL作為對(duì)照。5.5.2結(jié)果報(bào)告凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性者，可報(bào)告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。5.6溶血性鏈球菌檢測方法5.6.1操作步驟取樣液10mL加人到90mL葡萄糖肉湯，35℃±2℃培養(yǎng)24h。5將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平板，35℃±2℃培養(yǎng)24h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陽性，呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，應(yīng)進(jìn)行下列試驗(yàn)：鏈激酶試驗(yàn)：吸取草酸鉀血漿0.2mL(0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液),加入0.8mL滅菌生理鹽水，混勻后再加入待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5mL和0.25%氯化鈣0.25mL,混勻，放35℃±2℃水溶中，2min觀察一次(一般10min內(nèi)可凝固),待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時(shí)間。如2h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置24h觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24h仍不溶化為桿菌肽敏感試驗(yàn)：將被檢菌菌液涂于血平板上，用滅菌鑷子取每片含0.04單位桿菌肽的紙片放在平板表面上，同時(shí)以已知陽性菌株作對(duì)照，在35℃±2℃下放置18h～24h,有抑菌帶者為陽性。5.6.2結(jié)果報(bào)告鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血圈，鏈激酶和桿菌肽試驗(yàn)陽性，可報(bào)告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。培養(yǎng)基和試劑的配制遵循SN/T1538.1和SN/T1538.2的要求。5.7真菌菌落總數(shù)檢測方法5.7.1操作步驟從上述生理鹽水樣液中取上清液作真菌計(jì)數(shù)。共接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1mL樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的沙氏瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基20mL～25mL倒入每個(gè)平皿內(nèi)混合均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置25℃±2℃培養(yǎng)7d,分別于第3、5、7天觀察，計(jì)算平板上的菌落數(shù)，如果發(fā)現(xiàn)菌菌落呈片狀生長的平板不宜采用；計(jì)數(shù)符合要求的平板上的菌數(shù)，按式(2)計(jì)算結(jié)果：X?=B×K/5 (2)B——5塊平板上的真菌菌落總數(shù)之和；如果樣品菌落總數(shù)超過本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，按5.7.3進(jìn)行復(fù)檢和結(jié)果報(bào)告。5.7.3復(fù)檢方法將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測2次，2次結(jié)果都達(dá)到本標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何1次結(jié)果超過本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。5.8沙門氏菌定性檢測方法起始檢驗(yàn)樣品量為20g,按GB4789.4進(jìn)行沙門氏菌檢驗(yàn)。66檢驗(yàn)規(guī)則布匹至少距布端2m,以上無菌操作取樣，樣品尺寸為長度不小于0.5m的整幅寬；服裝或制品的取樣數(shù)量應(yīng)滿足試驗(yàn)需要，抽取樣品后立即把樣品放進(jìn)經(jīng)消毒殺菌的密封袋密封，并盡快送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)從每一檢驗(yàn)批中按品種、顏色隨機(jī)抽取代表性樣品，于同一批號(hào)的三個(gè)運(yùn)輸包裝中至少抽取12個(gè)最小銷售包裝樣品，1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣，另1/2樣品(可就地封存)必要時(shí)用于復(fù)檢參考。抽樣的最小銷售包裝不應(yīng)有確礎(chǔ)檢驗(yàn)前不得啟開。6.2樣品的貯存和運(yùn)輸采樣后，應(yīng)將樣品在接近原有比存溫度條件下盡快送往實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。運(yùn)輸時(shí)應(yīng)保持樣品完整。如6.3結(jié)果判定根據(jù)紡織產(chǎn)品基本安全要求類，對(duì)照表1評(píng)定(其他安全項(xiàng)目等根據(jù)合同或協(xié)議對(duì)照相關(guān)附錄的規(guī)定評(píng)定)。如果樣品的測試結(jié)果符合表/1的要求(含有2種及以上組件的樣品，每種組件均符合表1的要求),則判定該批產(chǎn)品的基下安全性能(或其他安全性能等)合格。如果樣品的測試結(jié)果有一項(xiàng)果答格，則州定該樣品所代表的品種或顏色的產(chǎn)品的基本安全性能(或其他安全性能等)不合格，同批中的其他品種或顏色不受此品種或顏色不合格的影響。6.4對(duì)不合格批的處理本標(biāo)準(zhǔn)系一次抽樣檢驗(yàn)，當(dāng)進(jìn)行檢驗(yàn)，復(fù)驗(yàn)結(jié)果不作為最終,僅作參考。出口紡織產(chǎn)品料需經(jīng)過滅菌處理后再行使用。試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括下列內(nèi)容：a)試樣完整的識(shí)別標(biāo)記；b)試驗(yàn)方法；c