關(guān)于血液透析對尿毒癥患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響

關(guān)于血液透析對尿毒癥患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響

周韻嬌牛建英錢英俊李鵬吳青【摘要】目的探討血液透析對尿毒癥患者外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的影響及其可能的機(jī)制。方法采用流式細(xì)胞術(shù)檢測53例尿毒癥患者和23例正常體檢者(對照組)的外周血淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)，并對其中的26例維持性血透患者單次血液透析前后外周血淋巴細(xì)胞亞群的百分?jǐn)?shù)進(jìn)行檢測。結(jié)果尿毒癥患者外周血CD3+CD4+細(xì)胞以及CD4/CD8比值均高于正常對照組(P<0.05)，而CD3-CD19+細(xì)胞數(shù)量明顯低于正常對照組(P<0.05)，以維持性血透患者的改變更為明顯;血透患者透析后外周血淋巴細(xì)胞亞群除CD3+細(xì)胞外，均較透析前有明顯改變，表現(xiàn)為CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)量以及CD4/CD8比值的升高，CD3+CD8+、CD3-CD19+和NK細(xì)胞數(shù)量的減少(P<0.05)。結(jié)論尿毒癥患者細(xì)胞免疫功能紊亂，T細(xì)胞亞群失衡;血液透析對尿毒癥患者的外周血淋巴細(xì)胞亞群存在較大影響，血液透析并不能完全改善尿毒癥患者的細(xì)胞免疫功能。【關(guān)鍵詞】尿毒癥;血液透析;淋巴細(xì)胞亞群;流式細(xì)胞術(shù)[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofhemodialysisonchangesoflymphocytesubsetsinpatientswithuremiaanditsmechanism.MethodsThepercentageoflymphocytesubsetsfrom53patientswithuremiaand23normalcontrolswererecorded.ResultsComparedwithnormalcontrols，percentageofCD4-positivelymphocytesandtheratioofCD4-positiveandCD8-positivelymphocytessignificantlyelevated(P<0.05)，whilepercentageofCD19-positivelymphocytesweresignificantlyreduced(P<0.05)，especiallyinpatientswithmaintenancehemodialysis;thepercentageofCD4-positivelymphocytesandtheratioofCD4-positiveandCD8-positivelymphocytesweresignificantlyelevatedwhileCD8-positive，CD19-positiveandNKwerereduced(P<0.05all)afterasingleHDsession.ConclusionThecellularimmunefunctionwasabnormalandTcellwasimbalancedinpatientswithuremia;hemodialysishasagreatimpactonlymphocytesubsetsinperiphralandcan'timprovethecellularimmunefunctioncompletely.[Keywords]uremia，hemodialysis，lymphocytesubsets，flowcytometer免疫功能紊亂是尿毒癥患者易并發(fā)感染、腫瘤等疾病的主要原因，免疫病理損傷所致的腎臟損害是其演變?yōu)榻K末期腎功能衰竭的重要因素之一，國內(nèi)外眾多學(xué)者對尿毒癥患者的免疫狀況進(jìn)行了研究和探討，但所得的結(jié)論差異較大。本文通過檢測53例尿毒癥患者和26例維持性血透患者單次透析前后的外周血淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量，探討尿毒癥患者細(xì)胞免疫功能的改變和血液透析對維持性血透患者外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的影響及其可能的機(jī)制。1資料與方法1.1研究對象收集2011年3—12月本院就診的尿毒癥患者53例，其中男27例，女26例;年齡26~77歲。將其分為尿毒癥未透析組(Non-hemodialysis，NHD)27例和尿毒癥血液透析組(Hemodialysis，HD)26例，HD組均為維持性血透患者透析治療2~5年，每周透析3次，每次為4~5h。同時(shí)選取23例健康體檢者，其年齡、性別與試驗(yàn)組相似，差異無顯著性。1.2試劑與儀器1.2.1試劑雙色淋巴細(xì)胞亞群分析檢測試劑盒(抗體組成為CD3/CD4、CD3/CD8、CD3/CD19、CD3/CD16+56、IgG1/IgG2a、CD45/CD14，均為FITC/PE雙色標(biāo)記)購自美國Becton-Dickinson(BD)公司，溶血素和熒光微球購自BeckmanCoulter公司。1.2.2儀器BeckmanCoulterEpicsXL流式細(xì)胞分析儀。1.3方法所有患者與正常體檢者于清晨空腹靜脈采血2ml(肝素抗凝)，充分顛倒混勻，其中，NHD組在首次透析前空腹靜脈采血，HD組于透析后再次采集靜脈血2ml(肝素抗凝)。根據(jù)試劑盒說明書，將不同組成的熒光抗體與抗凝血在室溫下避光孵育20min，加入溶血素，充分混勻后置37℃避光孵育10min，混勻待測。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，HD組透析前后的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用配對t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有顯著性。2結(jié)果2.1對照組、NHD組和HD組外周血淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果與對照組相比，尿毒癥患者CD3+細(xì)胞百分率的變化差異無顯著性，但有上升趨勢，CD3+CD4+細(xì)胞百分率以及CD4/CD8比值顯著增高(P<0.05)，以HD患者的升高更為明顯;而CD3-CD19+細(xì)胞百分率明顯減少(P<0.05)，CD3+CD8+細(xì)胞和NK細(xì)胞百分率差異無顯著性(P>0.05)，結(jié)果見表1。2.2HD患者單次血液透析前、后外周血淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)，HD患者透析后與透析前相比，CD3+CD4+細(xì)胞、CD3-CD19+細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD4/CD8比值明顯升高(P<0.05)，而CD3+CD8+和NK細(xì)胞百分率明顯下降(P值均<0.05)，結(jié)果見表2。表1正常對照組與尿毒癥患者外周血淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較表2尿毒癥血透患者透析前、后外周血淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較3討論尿毒癥患者常有多器官、多系統(tǒng)的病理損傷，免疫病理損傷所致的腎臟損害是其演變?yōu)榻K末期腎功能衰竭的重要因素之一[1];在以往的關(guān)于尿毒癥患者外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量改變的研究認(rèn)為，尿毒癥患者存在不同程度的細(xì)胞免疫功能紊亂，至于血液透析能否改善這一狀態(tài)的報(bào)道卻結(jié)論不一。有研究認(rèn)為[2]，尿毒癥患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化較正常對照差異無顯著性，CD4+細(xì)胞亞群中Th2細(xì)胞占優(yōu)勢，Th1/Th2細(xì)胞比值顯著降低，而NK細(xì)胞百分?jǐn)?shù)明顯增高，長期血透并不能改善這一變化;另有研究表明[3]，尿毒癥患者淋巴細(xì)胞免疫功能下降，血液透析可以明顯改善尿毒癥患者細(xì)胞免疫功能。淋巴細(xì)胞是人體內(nèi)最主要的免疫活性細(xì)胞，T淋巴細(xì)胞是淋巴細(xì)胞中的主要細(xì)胞亞群，是細(xì)胞免疫和免疫調(diào)節(jié)的主要執(zhí)行者，其數(shù)量和活性的改變是機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。CD4+和CD8+細(xì)胞作為T淋巴細(xì)胞的兩個(gè)亞群，其平衡是維持和調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的中心環(huán)節(jié)，兩者的升高與降低，均可使其比例失調(diào)，導(dǎo)致機(jī)體免疫功能的異?；蛭蓙y，從而發(fā)生一系列病理改變。通過檢測尿毒癥患者外周血淋巴細(xì)胞亞群的數(shù)量和維持性血透患者單次透析前后外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量的改變，旨在探討尿毒癥患者細(xì)胞免疫功能紊亂的可能機(jī)制以及血液透析對外周血淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量改變的影響，從而為臨床診治提供參考依據(jù)。本研究表明，尿毒癥患者無論是維持性血透患者還是非血透患者，CD3+細(xì)胞數(shù)量的改變較正常對照組比較差異無顯著性，但其中的兩個(gè)亞群：CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)量明顯增多(P<0.05)，CD3+CD8+細(xì)胞數(shù)量的改變雖差異無顯著性，但有下降趨勢;CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)量的增加導(dǎo)致CD4/CD8比值的升高，發(fā)生比例失調(diào)。說明尿毒癥患者存在T淋巴細(xì)胞亞群功能紊亂，該結(jié)果證實(shí)了此前一些學(xué)者的研究[1]。維持性血透患者，透析治療對外周血淋巴細(xì)胞亞群的影響較大，除CD3+細(xì)胞數(shù)量的改變沒差異無顯著性外，CD3+CD4+細(xì)胞均較透析前明顯增加，CD3+CD8+細(xì)胞明顯減少，CD3+CD4+細(xì)胞的增加和CD3+CD8+細(xì)胞的減少使得CD4/CD8比值升高;還發(fā)現(xiàn)，尿毒癥患者細(xì)胞免疫功能的紊亂在HD患者中表現(xiàn)得更為突出，CD3+CD4+細(xì)胞數(shù)量的增加和CD4/CD8比值的改變較NHD患者更為明顯，這可能是由于透析液及透析膜刺激機(jī)體的結(jié)果，此研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道部分相同[4]。而Yoshihiro等[5]的研究認(rèn)為，維持性血透患者外周血CD4+細(xì)胞數(shù)量減少和CD8+細(xì)胞數(shù)量增加，在增加的CD4+細(xì)胞中，發(fā)生了Th1/Th2平衡的改變，以Th2細(xì)胞占優(yōu)勢。本研究結(jié)果不同于一些學(xué)者的結(jié)果可能是由于入選病例的原發(fā)病類型、實(shí)驗(yàn)方法以及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法的差異造成的。CD19分子是B淋巴細(xì)胞的表面標(biāo)志，與B細(xì)胞的活化和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān);還與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，其表達(dá)水平的增高，是機(jī)體啟動(dòng)免疫系統(tǒng)反應(yīng)以對抗炎癥反應(yīng)的一種自身保護(hù)反應(yīng)[6]。B淋巴細(xì)胞作為體內(nèi)的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，在抗原的刺激下產(chǎn)生特異性抗體，介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答。有研究表明[7]，尿毒癥患者機(jī)體處于微炎癥狀態(tài)，血液透析促進(jìn)了炎癥因子的釋放，較透析前濃度明顯升高。本研究顯示，尿毒癥患者外周血B淋巴較正常對照組明顯減少(P<0.05)，CD19分子表達(dá)水平減低，導(dǎo)致機(jī)體對抗炎癥反應(yīng)能力下降，對抗原刺激的反應(yīng)性減低，無法產(chǎn)生足夠量的抗體，這可能是尿毒癥患者易并發(fā)感染和腫瘤的原因之一。經(jīng)過血液透析治療后，B淋巴細(xì)胞的數(shù)量較透析前明顯升高(P<0.05)，CD19分子表達(dá)水平上升，機(jī)體啟動(dòng)免疫系統(tǒng)反應(yīng)以對抗炎癥因子的釋放，同時(shí)機(jī)體對抗原刺激的反應(yīng)性得以改善，這也進(jìn)一步證明了CD19分子與炎癥反應(yīng)相關(guān)。自然殺傷細(xì)胞(naturalkillercell，NK)是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，它無需抗原刺激，就能非特異性殺傷腫瘤和病毒感染的靶細(xì)胞，具有抗感染、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)的作用，在某些情況下參與超敏反應(yīng)和自身免疫性疾病的發(fā)生。本研究表明，維持性血透患者經(jīng)過血液透析治療后，NK細(xì)胞的數(shù)量較透析前明顯下降(P<0.05)，這可能也是導(dǎo)致HD患者抵抗力低下，易并發(fā)各種感染和腫瘤，引起終末期腎功能衰竭的原因之一。尿毒癥患者的細(xì)胞免疫功能紊亂，一方面可能與尿毒癥患者自身體內(nèi)存在尿毒癥毒素以及代謝產(chǎn)物有關(guān);另一方面可能與原發(fā)病本身存在某種程度上的細(xì)胞免疫功能紊亂有關(guān)。本研究表明，尿毒癥患者存在細(xì)胞免疫功能紊亂，T淋巴細(xì)胞中的兩個(gè)亞群比例明顯失調(diào)，從而破壞了機(jī)體免疫系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定性，這可能是加重腎臟損害的因素之一;血液透析治療對改變尿毒癥患者的細(xì)胞免疫狀態(tài)影響較大;對尿毒癥患者以及維持性血透患者定期進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞亞群的檢測，有助于了解患者細(xì)胞免疫的狀況，為探討病理機(jī)制提供一定的參考依據(jù)。2李彪，湯天青，許曉東，等.尿毒癥患者淋巴細(xì)胞亞群改變的研究.中國血液凈化，2006，5(5):248-251.3魏云玉，黃紅宇，陸紅兵，等.流式細(xì)胞術(shù)檢測尿毒癥患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的臨床應(yīng)用.職業(yè)與健康，2008，24(7):631-632.4史丹，賈汝漢，方輝，等.血液透析對尿毒癥患者紅細(xì)胞免疫功能和T細(xì)胞亞群的影響及其相關(guān)分析.JournalofChinesePhysician，2005，7(2):198-200.5GemaFF，MariaAR，MariaconsueloGP，etal.B