慶大霉素鼓室給藥進入內(nèi)耳的途徑及對內(nèi)耳功能影響的研究

慶大霉素鼓室給藥進入內(nèi)耳的途徑及對內(nèi)耳功能影響的研究第一部分慶大霉素-德克薩斯紅局部給藥后內(nèi)耳藥代動力學的研究目的：鼓室內(nèi)局部給藥(GTTR)后通過水平半規(guī)管外淋巴液采樣了解藥物在外淋巴液中的藥代動力學變化,探究GTTR進入內(nèi)耳的途徑。方法：成年豚鼠中耳內(nèi)給予50u1不同溶劑配制的GTTRt(0.2mg/ml)溶液,一小時后外半規(guī)管造瘺,從瘺口連續(xù)采集外淋巴液；檢測不同樣本光密度來計算藥物濃度,觀察藥物代謝情況,并通過模型模擬內(nèi)耳淋巴液流動的生理過程比較藥物進入途徑,并觀察不同試劑對藥物濃度的影響。結(jié)果：1)中耳局部給藥后藥物可通過圓窗膜和卵圓窗即鐙骨區(qū)進入內(nèi)耳,59.8%的GTTR通過圓窗膜滲透進入,而從鐙骨區(qū)直接到達內(nèi)耳的占40.2%。2)二甲基亞砜(DMSO)和苯甲醇(Benzyl)均使更多的藥物進入內(nèi)耳,提高了內(nèi)耳藥物濃度。DMSO組圓窗進入占56.0%,鐙骨區(qū)44.0%；Benzyl組89.4%藥物通過圓窗徑路,鐙骨區(qū)10.6%。結(jié)論：1)圓窗膜、鐙骨區(qū)均為藥物進入內(nèi)耳的途徑,其中圓窗膜為主要途徑；2)不同藥物進入途徑有差別,具有藥物選擇性,且通透性受不同藥物的影響很大。對于GTTR圓窗進入占59.8%,鐙骨區(qū)為40.2%。二甲基亞砜對圓窗膜和鐙骨區(qū)均有影響,對鐙骨區(qū)的影響更大,而苯甲醇對圓窗膜滲透性影響更大。第二部分慶大霉素-德克薩斯紅圓窗或卵圓窗給藥后在內(nèi)耳分布的的研究目的：通過圓窗、卵圓窗分別給藥,觀察GTTR在內(nèi)耳不同器官的分布,探究藥物進入內(nèi)耳的途徑。方法：成年豚鼠耳后入路,分別在圓窗、鐙骨區(qū)給予浸有4ulGTTR(0.4mg/ml)的膠原海綿,給藥后7天處死,多聚甲醛蝸尖灌注固定、取材,行免疫熒光染色(AlexaFluor(?)488Phalloidin標記毛細胞,DAPI標記細胞核),了解GTTR的在內(nèi)耳不同部位的分布情況；激光共聚焦熒光顯微鏡觀察并采集圖像,AdobephotoshopCS5處理圖片,ImageJ軟件對共聚焦顯微鏡圖像進行熒光半定量分析,SPSS19.0進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：圓窗組及卵圓窗組GTTR在球囊斑的聚集均最高。圓窗組中基底膜底圈毛細胞中GTTR熒光強度高于橢圓囊斑和壺腹嵴；而卵圓窗組中壺腹嵴GTTR的分布要多于基底膜和橢圓囊。通過熒光半定量分析各器官整體鋪片中GTTR熒光強度,圓窗組各終末器官中的GTTR分布均高于卵圓窗組。結(jié)論：GTTR在圓窗或卵圓窗局部給藥后,在內(nèi)耳終末器官的分布存在差異性。兩種給藥方式在內(nèi)耳各終末器官均有分布,且圓窗組藥物進入多于卵圓窗組。GTTR在球囊斑的聚集最高。第三部分慶大霉素圓窗或卵圓窗給藥后在耳蝸的分布及對聽力影響的研究目的：探索慶大霉素鼓室給藥后進入內(nèi)耳的途徑,比較圓窗、卵圓窗(鐙骨區(qū))分別給藥對聽力的影響,指導(dǎo)臨床用藥。方法：成年豚鼠術(shù)前行ABR測試后耳后入路暴露圓窗、鐙骨區(qū),分別在圓窗、鐙骨區(qū)給予浸有4u1慶大霉素((GT)(30mg/ml)的膠原海綿,給藥后1天、7天分別行ABR測試,并在7天后處死,多聚甲醛蝸尖灌注固定、取材,行免疫熒光染色(anti-gentamicin標記慶大霉素,AlexaFluor(?)488Phalloidin標記毛細胞,DAPI標記細胞核),了解慶大霉素的在耳蝸的分布情況；激光共聚焦熒光顯微鏡觀察并拍照,AdobephotoshopCS5處理圖片,ImageJ軟件測對共聚焦顯微鏡圖像進行熒光半定量分析,SPSS19.0進行統(tǒng)計分析。結(jié)果：1慶大霉素圓窗、卵圓窗局部給藥后7天,圓窗組8kHz-32kHz閡值均不同程度地升高,以高頻聽力損失較為顯著,與術(shù)前相比差異有統(tǒng)計學意義。卵圓窗組聽力在8kHz-32kHz基本無改變,32kHz出現(xiàn)聽力出現(xiàn)損失,與術(shù)前相比差異不顯著。圓窗組較卵圓窗組相比聽力損失較為嚴重,8kHz兩組無統(tǒng)計學差異,16kHz,24kHz,32kHz兩組有顯著性差異(P<0.01)。2)GT局部給藥7天后圓窗組及卵圓窗組在耳蝸基底膜均有分布,主要分布在外毛細胞,底圈分布多于中圈,且可見毛細胞的缺失。結(jié)論：1)慶大霉素圓窗給藥對聽力的影響較鐙骨區(qū)給藥顯著,以高頻聽力損失為主；2)藥物進入內(nèi)耳后對耳蝸毛細胞毒性作用受藥物濃度影響。第四部分小劑量慶大霉素鼓室內(nèi)注射治療難治性眩暈對聽力及球囊功能影響的臨床研究目的：從動物實驗和臨床研究兩方面探究慶大霉素局部給藥后對聽力和前庭功能的影響,指導(dǎo)臨床用藥。方法：回顧性分析我科2012年5月-2013年5月年行顯微鏡下鼓室內(nèi)注射慶大霉素(30mg/m1)治療的17例單側(cè)難治性眩暈患者,于術(shù)前及術(shù)后3周分別行純音測聽檢查及cVEMP檢查。比較術(shù)前術(shù)后患者聽力及cVEMP結(jié)果。結(jié)果：17例難治性眩暈患者隨訪12個月-24個月,術(shù)后隨訪至今未訴眩暈復(fù)發(fā)。2例遲發(fā)型膜迷路積水患者患側(cè)耳全聾,15例梅尼埃病患者中術(shù)前患耳平均氣導(dǎo)聽閾為63.8dBHL,術(shù)后患側(cè)耳平均氣導(dǎo)為64.4dBHL,手術(shù)前后聽力差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。cVEMP檢查結(jié)果,2例術(shù)前VEMP未引出,15例術(shù)前VEMP患側(cè)平均閾值為(82.5±5.59)dBnHL,P1平均潛伏期為(16.64±2.38)ms。術(shù)后7例(41.2%)VEMP未引出,其他10例VEMP患側(cè)平均閾值為(89±4.90)dBnHL,P1平均潛伏期為(18.52±1.62)ms?？?/p>