消融聯(lián)合瘤周注射免疫佐劑誘導(dǎo)小鼠抗肝癌主動免疫效應(yīng)系列研究

消融聯(lián)合瘤周注射免疫佐劑誘導(dǎo)小鼠抗肝癌主動免疫效應(yīng)系列研究第一部分：不同溫度熱消融小鼠皮下移植性肝癌的實驗研究目的：通過對小鼠皮下移植性肝癌進(jìn)行不同溫度的熱生理鹽水消融,觀察小鼠生存時間、肝癌體積大小、消融灶內(nèi)免疫細(xì)胞及熱休克蛋白的變化,探討誘導(dǎo)有效免疫反應(yīng)的合適消融溫度。方法：共120只C57BL/6J小鼠皮下種瘤成功后,隨機分為50℃、60℃、70℃、100℃及對照組共5組,每組24只；7-12天后,腫瘤長徑、短徑約6～8mm時進(jìn)行實驗,在各組小鼠的皮下瘤內(nèi)按各組溫度注射不同溫度熱生理鹽水0.15m1進(jìn)行消融,每組各取6只觀察小鼠生存時間,6只于第15日觀察腫瘤大小變化及取下腫瘤標(biāo)本做HE染色,同時計算肝癌殘留率,6只于消融后第72小時取腫瘤標(biāo)本做免疫組化CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞數(shù)兩項指標(biāo)檢測,6只于消融后第24小時取腫瘤標(biāo)本做免疫組化HSP70單項指標(biāo)檢測。結(jié)果：①小鼠生存時間：各組小鼠生存時間不全相等(P<0.05),50℃組生存時間較長,對照組最短。②腫瘤體積大小變化：各消融組體積均顯著小于對照組(P<0.05)；與消融前腫瘤體積比較,50℃組是唯一一組較消融前腫瘤明顯縮小的組別(P<0.05)。③HE染色結(jié)果：經(jīng)HE染色證實,對照組標(biāo)本中無腫瘤細(xì)胞壞死,肝癌殘留率為100%；50℃組中1個標(biāo)本可見腫瘤細(xì)胞殘留,肝癌殘留率為16.7%；剩余三組中每組2個標(biāo)本可見腫瘤細(xì)胞殘留,肝癌殘留率為33.3%。④免疫組化結(jié)果：50℃組CD4+細(xì)胞數(shù)量顯著高于其它各組(P<0.05),CD8+細(xì)胞50℃組與對照組之間無顯著差異(P>0.05),但高于其它熱消融組(P<0.05)；50℃C組CD4+/CD8+比值升高最為明顯；HSP70標(biāo)記指數(shù)熱消融組均顯著高于對照組(P<0.05),標(biāo)記指數(shù)在各組中隨溫度升高而降低,即50℃組最高,對照組最低。結(jié)論：在熱生理鹽水消融皮下移植性肝癌的動物實驗中,50℃左右的消融溫度可能更有利于誘導(dǎo)產(chǎn)生更為強烈的主動免疫效應(yīng)。第二部分：熱消融聯(lián)合消融灶周邊注射CpGODN對小鼠肝癌生長抑制作用的研究目的探討熱消融聯(lián)合消融灶周邊注射CpGODN治療對小鼠肝癌的影響以及繼發(fā)免疫效應(yīng)的抗腫瘤效果。方法建立Hepal-6小鼠皮下肝癌動物模型,隨機分為100℃熱消融治療組,100℃熱消融聯(lián)合CpGODN治療組、CpGODN治療組和對照組,8只于接種腫瘤細(xì)胞后第7天、第14天給予治療,測量小鼠腫瘤體積,觀察荷瘤小鼠存活情況及消融灶內(nèi)淋巴細(xì)胞和HSP70變化,另8只第7天給予治療,30d后對側(cè)接種等量腫瘤細(xì)胞,1月后處死,觀察小鼠生存狀況及對側(cè)種瘤生長情況結(jié)果①各實驗組小鼠觀察期內(nèi)死亡率均低于對照組(P<0.05),各實驗組對側(cè)均無腫瘤生長,對照組再接種腫瘤生長率為100%(3/3),兩者相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；②各實驗組小鼠與對照組相比,腫瘤體積顯著縮小(P<0.05),聯(lián)合治療組腫瘤縮小更顯著；③各實驗組較對照組有較多淋巴細(xì)胞浸潤(P<0.05),聯(lián)合治療組數(shù)量最多；④各實驗組與對照組相比有更多HSP70表達(dá)(P<0.05),聯(lián)合治療組HSP70表達(dá)最多,與其余實驗組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論CpGODN對荷瘤小鼠具有明顯的免疫增強作用,CpGODN聯(lián)合熱消融能有效的治療小鼠肝癌,且能有效的減少復(fù)發(fā)第三部分：瘤內(nèi)注射MIP-3α對小鼠肝癌生長抑制作用的研究目的探討巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-3a(MIP-3a)能否在小鼠皮下肝癌灶內(nèi)趨化、募集外周的樹突狀細(xì)胞(DCs),使之在原位有效地攝取并提呈腫瘤抗原,誘導(dǎo)針對肝癌細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答,以達(dá)到控制腫瘤進(jìn)展的目的。方法成功建立小鼠皮下肝癌模型后隨機分為3組,第10天起分別向MIP-3α治療組、PBS對照組小鼠皮下腫瘤內(nèi)注射MIP-3α溶液(含MIP-3α0.2μm)及PBS100μl,空白對照組小鼠不予任何處理。20天后取腫瘤組織,免疫組化法檢測腫瘤內(nèi)DCs、CD4+、CD8+細(xì)胞浸潤情況,流式細(xì)胞術(shù)檢測腫瘤內(nèi)DCs浸潤數(shù)量及其表型。另取部分小鼠建立模型,分組、治療方法同前,治療實驗結(jié)束后持續(xù)觀察,繪制腫瘤生長曲線并觀察生存時間。結(jié)果①MIP-3α治療組小鼠腫瘤內(nèi)浸潤的CD4+、CD8+細(xì)胞及DCs數(shù)量均顯著高于其他兩組。②MIP-3α治療組小鼠腫瘤內(nèi)浸潤性DCs的CD80、CD86表達(dá)率顯著高于其他兩組(P<0.05)。③MIP-3α治療組小鼠腫瘤生長速率顯著低于對照組(p<0.001),生存時間較對照組明顯延長(p<0.05)。結(jié)論①瘤