煙花爆竹 特定化學(xué)物質(zhì)檢測(cè)方法 第12部分：苦味酸含量的測(cè)定 高效液相色譜法 征求意見稿

1GB/TXXXXX—202X煙花爆竹特定化學(xué)物質(zhì)檢測(cè)方法第12部分：苦味酸含量的測(cè)定高效液相色譜法本文件規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定煙花爆竹煙火藥中苦味酸和苦味酸鹽含量。本文件適用于煙花爆竹煙火藥中苦味酸和苦味酸鹽含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/TXXXXX.1煙花-特定化學(xué)物質(zhì)的檢測(cè)方法-第1部3術(shù)語(yǔ)和定義GB/TXXXXX.1中界定的術(shù)語(yǔ)和定義4方法原理用熱水提取煙火藥中的苦味酸（C6H2-OH）或苦味酸鹽（C6H2-OR，R為金屬或有機(jī)陽(yáng)離子），釋放苦味酸陰離子（C6H2-O-1）酸性條件下通過(guò)高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定，根據(jù)保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。5試劑和材料除特殊規(guī)定外，應(yīng)使用分析純?cè)噭⒄麴s水或去離子水或同等純度的水。。5.1標(biāo)準(zhǔn)苦味酸：純度99%。5.2鹽酸：ρ=1.19g/ml。5.3冰醋酸：含水量小于1%。5.4甲醇：色譜純(≥99.9%)。5.5苦味酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：使用分析天平（6.2）稱量適量標(biāo)準(zhǔn)苦味酸，并用甲醇（5.4）制備100μg/ml儲(chǔ)備溶液。將溶液在低溫（4°C）下保存。5.60.1%冰醋酸溶液：將1ml冰醋酸（4.3）溶于1000ml水中。實(shí)驗(yàn)室操作應(yīng)符合易燃易爆材料和樣品以及強(qiáng)酸和有毒材料的適當(dāng)安全要求。操作員應(yīng)穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)設(shè)備，并遵守適當(dāng)?shù)陌踩?guī)則。應(yīng)對(duì)突發(fā)事件或無(wú)法控制的反應(yīng)采取特殊措施。6儀器及設(shè)備2GB/TXXXXX—202X6.1高效液相色譜儀：帶二極管陣列檢測(cè)器或等效物。6.2分析天平：精度0.1mg。6.3離心機(jī)：≥3000rpm。6.4超聲波混勻器。6.5刻度離心管：10ml。6.6微量移液管。6.7有機(jī)濾膜：0.45μm。6.8刻度吸管：10ml。6.9容量瓶：25ml。7樣品制備按GB/TXXXXX.1制備樣品。8程序8.1樣本量用分析天平（6.2）稱取0.5g樣品。8.2提取用分析天平（6.2）稱取0.5g樣品于10ml離心管（6.5）中，加入5ml熱水，用超聲波混勻器（6.4）處理40min,用離心機(jī)（6.3）處理2min。用刻度吸管（6.8）吸取上清液。重復(fù)提取3次，然后將3次提取的上清液合并到容量瓶中（6.9），定容并搖勻，再用有機(jī)濾膜（6.7）過(guò)濾后制成樣品溶液。8.3HPLC設(shè)置如下所示：a)親水柱（HILIC）：C18柱（4.6×250mm，5μm）或同等柱。b)升溫程序：恒溫或程序升溫模式。c)流動(dòng)相：甲醇（4.4）-0.1%冰醋酸溶液（4.655:45，體積比）。d)流速：0.8ml/min。e)樣本量：10μl。f)檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm。8.4定性分析用微量移液管（6.6）吸取10μl樣品溶液（8.2），注入高效液相色譜儀（6.1）的色譜柱中。根據(jù)基于保留時(shí)間一致性的定性鑒別方法，記錄分析物在檢測(cè)波長(zhǎng)（8.3f）下離開色譜柱（6.1）產(chǎn)生的響應(yīng)，即“色譜圖”，并通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留時(shí)間比較，檢測(cè)苦味酸陰離子的特征保留時(shí)間是否出現(xiàn)峰值（見附錄a）。如在適當(dāng)?shù)谋Ａ魰r(shí)間出現(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)樣品中相似的特征峰，證明樣品溶液中存在苦味酸陰離子，即煙火藥樣品中存在苦味酸或苦味酸鹽。8.5定量測(cè)定8.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線3GB/TXXXXX—202X用甲醇（4.4）稀釋苦味酸（4.5）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液至適當(dāng)濃度，制備5份苦味酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的稀釋溶液。濃度值應(yīng)在0至50%或高于樣品預(yù)期濃度的區(qū)間內(nèi)獲取。使用高效液相色譜儀（5.1）記錄苦味酸稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。計(jì)算苦味酸陰離子對(duì)應(yīng)的峰下面積。用苦味酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度橫坐標(biāo)和峰面積縱坐標(biāo)繪制圖表中苦味酸稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的點(diǎn)。繪制連接所有這些點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液中苦味酸的響應(yīng)值應(yīng)在色譜儀的檢測(cè)范圍內(nèi)呈線性，表明面積與濃度成正比：直線應(yīng)穿過(guò)峰值響應(yīng)與濃度圖的原點(diǎn)。8.5.2樣品溶液色譜圖在色譜圖（8.4）中苦味酸陰離子的特征保留時(shí)間檢測(cè)到峰后，計(jì)算峰面積。樣品溶液中苦味酸的響應(yīng)值應(yīng)位于標(biāo)準(zhǔn)響應(yīng)曲線的線性部分。8.6空白試驗(yàn)空白試驗(yàn)應(yīng)與樣品測(cè)定同時(shí)進(jìn)行，使用相同的分析程序和由相同數(shù)量的所有試劑制成的空白溶液，無(wú)需從任何樣品中提取任何試劑。8.7平行試驗(yàn)按照（8.2）進(jìn)行第2個(gè)樣品的處理，并按照（8.5）進(jìn)行測(cè)量。9結(jié)果計(jì)算和表述應(yīng)使用色譜數(shù)據(jù)處理器或根據(jù)公式（1）計(jì)算樣品中苦味酸的量：X=AV 式中：X——試樣中苦味酸的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A——樣液中苦味酸的峰面積；CS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中苦味酸的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL）：AS——標(biāo)準(zhǔn)工作液中苦味酸的峰面積；V——樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；m——最終樣液所代表的試樣量，單位為克（g）。10精密度當(dāng)濃度在[0.5mg/kg，20mg/kg]范圍內(nèi)時(shí)，回收率在89.4%和96.4%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）小于10%。在重復(fù)性條件下，兩個(gè)獨(dú)立測(cè)量結(jié)果的絕對(duì)差值不應(yīng)超過(guò)算術(shù)平均值的10%。11檢測(cè)報(bào)告檢測(cè)報(bào)告至少應(yīng)包括以下信息：a)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室名稱和地址；b)報(bào)告日期；c)參考本文件，即GB/TXXXX.12-XXXX；4GB/TXXXXX—202Xd)根據(jù)GB/TXXXX.1對(duì)樣品信息及其樣本準(zhǔn)備方式的必要描述；e)定性分析和