豬圓環(huán)病毒2型與3型雙重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法

1豬圓環(huán)病毒2型與3型雙重?zé)晒舛縋CR檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬圓環(huán)病毒2型與3型雙重?zé)晒舛縋CR的GB/T6682-2008分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和DNA：脫氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcPBS：磷酸鹽緩沖液（PhosphateBufferSolutiPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReactPCV-2：豬圓環(huán)病毒2型（PorcineCircoviruPCV-3：豬圓環(huán)病毒3型（PorcineCircoviru4試劑和材料水應(yīng)符合GB/T6682-2008分4.1DNAzolReagent：DNA抽提試劑，2℃~8℃保存。4.48mmol/LNaOH溶液：4.50.01mol/LPBS，pH7.2：配制方法見(jiàn)附錄A?！狿CV-2-F：5’-TCACCTATGACCCCTATG-3’；2——PCV-2-R：5’-GGAAGTAATCAATAGTGGAA——PCV-2-P：5’-FAM-ACTCCTCTCGCCATACCATAACC-B——PCV-3-F：5’-TGGCTCAACACATATG——PCV-3-R：5’-ACGGACTTGTAACGAA——PCV-3-P：5’-HEX-TGCCGTAGAAGTCTGTCATTCCA-B5.2高壓滅菌鍋。5.6組織勻漿器。5.7移液器。增區(qū)。各功能區(qū)有專用的試劑和實(shí)驗(yàn)材料，不可交采樣及樣品前處理過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌操作，防止樣本交叉污倍體積加入滅菌的0.01mol/LPBS。運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室后，再用研缽或組織勻漿器對(duì)組織進(jìn)行充分研磨混39.1實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增體系的配制49.4熒光通道設(shè)定值＞36.0，且出現(xiàn)典型“S”型擴(kuò)增曲線，建議值＞36.0，且出現(xiàn)典型“S”型擴(kuò)增曲線，建議5A.18mmol/LNaOH溶液的配制A.20.01mol/LPBS（pH7稱取磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O)3.0g，磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.2g，氯化鉀（KCl）0.2g，氯ATGAGACACAGAGCTATATTCAGAAGAAGACCCCGCCCAAGGAGACGACGACGCCACAGAAGGCGCTATGCCAGAAGAAGACTATTCATTAGGAGGCCCACAGCTGGCACATACTACACAAAGAAATACTCCACCATGAACGTCATTTCCGTTGGAACTCCTCAGAATAACCCTGGCACGCCAACCACTTCATTACCCGCCTAAACGAGTGGGAAACTGCAATTAGCTTTGAATATTATAAGATACTAAAGATGTACACTAAGCCCTGTAATTTCTCCAGCTCAGCAAACAAAAACTATGTTCGGGCACACAGCCATAGATCTAGACGGCGCCTGGACACACTTGGCTCCAAGACGACCCTTATGCGGAAAGTTCCACTCGTAAAGTTATGACTTCTAAAAAAAAACACAGCCGTTACTTCACCCCGAAACCAATTCTGGCGGGAACTACCAGCGCTCACCCAGGACAAAGCCTCTTCTTTTTCTCCAGACCCACCCCATGGCTCAACACATATGACCCCACCGTTCAATGGGGAGCACTGCTTTGGAGCATTTATGTCCCGGAAAAAACTGG