內(nèi)鏡消毒效果檢測(cè)方法

ICSFORMTEXT11.080FORMTEXTC59中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/TFORMTEXTXXXXX—FORMTEXTXXXXFORMTEXTFORMTEXT內(nèi)鏡消毒劑和清洗消毒機(jī)消毒效果評(píng)價(jià)與檢測(cè)方法FORMTEXTEvaluatingandtestingmethodforefficacyofendscopedisinfectantandautomaticendoscopereprocessorFORMTEXTFORMDROPDOWNFORMTEXTFORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX發(fā)布FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX實(shí)施GB/TXXXXX—XXXX內(nèi)鏡消毒劑和消毒機(jī)效果的評(píng)價(jià)與檢測(cè)方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用于內(nèi)鏡消毒的消毒劑和清洗消毒機(jī)（簡(jiǎn)稱消毒機(jī)）的評(píng)價(jià)原則與檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于內(nèi)鏡消毒的消毒劑和清洗消毒機(jī)（簡(jiǎn)稱消毒機(jī)）消毒效果的評(píng)價(jià)與檢測(cè)。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注時(shí)期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。GB15982醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB28232臭氧發(fā)生器安全與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB28234酸性氧化電位水生成器安全與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB30689內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)衛(wèi)生要求WS/T367醫(yī)療機(jī)構(gòu)消毒技術(shù)規(guī)范中華人民共和國(guó)原衛(wèi)生部《醫(yī)院感染管理辦法》中華人民共和國(guó)原衛(wèi)生部《內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)操作規(guī)范》《消毒技術(shù)規(guī)范》2002年版內(nèi)窺鏡的清洗、消毒的標(biāo)準(zhǔn)（第二版）－日本消化內(nèi)鏡技師委員會(huì)美國(guó)軟式胃腸內(nèi)窺鏡后處理感染控制規(guī)程(2007版)－胃腸病護(hù)士學(xué)會(huì)(SGNA)英國(guó)胃腸道內(nèi)窺鏡設(shè)備去污染BSG指南（2008版）－英國(guó)胃腸道疾病內(nèi)窺鏡檢查協(xié)會(huì)歐洲ESGE-ESGENA消化道內(nèi)窺鏡檢查中的清潔和消毒指南（2008版）－歐洲消化內(nèi)鏡協(xié)會(huì)指南委員會(huì)澳大利亞內(nèi)窺鏡檢查的感染控制－澳大利亞胃腸協(xié)會(huì)和澳大利亞胃腸護(hù)士學(xué)院世界胃腸病學(xué)組織內(nèi)鏡消毒操作指南（2005年版）－世界胃腸病學(xué)組織WGO-OMGE/OMED3\l"_術(shù)語(yǔ)和定義#_術(shù)語(yǔ)和定義"術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。3.1內(nèi)鏡endscope內(nèi)鏡是一種具有圖像傳感器、光學(xué)鏡頭、光源照明、機(jī)械裝置等，它可以經(jīng)口腔進(jìn)入胃內(nèi)或經(jīng)其他天然孔道進(jìn)入體內(nèi)?？捎糜诩膊〉脑\斷和治療。3.2消毒劑disinfectant用于殺滅傳播媒介上的微生物使其達(dá)消毒或滅菌要求的制劑。3.3內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)（簡(jiǎn)稱消毒機(jī)）automaticendoscopereprocessor,AER用于內(nèi)鏡復(fù)用處理，具有清洗與消毒功能的機(jī)器。3.4殺滅對(duì)數(shù)值killinglogvalue當(dāng)微生物數(shù)量以對(duì)數(shù)表示時(shí)，指消毒前后微生物減少的對(duì)數(shù)值。4評(píng)價(jià)原則4.1檢測(cè)項(xiàng)目要求4.1.1用于內(nèi)鏡消毒消毒劑和消毒機(jī)的檢測(cè)分必做項(xiàng)目和選做項(xiàng)目。4.1.2內(nèi)鏡消毒劑的消毒效果鑒定包括實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)和現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，必做項(xiàng)目為實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)和模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，選做項(xiàng)目為現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。4.1.3內(nèi)鏡消毒機(jī)的消毒效果鑒定自產(chǎn)消毒劑的應(yīng)做實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，根據(jù)需要判定是否做現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)；外帶消毒劑的，消毒劑應(yīng)符合我國(guó)消毒產(chǎn)品管理的相關(guān)規(guī)定，應(yīng)按4.2.1進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)，消毒機(jī)應(yīng)做模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，根據(jù)需要判定是否做現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)。4.2評(píng)價(jià)要求4.2.1殺滅微生物指標(biāo)4.2.1.1實(shí)驗(yàn)室微生物指標(biāo)在消毒劑、消毒機(jī)說(shuō)明書(shū)中的最短作用時(shí)間、最低作用濃度、最低溫度下應(yīng)符合以下要求。表1殺滅微生物指標(biāo)指示菌株殺滅對(duì)數(shù)值大腸桿菌(8099)（CICC10899,CICC21525）≥5.00金黃色葡萄球菌(ATCC6538)（CICC21601）≥5.00銅綠假單胞菌(ATCC15442)（CICC21630）≥5.00龜分枝桿菌膿腫亞種(ATCC19977)（CMCC(B)93326）≥4.00枯草桿菌黑色變種芽孢(ATCC9372)1（CICC10854,CICC21608）≥4.00脊髓灰質(zhì)炎病毒1型(PV_1)株2≥4.00注：1、不標(biāo)注殺滅芽孢，可不做枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅試驗(yàn)。2、已做枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅試驗(yàn)，可不做脊髓灰質(zhì)炎病毒殺滅試驗(yàn)，除非有特別要求。4.2.1.2模擬現(xiàn)場(chǎng)微生物指標(biāo)表2模擬現(xiàn)場(chǎng)微生物指標(biāo)指示菌株殺滅對(duì)數(shù)值銅綠假單胞菌ATCC15442（CICC21630）≥5.00枯草桿菌黑色變種芽孢ATCC93721（CICC10854,CICC21608）≥4.00注：不標(biāo)注殺滅芽孢，可不做枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅試驗(yàn)。4.2.1.3現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)：在消毒劑、消毒機(jī)說(shuō)明書(shū)中的最短作用時(shí)間、最低作用濃度、最低溫度下消毒后的內(nèi)鏡菌落總數(shù)<20cfu/件，不得檢出致病菌，判為消毒合格。當(dāng)懷疑醫(yī)院感染與內(nèi)鏡診療操作相關(guān)時(shí)，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)致病性微生物檢測(cè)。4.2.2酸化水和臭氧用于內(nèi)鏡消毒，其消毒效果評(píng)價(jià)參照GB28234酸性氧化電位水生成器安全與衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)及相關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。4.3結(jié)果評(píng)判4.3.1消毒劑合格標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合4.2.1、4.2.2要求。4.3.2消毒機(jī)合格標(biāo)準(zhǔn)：4.3.2.1自帶消毒劑機(jī)器：實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)、模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)結(jié)果應(yīng)符合4.2.1、4.2.2要求。4.3.2.2外帶消毒劑的機(jī)器：消毒劑應(yīng)符合我國(guó)相關(guān)規(guī)定，應(yīng)符合4.2.1要求；消毒機(jī)應(yīng)做模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)，應(yīng)符合4.2.2要求。5檢測(cè)方法5.1實(shí)驗(yàn)室消毒效果5.1.1試劑、培養(yǎng)基、5.1.1.1實(shí)驗(yàn)菌種：金黃色葡萄球菌ATCC6538、龜分枝桿菌膿腫亞種ATCC93326、大腸桿菌8099、銅綠假單胞菌ATCC15442、枯草桿菌黑色變種ATCC9372、脊髓灰質(zhì)炎病毒1型(PV_1)株2；根據(jù)消毒劑特定用途或試驗(yàn)特殊需要，可增選其他菌株。5.1.1.2試驗(yàn)器材：有機(jī)干擾物（0.3％BSA）、稀釋液、營(yíng)養(yǎng)恒溫培養(yǎng)箱、Ⅱ級(jí)生物安全柜等。5.1.2中和劑參照《消毒劑實(shí)驗(yàn)室殺菌效果檢驗(yàn)方法》規(guī)定進(jìn)行。5.1.3細(xì)菌定量殺滅試驗(yàn)參照《消毒劑實(shí)驗(yàn)室殺菌效果檢驗(yàn)方法》規(guī)定進(jìn)行。5.1.4病毒滅活試驗(yàn)參照《消毒劑實(shí)驗(yàn)室殺菌效果檢驗(yàn)方法》規(guī)定進(jìn)行。5.2模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)5.2.15.2.1.1實(shí)驗(yàn)菌株：銅綠假單胞菌（ATCC15442）和枯草桿菌黑色變種芽胞（ATCC9372）；根據(jù)特定用途或試驗(yàn)特殊需要，5.2.1.2消毒劑、中和劑、稀釋液：胰蛋白胨生理鹽水溶液（TPS）、有機(jī)干擾物：胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB）5.2.1.3模擬內(nèi)鏡：聚四氟乙烯管，外徑10mm，內(nèi)徑6mm，總長(zhǎng)度2000mm，分別在505.2.1.4載體：聚四氟乙烯管（外徑6mm，內(nèi)徑4mm5.2.25.2.2.1染菌載體的制備：取0.02ml芽孢懸液（1×108cfu/ml～5×108cfu/ml）滴染于聚四氟乙烯管載體內(nèi)壁，涂抹均勻，置5.2.2.2染菌模擬內(nèi)鏡的制備：試驗(yàn)時(shí)，先將模擬內(nèi)鏡體在50mm、1000mm和1950mm處剪開(kāi)，取染菌載體分別連接在50mm、10005.2.2.5.2.2.3.15.2.2.3.2機(jī)械自動(dòng)清洗程序：將模擬內(nèi)鏡體裝放于清洗消毒機(jī)內(nèi)規(guī)定的位置，按照供應(yīng)商提供的說(shuō)明書(shū)規(guī)定的程序運(yùn)行。5.2.2.4細(xì)菌菌落計(jì)數(shù)：消毒處理完畢后，用滅菌鑷子將染菌載體取出，分別置于含有10ml中和劑溶液的試管內(nèi)，敲打200次，分別吸取洗脫液1.0ml陽(yáng)性對(duì)照組，取2個(gè)染菌載體，放置室溫環(huán)境中，不作消毒處理，待試驗(yàn)組處理至最長(zhǎng)作用時(shí)間，將染菌載體置于含有10ml中和劑溶液的試管中，敲打200次，用稀釋液做10倍系列稀釋，選適宜稀釋度的懸液，分別吸取1.0ml接種平皿，每份樣本接種兩個(gè)平皿。同時(shí)分別吸取試驗(yàn)用中和劑和稀釋液各1.0ml接種平皿，每份樣本接種兩個(gè)平皿，作為陰性對(duì)照組。各組接種平皿后，傾注15ml－20mlTSA，待凝固后，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)725.2.3內(nèi)鏡清洗消毒機(jī)模擬現(xiàn)場(chǎng)消毒時(shí)，在規(guī)定的作用時(shí)間內(nèi)，陽(yáng)性對(duì)照組有菌生長(zhǎng)，且回收的菌落數(shù)達(dá)5×105cfu/樣本-5×106cfu/樣本，陰性對(duì)照組無(wú)菌生長(zhǎng)，3次試驗(yàn)對(duì)各載體上人工污染的枯草桿菌黑色變種芽孢的消除對(duì)數(shù)值均≥4.00，對(duì)各載體上人工污染的銅綠假單胞菌的消除對(duì)數(shù)值均≥5.00時(shí)可判為消毒合格。5.3現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)（菌落總數(shù)）5.3.1取清洗消毒后內(nèi)鏡立刻采樣，監(jiān)測(cè)部位為內(nèi)鏡的內(nèi)腔面，采用無(wú)菌注射器抽取50mL含相應(yīng)中和劑的洗脫液，從鉗口沖洗內(nèi)鏡管路，并全量收集，立刻送檢。5.3.2試劑、器材等5.3.3檢測(cè)方法將洗脫液充分混勻，分別用無(wú)菌吸管吸取1.0mL洗脫液，平行接種2個(gè)無(wú)菌平皿。傾注已融化的45℃～48℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基15待培養(yǎng)基冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使底面向上，置于36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，即為1將剩余洗脫液在無(wú)菌條件下采用濾膜（0.45μm）過(guò)濾濃縮，將濾膜接種于凝固的營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上（注意不要產(chǎn)生氣泡），置36℃±1℃5.3.4結(jié)果計(jì)算5.3.4細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/件）＝m×50；5.3.4菌落總數(shù)