兩種方法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎的比較

兩種方法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎的比較目的比較兩種病理學(xué)診斷方法診斷慢診斷性子宮內(nèi)膜炎的差異。方法獲取的標(biāo)本分別采用HE染色法與免疫組織化學(xué)染色聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138方法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎，比較兩組診斷陽(yáng)性率。結(jié)果與HE染色組診斷陽(yáng)性率(3.57%)相比，免疫組織化學(xué)染色聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138組診斷陽(yáng)性率(26.19%)更高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=36,P<0.05)。結(jié)論與傳統(tǒng)方法比較，采用免疫組織化學(xué)聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138方法對(duì)診斷慢性子宮內(nèi)膜炎更具靈敏性和特異性。[Abstract]ObjectiveTocomparetwopathologicalmethodsofdiagnosingchronicendometritis.MethodsObtainedsamplesadoptedCD38andCD138combinedwithHEstainingmethodorwithimmunohistochemistryrespectivelytodiagnosechronicendometritis.ResultsPositiveratediagnosedbyCD38andCD138HEcombinedwithimmunohistochemistrywas26.19%whichwashigherthanthatdiagnosedbyHEstainingmethod(3.57%).Thedifferencehadstatisticalsignificance(x2=36,P<0.05).ConclusionImmunohistochemistrycombinedwithCD38andCD138todiagnosechronicendometritisismoreofsensitivityandspecificity.[Keywords]Chronicendometritis；CD38；CD138；Immunohistochemistry子宮內(nèi)膜炎是婦科常見(jiàn)病，發(fā)病率逐年上升。子宮內(nèi)膜炎具有臨床表現(xiàn)無(wú)特異性、診斷較困難、病情易反復(fù)、為導(dǎo)致不孕和流產(chǎn)的重要原因等特點(diǎn)。因其診斷較困難，漏診和誤診在臨床工作中時(shí)有發(fā)生，嚴(yán)重時(shí)將導(dǎo)致不可估計(jì)的后果。因此找到切實(shí)有效的診斷方法是婦產(chǎn)科醫(yī)生的迫切愿望。該病診斷的必備條件是在大量梭形的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中辨認(rèn)出可能含有的漿細(xì)胞[1],但此法對(duì)漿細(xì)胞的分辨仍較困難。國(guó)外有研究表明，CD38、CD138特異的表達(dá)在漿細(xì)胞胞膜或胞質(zhì)內(nèi)。為此本研究通過(guò)比較HE染色法與免疫組織化學(xué)染色聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138方法診斷子宮內(nèi)膜炎的差異性，以期找到更有效的診斷方法。資料與方法一般資料200例患者為2013年1月?2013年9月間因子宮異常出血、月經(jīng)失調(diào)、不孕癥、反復(fù)流產(chǎn)、陰道異常排液等情況在山西長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院婦科門(mén)診就診的患者，考慮可能患有慢性子宮內(nèi)膜炎而需行診斷性刮宮術(shù)明確診斷。研究方案經(jīng)長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)?；颊咭淹晟票匾妮o助檢查，并簽署知情同意書(shū)，清醒狀態(tài)下在門(mén)診行診斷性刮宮術(shù)。組織病理學(xué)標(biāo)本滿意標(biāo)準(zhǔn)為：術(shù)者判定組織獲取量可做出組織病理學(xué)診斷。200例患者中168例取材滿意。168例患者年齡24?76歲，平均（43.3±4.2）歲，患者年齡及癥狀等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。實(shí)驗(yàn)分組將168名患者的子宮內(nèi)膜組織均分別制成三份標(biāo)本并分為兩組，一組為采用HE染色法組，另一組為采用免疫組織化學(xué)染色組分別兩份標(biāo)本檢測(cè)CD38、CD138。診斷標(biāo)準(zhǔn)（1）臨床表現(xiàn)下腹墜脹，子宮不規(guī)則出血，白帶多，檢查子宮稍大有觸痛，約20%無(wú)癥狀。（2）輔助檢查診斷性刮宮：先刮宮頸管，再進(jìn)宮腔刮取組織送病理檢查。內(nèi)膜中有大量漿細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，即可明確診斷。實(shí)驗(yàn)方法CD38、CD138采用免疫組化兩步法檢測(cè)步驟洗載玻片備用、石蠟切片、脫蠟、抗原修復(fù)、加一抗、加二抗、加SABC試劑、加顯色劑（DAB顯色試劑）、蘇木精復(fù)染、脫水、封片、顯微鏡下觀察。HE染色法步驟將切片脫蠟、依次于蘇木素染液、稀鹽酸酒精、氨水、伊紅染液、75%酒精、90%乙醇、無(wú)水酒精、二甲苯中浸入并清洗，再使用中性樹(shù)膠封片，鏡下觀察。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法資料采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，采用配對(duì)四格表資料的x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)CD38、CD138表達(dá)陽(yáng)性鏡下顯示漿細(xì)胞的細(xì)胞膜出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒視為CD38表達(dá)陽(yáng)性。CD138以細(xì)胞膜/胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色為陽(yáng)性。圖1?2分別顯示CD38、CD138陽(yáng)性表達(dá)。兩者均陽(yáng)性方可診斷慢性子宮內(nèi)膜炎。HE染色在鏡下以子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞中見(jiàn)到典型的漿細(xì)胞視為慢性子宮內(nèi)膜炎確診。見(jiàn)圖3。168名患者的子宮內(nèi)膜細(xì)胞取材器組所獲標(biāo)本分兩份。免疫組織化學(xué)染色法聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138組診斷陽(yáng)性率(26.19%)與HE染色組診斷陽(yáng)性率(3.57%)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=36,P<0.05),HE組診斷陽(yáng)性率低于CD38、CD138聯(lián)合組?？梢哉J(rèn)為CD38、CD138聯(lián)合檢測(cè)診斷較HE染色方法更正確率更高。見(jiàn)表1。3討論子宮內(nèi)膜炎是婦科常見(jiàn)疾病，發(fā)病率國(guó)內(nèi)外報(bào)道不一，國(guó)內(nèi)鄭益紅等［2］報(bào)道的子宮內(nèi)膜活檢標(biāo)本中，慢性子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率占3%?11%,國(guó)外Ekanem等［3］對(duì)140例子宮內(nèi)膜活檢病例進(jìn)行分析，結(jié)果顯示慢性子宮內(nèi)膜炎占16.4%。子宮內(nèi)膜炎分為急性子宮內(nèi)膜炎和慢性子宮內(nèi)膜炎兩種。急性子宮內(nèi)膜炎通常癥狀比較明顯，進(jìn)展較快，可蔓延至周?chē)M織和臟器，甚至可發(fā)展為敗血癥、感染性休克、中毒性休克綜合征等，危及生命。慢性子宮內(nèi)膜炎大多癥狀輕微，全身癥狀不明顯，但病程較長(zhǎng)，治療不徹底容易復(fù)發(fā)，影響女性生活質(zhì)量。無(wú)論是急性子宮內(nèi)膜炎，還是慢性子宮內(nèi)膜炎，如果治療不及時(shí)、不徹底，嚴(yán)重時(shí)影響子宮肌層，同時(shí)還可出現(xiàn)盆腔痛及反復(fù)發(fā)作。該病還可導(dǎo)致女性生殖疾病和影響產(chǎn)后子宮恢復(fù)。同時(shí)一旦形成慢性子宮內(nèi)膜炎對(duì)身體危害較大且治療較為困難。慢性子宮內(nèi)膜炎還與女性生殖疾病密切相關(guān)。有研究表明，行體外授精-胚胎移植術(shù)反復(fù)胚胎著床后失敗、不明原因的不孕不育及不明原因反復(fù)流產(chǎn)等均與慢性子宮內(nèi)膜炎有關(guān)［4-7］。Sukhikh等［8］發(fā)現(xiàn)存在慢性子宮內(nèi)膜炎時(shí)內(nèi)膜發(fā)生的變化將會(huì)影響妊娠早期胚胎的發(fā)育。慢性子宮內(nèi)膜炎發(fā)病率較高，對(duì)女性生殖健康的影響較大、范圍較廣，因此，慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷及早期發(fā)現(xiàn)和早期治療對(duì)防治女性疾病進(jìn)展和提高女性生活質(zhì)量有著極其重要的意義，具有一定的臨床研究?jī)r(jià)值。慢性子宮內(nèi)膜炎臨床表現(xiàn)為：不規(guī)則陰道出血或月經(jīng)不規(guī)則，有時(shí)有輕微下腹痛及白帶增多，不孕癥。其癥狀不具有特異性。該疾病常因?qū)m腔內(nèi)的分泌物通過(guò)子宮頸口流出體外，而癥狀不明顯。且本病約有20%無(wú)癥狀，易忽略診斷，多數(shù)是由婦科其他疾病如做診斷性刮子宮術(shù)時(shí)發(fā)現(xiàn)的。即使有癥狀的CE也可能會(huì)被忽略，因?yàn)槭茏訉m內(nèi)膜取樣滿意度和病理組織學(xué)檢測(cè)方法所限。慢性子宮內(nèi)膜炎確定診斷的可靠方法落腳在診斷性刮宮術(shù)聯(lián)合組織內(nèi)膜病理檢查。趙?。?］在子宮內(nèi)膜細(xì)胞學(xué)診斷系統(tǒng)中指出：慢性子宮內(nèi)膜炎病理改變：在子宮內(nèi)膜細(xì)胞之間，有散在淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、細(xì)胞碎片等，子宮內(nèi)膜細(xì)胞少見(jiàn)。漿細(xì)胞并不是正常子宮內(nèi)膜的組成細(xì)胞，因而，漿細(xì)胞的出現(xiàn)是慢性子宮內(nèi)膜炎的重要診斷指標(biāo)［10］，但是，人們對(duì)識(shí)別子宮內(nèi)膜中的漿細(xì)胞還存有一定的難度［11］。而且，常規(guī)的組織染色技術(shù)很難檢測(cè)子宮內(nèi)膜間質(zhì)中的漿細(xì)胞［12］。傳統(tǒng)HE法存在對(duì)漿細(xì)胞分辨困難的情況，如月經(jīng)后期、早期增生的內(nèi)膜、大量有絲分裂的基質(zhì)細(xì)胞、以及呈漿細(xì)胞樣的基質(zhì)細(xì)胞。研究表明辨認(rèn)漿細(xì)胞可通過(guò)切片的免疫染色法檢測(cè)CD38、CD138、免疫球蛋白、VS38。而在1997年，Anthony等[13]用VS38單克隆抗體檢測(cè)子宮內(nèi)膜的漿細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VS38不僅使?jié){細(xì)胞著色，而且上皮和基質(zhì)細(xì)胞也呈顆粒狀著色，故而降低了VS38檢測(cè)漿細(xì)胞的特異性。目前國(guó)內(nèi)外的研究表明，正常漿細(xì)胞的主要免疫表型為：CD38、CD138等[14]。有研究顯示漿細(xì)胞最特異的指標(biāo)是CD138[15-16]。CD138的免疫組化適合用于檢測(cè)石蠟包埋標(biāo)本中的子宮內(nèi)膜間質(zhì)漿細(xì)胞，并改善了慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷率[17-19]。Kitaya等[17-20]也證實(shí)了CD138對(duì)子宮內(nèi)膜炎中漿細(xì)胞的檢測(cè)率較其他方法高，而且準(zhǔn)確率也高，在慢性子宮內(nèi)膜炎的診斷中發(fā)揮著必不可少的作用。Bhan[21]在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)B細(xì)胞各個(gè)發(fā)育階段進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)漿細(xì)胞表面的CD38分子著色很強(qiáng)。1997年，Anthony等[13]使用CD38對(duì)慢性子宮內(nèi)膜炎的組織中漿細(xì)胞的檢測(cè)達(dá)100%。綜上所述，可見(jiàn)CD38、CD138均對(duì)漿細(xì)胞的檢測(cè)具有較高特異性。但鑒于CD38、CD138均在人體內(nèi)表達(dá)、分布廣泛，而各自對(duì)子宮內(nèi)膜中漿細(xì)胞的檢測(cè)所具有的高敏感性、特異性無(wú)定論，且目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于CD38、CD138均為單項(xiàng)檢測(cè)的研究，故本實(shí)驗(yàn)將免疫組織化學(xué)染色法聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138,并與傳統(tǒng)HE染色法用于辨別漿細(xì)胞是否存在的病理結(jié)果比較，旨在提高兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)慢性子宮內(nèi)膜炎中診斷的特異性，并得出結(jié)論：采用免疫組織化學(xué)方法聯(lián)合檢測(cè)CD38、CD138較傳統(tǒng)HE染色法診斷慢性子宮內(nèi)膜炎價(jià)值更高。本實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象選擇范圍界定為因癥需行診斷性刮宮術(shù)并考慮病因?yàn)槁宰訉m內(nèi)膜炎，故范圍有限，其結(jié)論仍需要大宗臨床資料的研究論證。也為本實(shí)驗(yàn)的不足之處。[參考文獻(xiàn)]BayerGIB，KorourianS.Plasmacellsinchronicendometritisareeasilyidentifiedwhenstainedwithsyndecan-1[J].ModPathol，2001，14（9）：877-879.[2]鄭益紅，雷英.CD38和CD138在慢性子宮內(nèi)膜炎病理診斷中的應(yīng)用及臨床意義[J].實(shí)用心腦血管病雜志，2013，12（21）：45-46.EkanemIA，EkanemAD.EndometrialpathologyassociatedwithinfertilityamongNigerianwomen[J].NigerPostgradMed，2006，13（4）：344-347.JohnstonMEB，HartnettJ，EngmannLL，etal.Chronicendometritisisafrequentfindinginwomenwithrecurrentimplantationfailureafterinvitrofertilization[J].FertilSteril，2010，5（93）：437-441.KitayaK，YasuoT.AberrantexpressionofselectinE，CXCL1，andCXCL13inchronicendometritis[J].ModPathol，2010，4(23)：1136-1146.[6]KitayaK.Prevalenceofchronicendometritisinrecurrentmiscarriages[J].FertilSteril，2011，8(95)：1156-1158.KitayaK，TadaY，TaguchiS，etal.Localmononuclearcellinfiltratesininfertilepatientswithendometrialmacropolypsversusmicropolyps[J].HumReprod.2012，9(27)：3474-3480.SukhikhGT，ShurshaAV，VeryasovVN.Immunomorphologicalcharacteristicsofendometriuminwomenwithchronicendometritis[J].BullExpBiolMed，2006，141(1)：104-106.[9]趙健.子宮內(nèi)膜細(xì)胞學(xué)診斷系統(tǒng)[J].中國(guó)生育健康雜志，2006,17(1)：6-8.HeatleyMK.Theassociationbetweenclinicalandpathologicalfeaturesinhistologicallyidentifiedchronicendometritis[J].JObstetGynaeco，l2004，24(7)：801-803.MountSP，MeadK.Cooper，Chlamydiatrachomatisintheendometrium：cansurgicalpathologistsidentifyplasmacells？[J].AdvAnatPathol，2001，8(6)：327-329.[12]回允中.外科病理學(xué)[M].第9版.北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2006：573.AnthonySY，LeongSV.Anti-CD38andVS38antibodiesforthedetectionofplasmacellsinthediagnosisofchronicendometritis，inappliedimmunohistochemistry&molecularmorphology[J].ApplImmunohistochemMolMorp，1997，13：189-193.陳葆國(guó)，鄭瑞.多發(fā)性骨髓瘤流式細(xì)胞術(shù)免疫表型及微量殘留病研究[A].2011浙江省血液病學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)血液病學(xué)分會(huì)成立50周年慶典論文匯編，2011-07-15.CornieE.ThePipelle：adisposabledeviceforendometrialbiopsy[J].AmJObstetGynecol，1984，8(149)：109-110.SilverM，MilesP，RosaC.ComparisonofNovakandPipelleendometrialbiopsyinstrument[J].ObstetGynecol，1991，78(5)：828-830.KitayaK，TadaY，HayashiT，etal.Diversefunctionsofuterineproteoglycansinhumanreproduction(review)[J].MolMedRep，2012，5：1375-1381.VicettiMRD，ChivukulaM，KrishnamurtiU，etal.Limitationsofthecriteriausedtodiagnosehistolog