大鼠急性心肌缺血再灌注損傷模型制備與指標設計與分析

大鼠心肌缺血再灌注損傷模型制備以及血流動力學等指標的設計與分析心肌缺血的概念冠心病基本的生理過程是心肌缺血，故又稱為缺血性心臟病。缺血是指單位時間內(nèi)的冠脈血流量減少，供給組織的氧量也減少，缺血必定存在缺氧，表明缺血缺氧兩者在概念上并不完全等同，在后果上也有一定的區(qū)別。心肌缺血比單純性心肌缺氧（無血流障礙）要嚴重，因為前者除了缺氧的影響之外，缺血組織也不能獲得足夠的營養(yǎng)物質(zhì)，又不能及時清除各種代謝各種代謝產(chǎn)物帶來的有害影響。缺血對心肌的影響1.心肌收縮能力的降低CO↓2.心肌舒張功能降低LVEDP↑易衰竭3.血流動力學的改變冠脈狹窄處血流阻力增大，狹窄遠端血管的壓力下降，有效灌注壓下降，發(fā)生湍流。產(chǎn)生遠端心肌缺血缺氧4.心肌電生理的變化5.血小板功能和血液流變學的變化6.缺血對心肌代謝的影響心肌缺血后導致心肌內(nèi)氧張力下降，使脂肪酸、葡萄糖、丙酮酸、乳酸的氧化代謝嚴重受阻。缺血心肌的損傷機制1.能量缺乏2.鈣超載3.自由基生成增多4.酸中毒引起的心肌損害5.細胞膜通透性增加常見心肌缺血模型

藥物引起的心肌缺血：1.垂體后葉素引起的急性心肌缺血2.異丙腎上腺素引起的急性心肌缺血手術冠脈結扎引起的：1.人工進行冠脈結扎引起的心肌缺血血栓引起的：1.電刺激冠脈引起的冠脈血栓基本原理結扎大鼠、兔、貓、狗、豬、猴等動物的左冠狀動脈前降支均可引起心肌梗死。在結扎冠脈后血流動力學和心肌代謝的改變與冠心病人嚴重心肌缺血及心肌梗死時有某些相似之處。而且梗死發(fā)生快、缺血缺血范圍大致固定，并可進行動力學、心電圖ST段標測、組織染色檢查和血清酶學等綜合指標測定，確定心肌缺血/梗死范圍和損傷程度。因此，結扎冠脈引起的急性或亞急性心急梗死病理模型可供基礎科研、藥物研究等用。實驗材料大鼠手術器械1套；氣管套管，大鼠心室導管、微動脈夾、3-5個零縫合針線，細軟管一根等。麻醉藥：烏拉坦或戊巴比妥鈉。BL-420E+生物信號采集與分析裝置，四川泰盟科技公司生產(chǎn)。動物人工呼吸機，DH—150，浙江大學醫(yī)學儀器廠生產(chǎn)等。紅四氮唑（TTC）：進口。實驗方法

一、麻醉固定：選用200～300g的雄性大鼠（SD/WISTAR），烏拉坦1.2g/kg腹腔注射麻醉（或戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射）,背位固定于手術板上。二、右側頸總動脈插導管至左心室與BL-420E型生物機能實驗系統(tǒng)相連檢測血壓和心室內(nèi)壓。接Ц導聯(lián)心電連接線記錄心電圖。插氣管接人工呼吸機（或用面罩），進行人工呼吸(呼吸頻率60-80次，潮氣量8-12ml，呼吸比1：1)。實驗方法

三、胸部去毛消毒，沿著鎖骨中線縱行切開皮膚約2cm，在第三或第四肋間鈍性分離肌層，打開胸腔，剪開心包，輕壓右側胸廓，擠出心臟。在肺動脈圓錐與左心耳下緣之間冠狀動脈處以5-0針線結扎左冠狀動脈前降支后（需進行再灌注則將一軟管一起結扎，到指定時間取出軟管實行再灌），把心臟放回胸腔，迅速縫合胸腔，停止人工呼吸。該實驗在大鼠開胸之前先描記一段時間的正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖，再結扎冠脈前降支，一心電圖ST段抬高判斷結扎是否成功。如急性實驗，即可給藥觀察。如進行亞急性實驗，需術后幾天每天注射青霉素和鏈霉素防止感染。心臟表面血管示意圖

心肌缺血示意圖Establishment結扎左側冠狀動脈SuitableAnimal大鼠、豬、狗、家兔

分組及劑量正常對照組（NS）模型對照組（NS）腸炎合劑低劑量組（1.5g生藥/kg）腸炎合劑中劑量組（3g生藥/kg）腸炎合劑高劑量組（6g生藥/kg）復方黃連素組（0.14g/kg）治療TNBS所致大鼠UC的實驗

實驗方法：1.禁食24h，灌胃管插入腸內(nèi)8cm，正常對照組注NS，其余各組注50％乙醇與TNBS混合液0.5ml/只（100mg/kg），倒置鼠30s2.造模第2天開始給藥，連續(xù)給藥14天3.造模第14天，以3%戊巴比妥鈉麻醉，抽腹腔靜脈血，取血清、結腸組織等檢測指標設計11、血流動力學指標：收縮壓（SAP）、舒張壓(DAP)、平均動脈血壓(MAP)、心率(HR)、左室內(nèi)壓峰值(LVSP)、左室舒張末期壓(LVEDP)、左室內(nèi)壓上升最大變化速率(+dp/dtmax)、左室內(nèi)壓下降最大變化速率(-dp/dtmax)。

2、心電圖指標：結扎前與結扎后不同時間點的心率、ST段位移（mv）及T波幅值（mv）、心律失常發(fā)生率。指標設計23、血清酶測定：于缺血再灌注一定時間后，從腹腔靜脈取血，分離血清，檢測血清乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶（CK）或CK-MB。4、病理組織學分析取代表性心肌用10％甲醛磷酸鹽緩沖液保存超過48ｈ。每個組織塊均酒精梯度脫水，石蠟包埋，切片厚約4μｍ，進行蘇木素一伊紅(Haematoxylin-Eosin，HE)染色。光鏡下觀察腦組織病理學變化。指標設計35、心肌梗死面積：缺血再灌注一定時間后處死大鼠，摘取心臟，放－20℃冰箱中冷凍20分鐘，橫向切成5片、放紅四氮唑（TTC）液中37℃水浴保溫10～20分鐘，將各片心肌非紅染區(qū)（梗塞區(qū)）切下，稱濕重，計算與總心臟重之比為心肌梗塞范圍（梗死區(qū)/心臟重×100％），或用圖像分析系統(tǒng)分析梗死面積。原理：正常心肌細胞有脫氫酶，在NADP存在的條件下，能將無色的氧化型燃料紅四氮唑（TTC）還原成還原型的紅色的TTC，使活體心肌染色心肌梗死一定時間后，細胞中脫氫酶因細胞膜損傷而釋放丟失，不能使TTC還原染色，故心肌不被染色。

指標設計46、細胞調(diào)亡情況、差異蛋白檢測等7、其它指標血流動力學圖（超聲）血流動力學圖（導管）心電圖病理學檢查心肌梗死圖（TTC法）注意事項1.麻醉：戊巴比妥鈉、乙醚、水合氯醛、氯胺酮2.開胸暴露心臟：3-4肋間3.冠脈結扎的部位：關鍵左心耳