高考生物總復(fù)習(xí)專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用全國公開課一等獎百校聯(lián)賽示范課賽課特等

選修1專題1、2

生物技術(shù)實踐傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用、微生物培養(yǎng)與應(yīng)用第1頁考綱內(nèi)容能力要求命題分析試驗：(1)利用發(fā)酵加工食品基本方法(2)測定食品加工中可能產(chǎn)生有害物質(zhì)(3)微生物分離和培養(yǎng)(4)某種微生物數(shù)量測定(5)培養(yǎng)基對微生物選擇作用(6)利用微生物發(fā)酵來生產(chǎn)特定產(chǎn)物以及微生物在其它方面應(yīng)用試驗與探究能力試驗與探究能力試驗與探究能力試驗與探究能力試驗與探究能力試驗與探究能力1.近幾年新課標(biāo)卷以綜合題形式考查了傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)(泡菜制作)、微生物分離、計數(shù)和篩選等。2.命題趨勢：以生活實踐為背景，以綜合題形式考查本專題相關(guān)知識。第2頁項目果酒果醋腐乳泡菜微生物酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌制作原理在無氧條件下，利用酵母菌將葡萄糖分解為酒精等物質(zhì)在有氧條件下，利用醋酸菌將葡萄汁中糖分解成醋酸；缺乏糖源時，可將乙醇(酒精)變?yōu)橐胰?，再變?yōu)榇姿崦沟任⑸锂a(chǎn)生蛋白酶和脂肪酶將豆腐中蛋白質(zhì)和脂肪分解為小分子物質(zhì)，使普通豆腐變?yōu)轱L(fēng)味獨特腐乳在無氧條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成乳酸氣體條件①______有氧③________無氧溫度18℃～ 25℃②______________15℃～18℃④_____一、傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)應(yīng)用1．果酒、果醋、腐乳和泡菜制作原理：無氧30℃～35℃有氧常溫第3頁2.酒精檢測：(1)方法：可用______________檢測酒精。(2)原理：在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)展現(xiàn)_______色。重鉻酸鉀灰綠

3．亞硝酸鹽含量測定原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與______________發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N－1－萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合，形成________色染料。將顯色后樣品與________________進行目測比較，可大致估算出泡菜中亞硝酸鹽含量。對氨基苯磺酸玫瑰紅標(biāo)準(zhǔn)顯色液第4頁二、微生物培養(yǎng)與應(yīng)用1．培養(yǎng)基：生長繁殖固體選擇碳源

(1)培養(yǎng)基是人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)不一樣要求，配制出供其____________營養(yǎng)物質(zhì)。 (2)依據(jù)物理狀態(tài)不一樣分為半液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和________培養(yǎng)基。 (3)依據(jù)培養(yǎng)基功效可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、________培養(yǎng)基和判別培養(yǎng)基。氮源pH

(4)每種培養(yǎng)基普通都含有水、________、______、無機鹽。另外要滿足微生物對_______、特殊營養(yǎng)物質(zhì)及氧氣要求。第5頁2．無菌技術(shù)：70～7515

(1)巴氏消毒法在________℃煮30min或者在80℃煮________min，能夠殺死牛奶中微生物，而且使牛奶營養(yǎng)成份不被破壞。灼燒干熱芽孢和孢子

(2)接種環(huán)慣用________滅菌；需要干燥且耐高溫物品可采取________滅菌，另外還能夠用高壓蒸汽滅菌。 (3)滅菌和消毒最主要區(qū)分是是否殺死____________。第6頁3．微生物培養(yǎng)基本技術(shù)：接種環(huán)涂布器

(1)配制培養(yǎng)基：計算→稱量→溶化→調(diào)pH→分裝→包扎。 (2)滅菌：高壓滅菌鍋加水→將培養(yǎng)基放入鍋內(nèi)→密封→排冷氣→維持壓力→取出倒平板(或擱置斜面)。(3)接種：平板劃線法稀釋涂布平板法①接種過程：洗凈雙手→點燃酒精燈→接種→貼標(biāo)簽。②接種工具：包含____________、____________。③接種方法：______________、____________________。(4)培養(yǎng)：接種后培養(yǎng)皿放入恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。第7頁4．土壤中分解尿素細(xì)菌分離與計數(shù)：(1)種菌篩選：尿素稀釋涂布平板法①培養(yǎng)基：選擇培養(yǎng)基。顯微鏡直接計數(shù)法②特點：________是唯一氮源。(2)統(tǒng)計菌落數(shù)目標(biāo)方法：______________________；__________________________。非測試原因

(3)設(shè)置對照主要目標(biāo)：排除試驗組中______________對試驗結(jié)果影響。第8頁5．分解纖維素微生物分離——纖維素分解菌篩選：(1)試驗原理：透明圈①纖維素酶催化原理：②篩選纖維素分解菌原理：即：可依據(jù)是否產(chǎn)生____________來篩選纖維素分解菌。第9頁

(2)過程： 土壤取樣：選擇富含纖維素環(huán)境中土壤。 ↓選擇培養(yǎng)：用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng),以增加纖維素分解菌數(shù)量。 ↓ 梯度稀釋 ↓，再加入剛果將樣品涂布到鑒方法一：先培養(yǎng)__________別纖維素分解菌紅進行顏色反應(yīng)。方法二：在____________時加入剛果紅。培養(yǎng)基上↓微生物倒平板第10頁深入判定挑選產(chǎn)生透明圈菌落↓ 試驗：進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶試驗。測定方法：普通是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生_________進行定量測定。葡萄糖第11頁[判斷正誤]1．在家庭中用鮮葡萄制作果酒時，應(yīng)向發(fā)酵罐中連續(xù)通入空氣。()2．腐乳制作利用了毛霉等微生物蛋白酶和脂肪酶。(

)3．用稀釋涂布平板法純化大腸桿菌時，只要稀釋度足夠高，普通就能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。()答案：1.×2.√3.√第12頁菌種酵母菌醋酸菌毛霉乳酸菌生物分類真核生物原核生物真核生物原核生物代謝類型異養(yǎng)兼性厭氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)需氧異養(yǎng)厭氧繁殖方式適宜條件下 出芽生殖二分裂孢子生殖二分裂生產(chǎn)應(yīng)用釀酒、發(fā)面釀醋制作腐乳制作泡菜、酸奶發(fā)酵條件前期需氧、后期不需氧一直需氧一直需氧一直無氧考點一微生物與發(fā)酵原理1．與傳統(tǒng)發(fā)酵相關(guān)幾個微生物比較：第13頁發(fā)酵食品制作過程注意事項果酒挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒(1)材料選擇與處理：選擇新鮮葡萄，榨汁前，先將葡萄洗潔凈再去除枝梗(2)預(yù)防發(fā)酵液被污染：①榨汁機要清洗潔凈并晾干；②發(fā)酵瓶要清洗潔凈，并用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，或用洗滌劑洗滌；③裝入葡萄汁后，封閉充氣口2.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作過程及注意事項：第14頁發(fā)酵食品制作過程注意事項果醋挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→果醋(3)控制好發(fā)酵條件：①葡萄汁裝入發(fā)酵瓶時，要留有1/3空間，其目是先讓酵母菌進行有氧呼吸快速繁殖，增加菌種，耗盡氧氣再進行酒精發(fā)酵；②控制好溫度：果酒制作時，溫度控制在18℃～25℃；果醋制作時，溫度嚴(yán)格控制在30℃～35℃；③注意是否需要通氣：果醋發(fā)酵時，需要適時經(jīng)過充氣口充氣(續(xù)表)第15頁發(fā)酵食品制作過程注意事項腐乳讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制(1)控制好材料中鹽、酒用量：鹽和酒精過少，不足以抑制微生物生長；酒精含量過多，則會延長腐乳成熟時間(2)預(yù)防雜菌污染：①用來腌制腐乳玻璃瓶要洗涮潔凈并用沸水消毒；②裝瓶時，操作要快速小心，封瓶時，最好將瓶口經(jīng)過酒精燈火焰，預(yù)防瓶口被污染(3)注意發(fā)酵時溫度(續(xù)表)第16頁發(fā)酵食品制作過程注意事項泡菜選擇原料→修整、洗滌、晾曬、切分成條狀或片狀→配制泡菜鹽水→把處理后原料、鹽水等其他調(diào)味料裝入瓶中→發(fā)酵→成品(1)泡菜壇選擇：選取無裂紋、無砂眼、壇沿深、蓋子吻合好泡菜壇(2)材料選擇及用量：①蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時間過長，蔬菜中硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽；②清水與鹽質(zhì)量比是4∶1，鹽水要煮沸后冷卻待用，煮沸鹽水可抵達(dá)殺菌和去除氧氣作用(3)氧氣控制：壇蓋邊緣水槽中要注滿水，發(fā)酵過程中，要及時補充蒸發(fā)掉水分，以確保乳酸菌發(fā)酵無氧環(huán)境(續(xù)表)第17頁◎高考探究◎考向微生物與發(fā)酵原理

[典例](年新課標(biāo)卷Ⅰ)回答以下相關(guān)泡菜制作習(xí)題： (1)制作泡菜時，所用鹽水需煮沸，其目標(biāo)是____________________。為了縮短制作時間，有些人還會在冷卻后鹽水中加入少許陳泡菜液，加入陳泡菜液目標(biāo)是________________。 (2)泡菜制作過程中，乳酸發(fā)酵過程即為乳酸菌進行____________過程。該過程發(fā)生在乳酸菌________中。 (3)泡菜制作過程中影響亞硝酸鹽含量原因有_______________、______________和____________等。第18頁

(4)從開始制作到泡菜質(zhì)量最正確這段時間內(nèi)，泡菜液逐步變酸，這段時間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌和其它雜菌消長規(guī)律是____________________________，原因是__________________。

[解析](1)鹽水中可能含有雜菌，制作泡菜時，所用鹽水需要煮沸，方便殺死鹽水中雜菌。陳泡菜液中含有大量現(xiàn)成乳酸菌，加入后，能夠縮短制作時間。(2)乳酸發(fā)酵過程即為乳酸菌進行無氧呼吸過程。該過程發(fā)生在乳酸菌細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中。(3)泡菜制作過程中，造成亞硝酸鹽含量增加原因有溫度過高、食鹽用量過低、腌制時間過短等。第19頁

(4)從開始制作到泡菜品質(zhì)最正確這段時間內(nèi)，泡菜液逐步發(fā)酸，這段時間內(nèi)泡菜壇中乳酸菌數(shù)量增加，其它雜菌較少，原因是酸性條件下，不利于雜菌生存，而乳酸菌耐酸，數(shù)量增加。[答案](1)殺滅雜菌增加乳酸菌數(shù)量(2)無氧呼吸細(xì)胞質(zhì)(3)溫度腌制時間食鹽用量(4)乳酸菌數(shù)量增多，雜菌數(shù)量降低乳酸菌比雜菌更為耐酸第20頁【考點練透】

1．(年寶雞一模)下面是果酒和果醋制作試驗流程和發(fā)酵裝置。依據(jù)圖示回答以下問題：圖1果酒、果醋制作流程圖2果酒、果醋制作裝置

(1)完成圖1中試驗流程______________________________________________。第21頁

(2)圖2裝置中充氣口在________過程中要關(guān)閉，不然可能發(fā)生使發(fā)酵液變酸反應(yīng)________________________________________________________________(寫出該反應(yīng)式)，而排氣口在該過程中應(yīng)開放，排氣口要經(jīng)過一個長而彎曲膠管與瓶身連接，目標(biāo)是___________________________________。 (3)葡萄酒展現(xiàn)紅色原因是________________________，重鉻酸鉀在酸性條件下與酒精反應(yīng)呈______色。

(4)果酒和果醋制作分別利用了酵母菌和__________兩種微生物發(fā)酵原理，后者在結(jié)構(gòu)上主要特點是________________________________________。第22頁

解析：在酒精發(fā)酵階段，充氣口應(yīng)關(guān)閉，不然醋酸菌會將乙醇氧化為醋酸，從而使發(fā)酵液變酸。酵母菌為真菌，屬于真核生物，醋酸菌為細(xì)菌，屬于原核生物，二者在結(jié)構(gòu)上主要區(qū)分是有沒有以核膜為界限細(xì)胞核。

答案：(1)醋酸發(fā)酵(2)酒精發(fā)酵C2H5OH＋O2―→CH3COOH＋H2O防止空氣中其它微生物進入發(fā)酵裝置(預(yù)防空氣中微生物污染)(3)紅色葡萄皮中色素溶解在發(fā)酵液中灰綠(4)醋酸菌無以核膜為界限細(xì)胞核第23頁營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要起源碳源能提供所需碳元素物質(zhì)組成生物體細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物，有些是異養(yǎng)生物能源物質(zhì)無機化合物(CO2

、NaHCO3)，有機化合物(糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等)氮源能提供所需氮元素物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮代謝產(chǎn)物無機化合物(N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽)，有機化合物(尿素、牛肉膏、蛋白胨等)考點二微生物試驗室培養(yǎng)

1．微生物營養(yǎng)物質(zhì)及功效：微生物營養(yǎng)物質(zhì)主要有碳源、氮源、無機鹽和水這四大類。另外還要滿足不一樣微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣需求。第24頁(1)微生物最常利用碳源是糖類，尤其是葡萄糖；最常利用氮源是銨鹽、硝酸鹽。(2)對異養(yǎng)微生物來說，含C、H、O、N化合物既是碳源又是氮源、能源。

(3)有些培養(yǎng)基不需要添加特殊營養(yǎng)物質(zhì)，生物自己能合成，如大腸桿菌能合成一些維生素，作為特殊營養(yǎng)物質(zhì)。第25頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 種類特點和用途化學(xué)成份天然培 養(yǎng)基利用動、植物或微生物體包含用其提取物制成培養(yǎng)基。優(yōu)點是營養(yǎng)豐富、種類多樣、配制方便、價格低廉；缺點是化學(xué)成份不清楚、不穩(wěn)定。主要用 于微生物學(xué)試驗培養(yǎng)或發(fā)酵工業(yè)合成培 養(yǎng)基是按微生物營養(yǎng)要求準(zhǔn)確設(shè)計后，用各種高純化 學(xué)試劑配制成培養(yǎng)基。優(yōu)點是成份及量確切可知；缺點是價格較貴，配制復(fù)雜，且微生物生長比 較普通。主要用于微生物分類和判定半合成培養(yǎng)基主要以化學(xué)試劑配制，同時還加有某種或一些天然成份培養(yǎng)基。特點是配制方便，成本低，微生物 生長良好。主要用于工業(yè)生產(chǎn)2．培養(yǎng)基種類：第26頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 種類特點和用途物理狀態(tài)液體培 養(yǎng)基呈液體狀態(tài)培養(yǎng)基，用于微生物學(xué)試驗和生產(chǎn)固體培 養(yǎng)基呈固體狀態(tài)培養(yǎng)基，用于菌種分離、判定、菌落 計數(shù)、檢測雜菌、育種、菌種保藏等半固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入少許凝固劑(如0.2%～0.5% 瓊脂)而制成半固體狀態(tài)培養(yǎng)基?？捎糜谟^察細(xì)菌運動能力，進行厭氧菌培養(yǎng)及菌種保藏等（續(xù)表）第27頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 種類特點和用途功效選擇性培養(yǎng)基依據(jù)某微生物特殊營養(yǎng)要求或其對一些物理、化學(xué)原因抗性而設(shè)計培養(yǎng)基，含有使混合菌樣中劣勢菌變成優(yōu)勢菌功效。可用于菌種篩選判別培 養(yǎng)基一類在成份中加有能與目標(biāo)菌無色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)指示劑，從而抵達(dá)只需用肉眼區(qū)分顏色就能方便地從近似菌落中找到目標(biāo)菌菌落培養(yǎng)基?？捎糜诰N判別、計數(shù)（續(xù)表）第28頁(1)加入培養(yǎng)基中凝固劑(如瓊脂)，普通不能被微生物利用，只起到凝固作用。

(2)選擇培養(yǎng)基普通只生長含有特定目標(biāo)微生物，判別培養(yǎng)基能夠存在其它微生物，而且能判別特定微生物。第29頁項目概念慣用方法應(yīng)用范圍消毒使用較為溫和物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害微生物(不包含芽孢或孢子)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min普通物品巴氏消毒法：70℃～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高溫液體，如牛奶化學(xué)藥劑消毒法如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等紫外線消毒法：30W紫外燈照射30min接種室3．消毒與滅菌：第30頁項目概念慣用方法應(yīng)用范圍滅菌使用強烈理化原因殺死物體內(nèi)外全部微生物(包含芽孢和孢子)灼燒滅菌，用酒精燈火焰充分燃燒層灼燒接種工具滅菌干熱滅菌：160℃～170℃下滅菌1～2h玻璃器皿、金屬工具滅菌高壓蒸汽滅菌：121℃條件下，滅菌15～30min培養(yǎng)基及容器滅菌（續(xù)表）注：消毒與滅菌最大區(qū)分是芽孢和孢子是否存活。第31頁接種方法操作過程注意事項平板劃 線法接種環(huán)滅菌→取菌液→在培養(yǎng)液上劃線→培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)(1)接種環(huán)灼燒：①第一次灼燒：防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；②每次劃線之前灼燒：殺死上次劃線結(jié)束后殘留在接種環(huán)上菌種，使每次劃線菌種均來自上次劃線末端；③劃線結(jié)束灼燒：殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者(2)灼燒接種環(huán)之后，要冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高而殺死菌種(3)劃線時最終一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連(4)劃線用力大小要適當(dāng)，預(yù)防用力過大將培養(yǎng)基劃破(1)接種方法比較：4．慣用微生物接種方法：第32頁接種方法操作過程注意事項稀釋涂布平板法稀釋菌液→取菌液于培養(yǎng)基表面→涂布器滅菌→均勻涂布菌液→培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)稀釋操作：每支試管及其中9mL水、移液管均需滅菌；操作時，試管口和移液管應(yīng)在離火焰1～2cm處涂布器滅菌：①涂布器用體積分?jǐn)?shù)為70%酒精消毒，取出時多余酒精在燒杯中滴盡，沾有少許酒精涂布器在火焰上引燃后冷卻；②不要將過熱涂布器放在盛放酒精燒杯中，以免引燃其中酒精(續(xù)表)第33頁(2)倒平板注意事項：①培養(yǎng)基滅菌后，需冷卻至50℃左右，才能用來倒平板。②整個操作過程需在酒精燈火焰旁進行，防止雜菌污染。③平板冷凝后要倒置原因：預(yù)防皿蓋上冷凝水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。第34頁◎高考探究◎考向微生物培養(yǎng)

[典例](年四川卷)有機農(nóng)藥苯磺隆是一個除草劑，長久使用會污染環(huán)境。研究發(fā)覺，苯磺隆能被土壤中一些微生物降解。分離降解苯磺隆菌株和探索其降解機制試驗過程以下圖甲、乙所表示。(導(dǎo)學(xué)號57130088)甲乙第35頁

(1)微生物生長繁殖所需主要營養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、________________四類，該試驗所用選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_____________________________。 (2)與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基常需添加生長素和______________，這些植物激素普通需要事先單獨配置成________保留備用。

(3)純化菌株時，通常使用劃線工具是________。劃線某個平板培養(yǎng)后，第一劃線區(qū)域劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區(qū)域第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能操作失誤有_____________________________________________________。第36頁

(4)為探究苯磺隆降解機制，將該菌種培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所表示試驗。該試驗假設(shè)是_______________________________________________，該試驗設(shè)計是否合理？為何？______________________。

[解析](1)微生物生長所需要主要營養(yǎng)物質(zhì)包含碳源、氮源、水和無機鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因為其允許特定微生物生長，同時又能抑制或阻止其它微生物生長。(2)植物組織培養(yǎng)常需要添加植物激素有生長素和細(xì)胞分裂素。MS培養(yǎng)基成份普通先分別配制成母液備用。(3)平板劃線法接種時常通用接種環(huán)劃線。第二區(qū)域只有第一條線無菌落，而其它劃線第37頁都有菌落，很可能是因為接種環(huán)在灼燒后未冷卻，第一次劃線時將菌種燙死，而后接種環(huán)冷卻，能正常劃線，也可能是第一次劃線時劃線未從第一區(qū)域末端開始，使接種環(huán)上無菌種。(4)題中試驗為取得菌種培養(yǎng)液過濾離心后取上清液，加入蛋白酶處理后，測得其對苯磺隆降解率。由此可判定試驗假設(shè)是目菌株經(jīng)過分泌某種蛋白質(zhì)來降解苯磺隆。但因為缺乏空白對照，不能比較蛋白酶處理是否降低苯磺隆降解率，該試驗不能得出對應(yīng)結(jié)論。第38頁確保只有能利用苯磺隆微生物

[答案](1)氮源和無機鹽能正常生長和繁殖(2)細(xì)胞分裂素母液①接種環(huán)灼燒后未冷卻；②劃線未從第一區(qū)域

(3)接種環(huán)末端開始不合理，缺乏空

(4)目標(biāo)菌株能分泌降解苯磺隆蛋白質(zhì)白對照第39頁

(1)每次劃線前和劃線后都要進行接種環(huán)灼燒滅菌，所以需要灼燒接種環(huán)6次。其中第一次灼燒是為了預(yù)防雜菌污染；每次劃線前灼燒是為了殺死殘留菌種，確保每次劃線菌種來自上次劃線末端；最終一次灼燒是為了預(yù)防接種微生物擴散，造成新污染。

(2)下一次劃線菌種起源是上一次劃線最末端，所以前幾次劃線都是上一次尾和下一次首相連，不過第五次劃線不與第一次劃線相連。(3)在第五次劃線上菌落往往是由一個細(xì)菌繁殖形成。(4)實際上菌落數(shù)都要小于細(xì)菌數(shù)，因為有菌落是2個或多個細(xì)菌形成。第40頁【考點練透】

2．某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌污染情況而進行了實驗，試驗包含制備培養(yǎng)基、滅菌、接種、培養(yǎng)及菌落觀察與計數(shù)，請回答與此試驗相關(guān)問題。(導(dǎo)學(xué)號57130089) (1)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了________和________。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有基本成分是________和________。(2)對培養(yǎng)基進行滅菌，應(yīng)該采取方法是_____________。第41頁

(3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)試驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品平板置于________中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度設(shè)定在37℃，要使該試驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種________作為對照進行試驗。

(4)培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有各種形態(tài)和顏色不一樣菌落，這說明湖水樣品中有________種細(xì)菌，普通說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細(xì)菌污染程度越________。 (5)假如提升培養(yǎng)基中NaCl濃度，能夠用于篩選耐________細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為_____________________________________________________________。第42頁

解析：(1)培養(yǎng)基基本成份：水、無機鹽、碳源、氮源。(2)對培養(yǎng)基滅菌常采取方法是高壓蒸汽滅菌。(3)應(yīng)將接種了湖水樣品平板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。要使該試驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種無菌水作為對照進行試驗。(4)菌落總數(shù)越多，說明湖水樣品中有各種細(xì)菌，污染程度越重。(5)提升培養(yǎng)基中NaCl濃度，可用于篩選耐鹽細(xì)菌，這種培養(yǎng)基被稱為選擇培養(yǎng)基。答案：(1)氮源碳源無機鹽水(2)高壓蒸汽滅菌(3)恒溫培養(yǎng)箱無菌水(4)多高(5)鹽(或NaCl)選擇培養(yǎng)基第43頁項目分離分解尿素細(xì)菌分離分解纖維素微生物原理提供有利于目標(biāo)菌株生長條件(如營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制其它微生物生長，常用選擇培養(yǎng)基篩選剛果紅能夠與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心透明圈，能夠經(jīng)過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌考點三微生物分離與計數(shù)

1．分離土壤中分解尿素細(xì)菌與分離分解纖維素微生物比較：第44頁項目分離分解尿素細(xì)菌分離分解纖維素微生物過程土壤取樣→樣品稀釋→培養(yǎng)與觀察土壤取樣→選擇培養(yǎng)→梯度稀釋→將樣品涂布于含剛果紅(CR)判別纖維素分解菌培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈菌落→發(fā)酵培養(yǎng)判定酚紅指示劑(變紅)剛果紅(產(chǎn)生透明圈)

選擇培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基，尿素為唯一氮源液體培養(yǎng)基，纖維素為唯一碳源 判別培養(yǎng)基液體固體（續(xù)表）第45頁2.統(tǒng)計菌落數(shù)目標(biāo)方法：(1)稀釋涂布平板法：

①原理：當(dāng)樣品稀釋濃度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長一個菌落，起源于樣品稀釋液中一個活菌。經(jīng)過統(tǒng)計平板上菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。②操作：a．設(shè)置重復(fù)組，增強試驗說服力與準(zhǔn)確性。b．為了確保結(jié)果準(zhǔn)確，普通選擇菌落數(shù)在30～300平板進行計數(shù)。第46頁

③計算公式：每克樣品中菌株數(shù)＝(C/V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用稀釋液體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。(2)顯微鏡直接計數(shù)法：①原理：利用特定細(xì)菌計數(shù)板或血細(xì)胞計數(shù)板，在顯微鏡下計算一定容積樣品中微生物數(shù)量。②方法：用計數(shù)板計數(shù)。③缺點：不能區(qū)分死菌與活菌。第47頁◎高考探究◎考向微生物分離與純化

[典例](年新課標(biāo)卷Ⅲ)某同學(xué)用新鮮泡菜濾液為實驗材料純化乳酸菌。分離純化所用固體培養(yǎng)基中因含有碳酸鈣而不透明，乳酸菌產(chǎn)生乳酸能溶解培養(yǎng)基中碳酸鈣?；卮鹨韵聠栴}： (1)分離純化乳酸菌時，首先需要用________________對泡菜濾液進行梯度稀釋，進行梯度稀釋理由是____________________________________________________________________。 (2)推測在分離純化所用培養(yǎng)基中加入碳酸鈣作用有________________和________________。分離純化時應(yīng)挑選出________________菌落作為候選菌。第48頁

(3)乳酸菌在－20℃長久保留時，菌液中常需要加入一定量________________(填“蒸餾水”“甘油”或“碳酸鈣”)。

[解析](1)分離純化乳酸菌時，首先需要用無菌水對泡菜濾液進行梯度稀釋；進行梯度稀釋理由是在稀釋度足夠高菌液里，聚集在一起乳酸菌將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。

(2)在分離純化所用培養(yǎng)基中加入碳酸鈣作用有中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生乳酸和利于乳酸菌識別和分離；分離純化時應(yīng)挑選出在平板上有溶鈣圈菌落作為候選菌。

(3)乳酸菌在－20℃長久保留時，菌液中常需要加入一定量甘油。第49頁[答案](1)無菌水在稀釋度足夠高菌液里，聚集在一起乳酸菌將被分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落(2)中和乳酸菌代謝過程中產(chǎn)生乳酸利于乳酸菌識別和分離在平板上有溶鈣圈(3)甘油第50頁【考點練透】3．(年新課標(biāo)卷Ⅰ)植物秸稈中纖維素可被一些微生物分解。回答以下問題：

(1)分解秸稈中纖維素微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成復(fù)合酶，其中葡萄糖苷酶可將______________分解成____________。

(2)在含纖維素培養(yǎng)基中加入剛果紅(CR)時，CR可與纖維素形成________色復(fù)合物。用含有CR該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時，培養(yǎng)基上會出現(xiàn)以該菌菌落為中心____________。第51頁培養(yǎng)基酵母膏無機鹽淀粉纖維素粉瓊脂CR溶液水甲＋＋＋＋－＋＋乙＋＋＋－＋＋＋

(3)為從富含纖維素土壤中分離取得纖維素分解菌單菌落，某同學(xué)設(shè)計了甲、乙兩種培養(yǎng)基(成份見下表)：注：“＋”表示有，“－”表示無。

據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲________(填“能”或“不能”)用于分離和判別纖維素分解菌，原因是_____________________________________________________；培養(yǎng)基乙________(填“能”或“不能”)用于分離和判別纖維素分解菌，原因是_____________________。第52頁纖維素――――纖維二糖―――――葡萄糖→→

解析：(1)纖維素是一個以葡萄糖為單體形成高分子化合物。纖維素能被土壤中一些微生物分解利用，以下列圖：纖維素酶葡萄糖苷酶

(2)剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心透明圈，我們能夠經(jīng)過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。(3)生物適應(yīng)一定環(huán)境，環(huán)境對生物含有選擇作用，只有在纖維素含量豐富環(huán)境中纖維素分解菌才會發(fā)揮作用。纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，纖維素分解菌判別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，要分離和判別纖維素分解菌，需要以纖維素為唯一碳源培養(yǎng)基，培養(yǎng)基乙不含有選擇作用。第53頁答案：(1)纖維二糖葡萄糖(2)紅透明圈(3)不能纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基，纖維不能培養(yǎng)基中沒有纖素分解菌判別培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基維素粉第54頁1．乙醇等“綠色能源”開發(fā)備受世界關(guān)注，利用玉米秸稈生產(chǎn)燃料酒精大致流程為：(導(dǎo)學(xué)號57130090)

(1)玉米秸稈預(yù)處理后，應(yīng)該選取________酶和________酶形成纖維二糖，再使用________酶使之轉(zhuǎn)化為發(fā)酵所需葡萄糖。第55頁(2)從以下哪些微生物中能夠提取上述酶？()(多項選擇)

A．釀制果醋醋酸菌 B．生長在腐木上霉菌 C．制作酸奶乳酸菌 D．反芻動物瘤胃中生存一些微生物 (3)若從土壤中分離產(chǎn)生這種酶微生物，所需要培養(yǎng)基為________(按功效分)，培養(yǎng)基中碳源為________，微生物在純化培養(yǎng)時慣用方法是________和________。 (4)發(fā)酵階段需要菌種是________，生產(chǎn)酒精時要控制必要條件是________。第56頁CX葡萄糖苷答案：(1)C1(2)BD(3)選擇培養(yǎng)基纖維素平板劃線法稀釋涂布平板法(4)酵母菌無氧(密封、密閉)第57頁2．下列圖是泡菜制作及測定亞硝酸鹽含量試驗流程示意圖，請據(jù)圖分析回答以下問題。

(1)制作泡菜宜選取新鮮蔬菜或其它原料，原因是___________________________________________________________。 (2)制備泡菜鹽水中，清水與鹽質(zhì)量比為________，鹽水煮沸目標(biāo)是為了殺滅雜菌，冷卻后再使用目標(biāo)是為了保證________等微生物生命活動不受影響。第58頁

(3)泡菜制作方法不妥，很輕易造成泡菜變質(zhì)，甚至發(fā)霉變味，發(fā)霉主要與________相關(guān)。 (4)測定亞硝酸鹽含量方法是______