血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳

關(guān)于血清蛋白質(zhì)醋酸纖維素薄膜電泳一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解電泳的基本原理；2.掌握電泳分離蛋白質(zhì)的原理；3.熟悉醋酸纖維素薄膜電泳的方法。第2頁,共13頁，2024年2月25日，星期天二、實(shí)驗(yàn)原理1.電泳的基本原理

電泳——是帶電粒子在電場中向其電性相反的電極發(fā)生移動(dòng)的現(xiàn)象。

利用電泳技術(shù)可進(jìn)行物質(zhì)分離、純化及鑒定。第3頁,共13頁，2024年2月25日，星期天影響帶電粒子電泳速率的因素：帶電量F=qE分子量形狀第4頁,共13頁，2024年2月25日，星期天2.電泳分離蛋白質(zhì)的原理蛋白質(zhì)的兩性解離：等電點(diǎn)——即

pI(isoelectricpoint）pIpH小于pIpH大于pI當(dāng)pH距離pI越遠(yuǎn)時(shí)，所帶電量越多。+OH-+OH-+H-+H-第5頁,共13頁，2024年2月25日，星期天

血清蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為4.8~7.5，均低于8.6，因此電泳時(shí)常采用pH8.6的緩沖液。此時(shí)，蛋白質(zhì)解離帶負(fù)電荷，在電場中向正極移動(dòng)。第6頁,共13頁，2024年2月25日，星期天3.醋酸纖膜薄膜電泳分離血清蛋白質(zhì)原理醋酸纖維素薄膜電泳是采用醋酸纖維素薄膜作支持物的一種電泳技術(shù)。醋酸纖維素薄膜做區(qū)帶電泳的支持物優(yōu)點(diǎn):1.用樣量少，分離清晰，對(duì)染料無吸附作用;2.快速簡便，應(yīng)用范圍廣;3.染色后的薄膜可用乙醇和冰醋酸溶液浸泡透明，透明后的薄膜便于保存和定量分析。

目前被廣泛用于血清蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、糖蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。第7頁,共13頁，2024年2月25日，星期天三、主要試劑與器材試劑：血清

巴比妥緩沖液

染色液，漂洗液器材：電泳儀，電泳槽

醋酸纖維素薄膜（2×8cm）

血清加樣器第8頁,共13頁，2024年2月25日，星期天四、操作步驟1.浸膜：將裁好的醋酸纖維素薄膜浸泡于緩沖液中，充分浸透后用鑷子取出（約3-5min，直到膜上沒有斑點(diǎn)，中間沒有氣泡為止）。2.點(diǎn)樣：毛面向上，用點(diǎn)樣器，在距膜一端約1.5cm處，點(diǎn)加3-5μL待分離血清。注意取樣適量、均勻；血清線位置適當(dāng)，粗細(xì)均勻，不能有明顯擴(kuò)散現(xiàn)象。

1.5cm第9頁,共13頁，2024年2月25日，星期天3.搭橋：首先將雙層紗布鋪好，分別放置于電泳槽兩端，其下端要浸入緩沖液中。然后，將點(diǎn)好樣的薄膜光面向上平直地貼于電泳槽的支架上。注意橋的方向，點(diǎn)樣的一端位于負(fù)極，點(diǎn)樣線不能搭在濾紙上。醋酸纖維素薄膜電泳裝置示意圖第10頁,共13頁，2024年2月25日，星期天4.電泳：紅正黑負(fù)。

電壓120V。

電泳時(shí)間約40~

50min。5.染色：氨基黑10B,染色1-2min.6.脫色：2個(gè)表面皿，裝入漂洗液，依次漂去多余染料，直到背景漂白為止。第11頁,共13頁，2024年2月25日，星期天五、結(jié)果與分析1.定性觀察：染色后的薄膜上可顯現(xiàn)清楚的五條區(qū)帶。2.定量測定：光密度儀掃描法，洗脫比色法