錦鯉皰疹病毒ORF72和TK基因原核表達及其多克隆抗體的制備與鑒定的開題報告

錦鯉皰疹病毒ORF72和TK基因原核表達及其多克隆抗體的制備與鑒定的開題報告一、研究意義錦鯉皰疹病毒（CyHV-3）是一種致命性病毒，可以引起鯉科魚類的嚴重傳染病。目前尚無有效的治療方法，因此需要開展疫苗研究以控制該病毒的傳播。ORF72和TK基因是CyHV-3病毒中的兩個關鍵基因，可以激發(fā)機體產生針對CyHV-3的蛋白質的免疫應答，從而保護機體免受CyHV-3感染。因此，研究ORF72和TK基因及其多克隆抗體的制備與鑒定對于開展CyHV-3病毒疫苗研究具有十分重要的意義。二、研究內容本研究將從以下三個方面展開：1、對ORF72和TK基因進行原核表達通過PCR擴增CyHV-3中的ORF72和TK基因，并將其克隆到原核表達載體上。用大腸桿菌作為表達宿主，使其表達出ORF72和TK蛋白質。2、制備ORF72和TK蛋白的多克隆抗體將表達的ORF72和TK蛋白分別純化，并分別用于免疫小鼠制備多克隆抗體。通過ELISA和Westernblot等技術對所制備的多克隆抗體進行鑒定。3、鑒定抗體的特異性與親和力使用Westernblot等技術，對制備的多克隆抗體進行鑒定，測試其特異性和親和力。確定最佳的多克隆抗體，并進一步進行對抗原檢測的實驗。三、研究方法1、基因克隆使用PCR技術從CyHV-3病毒中擴增ORF72和TK基因，并將其克隆到原核表達載體中。2、蛋白表達與純化采用大腸桿菌作為表達宿主，表達ORF72和TK蛋白，并進行分離和純化。3、多克隆抗體制備使用分離純化后的ORF72和TK蛋白分別免疫小鼠，制備多克隆抗體。4、鑒定抗體特異性和親和力使用Westernblot等技術對多克隆抗體進行鑒定，測試其特異性和親和力。四、研究預期結果1、成功表達ORF72和TK蛋白通過PCR擴增，將ORF72和TK基因克隆到原核表達載體中，并使用大腸桿菌表達出目標蛋白，從而獲得純化的ORF72和TK蛋白。2、制備出具有高特異性抗原特異性的多克隆抗體采用純化出的ORF72和TK蛋白免疫小鼠制備多克隆抗體，通過ELISA和Westernblot等技術對抗體進行鑒定，確定具有高特異性抗原特異性的多克隆抗體。3、建立用于CyHV-3病毒疫苗研究的基礎技術為后續(xù)開展CyHV-3病毒疫苗研究奠定基礎，提供多克隆抗體等研究工具和技術支持。五、參考文獻1.Zhang,J.,Liu,X.,etal.(2017).CloningandbioinformaticidentificationofORF72anditsexpressionprofileinvivointheChinesegrasscarp.JournalofFishBiology,91(2),362-373.2.Xu,J.,Li,W.,etal.(2018).ProductionofpolyclonalantibodiesagainstcarpherpesvirusORF72andtheirapplicationinimmunofluorescenceassay.JournalofFishDiseases,41(12),1893-1903.3.Shinka,S.,Iwashita,H.,etal.(2020).Cyprinidherpesvirus3ORF72isdispensableforviralreplicationinvitrobutplaysa