禽白血病AJ三重PCR檢測技術(shù)規(guī)程編制說明

安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)編制說明標(biāo)準(zhǔn)名稱禽白血病通用/A/J三重PCR檢測技術(shù)規(guī)程任務(wù)來源（項(xiàng)目計(jì)劃號）安徽省市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2023年第二批安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知（皖市監(jiān)函〔2023〕478號），項(xiàng)目計(jì)劃號：2023-2-82第一起草單位（蓋章）安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心單位地址合肥市濱湖新區(qū)洞庭湖路3355號參與起草單位安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)等標(biāo)準(zhǔn)起草人（全部起草人，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)文本前言中起草人排序一致）序號姓名單位職務(wù)職稱電話1沈艷安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心等獸醫(yī)制情況1、編制過程簡介2023年9月12日，安徽省市場監(jiān)督管理局《關(guān)于下達(dá)2023年第二批安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知》（皖市監(jiān)函〔2023〕478號）下達(dá)了《禽白血病通用/A/J三重PCR檢測技術(shù)規(guī)程》安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)的編制計(jì)劃，安徽省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心聯(lián)合安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)等成立標(biāo)準(zhǔn)制定工作小組，分工負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)起草相關(guān)工作。標(biāo)準(zhǔn)編制小組以科學(xué)、規(guī)范、可操作性強(qiáng)為原則，起草本標(biāo)準(zhǔn)；同時(shí)，采取召開座談會(huì)、發(fā)電子郵件等方式，征求起草單位專家的意見和建議。2023年1月上旬完成了本標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。2023年2-3月，委托省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所獸醫(yī)臨床診斷中心、安農(nóng)大畜禽疾病監(jiān)測中心、獸醫(yī)病理生物學(xué)與疫病防控安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室3家省級實(shí)驗(yàn)室開展驗(yàn)證試驗(yàn)。2、制定標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義制定該標(biāo)準(zhǔn)的必要性禽白血?。╝vianleukosis，AL）是由禽白血病病毒（avianleukosisvirus）引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱，呈世界性分布，對養(yǎng)禽業(yè)危害巨大。由于ALV基因的變異和重組導(dǎo)致ALV亞群眾多，傳播性復(fù)雜，其中以A亞群和J亞群感染家危害最為嚴(yán)重，幾乎可以感染所有品種和日齡的雞群?；记葜饕憩F(xiàn)多器官發(fā)生腫瘤，免疫功能抑制，易繼發(fā)其他病原感染，導(dǎo)致生產(chǎn)性能下降。《中華人民共和國動(dòng)物防疫法》（2021年5月1日）明確將禽白血病等垂直傳播性動(dòng)物疫病作為重點(diǎn)“凈化消滅”病種?！掇r(nóng)業(yè)農(nóng)村部關(guān)于推進(jìn)動(dòng)物疫病凈化工作的意見》（農(nóng)牧發(fā)〔2021〕29號）明確要求種禽場扎實(shí)開展禽白血病等疫病的凈化工作。2022年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告〔第574號〕將種禽健康標(biāo)準(zhǔn)中增加了禽白血病達(dá)到凈化作為一項(xiàng)硬性指標(biāo)。禽白血病至今尚無有效的藥物和疫苗可供使用，控制該病最有效的措施是通過病原檢測，淘汰陽性雞，達(dá)到凈化種群。因此，早期的病毒篩查和檢測對該病凈化至關(guān)重要。二、制定該標(biāo)準(zhǔn)的意義多重PCR檢測方法是一種高效性、系統(tǒng)性且經(jīng)濟(jì)簡便性的實(shí)驗(yàn)室檢測方法，適用于臨床樣本的快速鑒別診斷?！肚莅籽⊥ㄓ?A/J三重PCR檢測技術(shù)規(guī)程》可以為我省禽白血病的凈化提供一套科學(xué)、規(guī)范的實(shí)驗(yàn)室檢測方法，對于養(yǎng)禽業(yè)疫病凈化和健康生產(chǎn)具有重要的意義。3、制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系。一、制定該標(biāo)準(zhǔn)的原則制定該標(biāo)準(zhǔn)遵循“先進(jìn)性、實(shí)用性、統(tǒng)一性、規(guī)范性”，嚴(yán)格按照GB/T1.1-2020的要求進(jìn)行編寫。本標(biāo)準(zhǔn)與現(xiàn)行法律、法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)無沖突。二、制定該標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范GB/T19495.2轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測?實(shí)驗(yàn)室技術(shù)要求GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求《病死及病害動(dòng)物無害化處理技術(shù)規(guī)范》（農(nóng)醫(yī)發(fā)〔2017〕25號）4、主要條款的說明，主要技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、試驗(yàn)驗(yàn)證的論述本文件規(guī)定了禽白血病通用/A/J三重PCR檢測方法的術(shù)語與定義、主要儀器設(shè)備、試劑與耗材、引物、樣品處理、試驗(yàn)步驟、結(jié)果判定、實(shí)驗(yàn)廢棄物無害化處理。主要條款說明如下：4主要儀器設(shè)備：規(guī)定了完成禽白血病通用/A/J三重PCR檢測所需的主要儀器設(shè)備，如PCR儀、臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)、全自動(dòng)組織碾磨儀、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)、微量移液器等。5試劑：規(guī)定了完成禽白血病通用/A/J三重PCR檢測所需的試劑與耗材，如病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒和反轉(zhuǎn)錄試劑盒、2×EasyTaqSuperMix、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)（DL2000Marker）等。6引物：規(guī)定了禽白血病通用/A/J三重PCR三對上下游引物的序列。本標(biāo)準(zhǔn)中引物根據(jù)GenBank中登錄的ALV基因序列（登錄號MN735309）、ALV-A（登錄號DQ412726）和ALV-J（登錄號KF218957）分別設(shè)計(jì)特異性引物。擴(kuò)增產(chǎn)物，經(jīng)測序鑒定與ALV的pol基因，ALV-A亞群和ALV-J亞群的gp85基因片段相符合，從而證明三對引物設(shè)計(jì)合理。7樣品處理：規(guī)定了雞的血液、精液、組織、腫瘤等不同樣本的不同的前處理方法。8試驗(yàn)步驟：規(guī)定了禽白血病通用/A/J三重PCR中RNA的反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增、電泳以及結(jié)果觀察。9結(jié)果判定：規(guī)定了檢測結(jié)果成立條件和核酸陽性、陰性及陽性分型的判定標(biāo)準(zhǔn)。5、標(biāo)準(zhǔn)中如果涉及專利，應(yīng)有明確的知識(shí)產(chǎn)權(quán)說明無。6、采用國際標(biāo)準(zhǔn)或國外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的，說明采標(biāo)程度，以及國內(nèi)外同類標(biāo)準(zhǔn)水平的對比情況無。7、重大分歧意見的處理經(jīng)過和依據(jù)無。8、貫徹標(biāo)準(zhǔn)的要求和措施建議（包括組織措施、技術(shù)措施、過渡辦法、實(shí)施日期等）標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布后，建議采取如下一些具體措施開展標(biāo)準(zhǔn)的宣貫和實(shí)施工作：1.由標(biāo)準(zhǔn)歸口單位牽頭，起草單