HPLC測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質(zhì)量評價指標(biāo)

HPLC測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質(zhì)量評價指標(biāo)1.本文概述高效液相色譜法（HPLC）是一種廣泛應(yīng)用于分析化學(xué)領(lǐng)域的分離和分析技術(shù)，尤其在中藥成分分析中顯示出獨特的優(yōu)勢。川芎（LigusticumchuanxiongHort.）作為一種常用的中藥材，含有多種生物活性成分，其中阿魏酸（ferulicacid）是其主要活性成分之一，具有廣泛的藥理作用，如抗炎、抗氧化和抗血栓等。在川芎藥材和飲片中，阿魏酸的存在形式主要包括游離態(tài)和結(jié)合態(tài)，二者生物利用度和藥效存在顯著差異。本文旨在通過HPLC技術(shù)，對川芎藥材及其飲片中的游離阿魏酸和總阿魏酸（游離態(tài)加結(jié)合態(tài)）進行定量分析，并探討其作為川芎藥材和飲片質(zhì)量評價指標(biāo)的可行性。研究首先對HPLC的測定條件進行優(yōu)化，以確保分析的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。隨后，對多個川芎樣本進行分析，比較不同來源和加工方法對阿魏酸含量的影響。結(jié)合藥理學(xué)數(shù)據(jù)和臨床應(yīng)用，評估阿魏酸含量作為川芎質(zhì)量評價指標(biāo)的適用性和重要性。本研究的完成，不僅為川芎藥材及其飲片的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)，而且對于促進中藥現(xiàn)代化、標(biāo)準(zhǔn)化進程具有重要意義。同時，本研究結(jié)果也為川芎在臨床應(yīng)用中的合理使用和藥效評估提供了實驗基礎(chǔ)。2.材料與方法本研究所使用的川芎藥材和飲片均來源于中國西南地區(qū)的合法種植基地，確保了藥材的道地性和質(zhì)量的一致性。藥材在采集后，經(jīng)過初步的清潔處理，去除雜質(zhì)和不必要的組織，然后按照傳統(tǒng)方法進行干燥和切割，以便后續(xù)的HPLC分析。高效液相色譜儀（HPLC）系統(tǒng)由某品牌提供，配備了二極管陣列檢測器（DAD），以實現(xiàn)對阿魏酸的高靈敏度檢測。色譜柱選用C18反相色譜柱，具有良好的分離效果。流動相由水（含1磷酸）和乙腈按一定比例混合而成，流速設(shè)定為0mLmin，進樣量為10L。檢測波長設(shè)定在254nm，以獲得最佳的檢測信號。川芎樣品經(jīng)過粉碎后，稱取一定量的粉末置于具塞試管中，加入甲醇作為提取溶劑，超聲處理一定時間以充分提取其中的阿魏酸成分。提取液經(jīng)離心后取上清液，經(jīng)適當(dāng)稀釋后用于HPLC分析。根據(jù)已知濃度的阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品制備一系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。將樣品提取液與標(biāo)準(zhǔn)品溶液同樣處理后，注入HPLC系統(tǒng)進行分析，通過比較樣品峰的面積與標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出樣品中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量。根據(jù)HPLC測定結(jié)果，結(jié)合藥材的傳統(tǒng)功效和現(xiàn)代藥理研究，建立川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量標(biāo)準(zhǔn)，作為質(zhì)量評價的指標(biāo)。同時，考慮到藥材的綜合特性，還需結(jié)合其他化學(xué)成分和藥理活性進行綜合評價。3.結(jié)果游離阿魏酸含量：列出不同樣本中游離阿魏酸含量的具體數(shù)值，包括平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、最小值和最大值。色譜圖：展示代表性HPLC色譜圖，說明阿魏酸的保留時間和峰形。含量差異：分析游離阿魏酸和總阿魏酸含量之間的差異，討論其可能的化學(xué)和生物學(xué)意義。樣本間比較：比較不同川芎藥材和飲片樣本之間的阿魏酸含量，探討其變異性和可能的原因。評價標(biāo)準(zhǔn)：提出游離阿魏酸和總阿魏酸含量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)建議，并討論其科學(xué)性和實用性。準(zhǔn)確性和精密度：報告方法的準(zhǔn)確性、精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性等指標(biāo)。結(jié)果解釋：對實驗結(jié)果進行解釋，探討其與川芎藥材和飲片藥效的關(guān)系。在撰寫具體內(nèi)容時，應(yīng)確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、圖表清晰，并且所有結(jié)果都有充分的實驗數(shù)據(jù)支持。結(jié)果部分應(yīng)該簡潔明了，避免冗余，同時為后續(xù)的討論和結(jié)論部分打下堅實的基礎(chǔ)。4.討論分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性：討論HPLC（高效液相色譜法）在測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸含量時的準(zhǔn)確性和可靠性?？梢蕴峒芭c其他分析方法相比，HPLC的優(yōu)勢，例如高分離效率、高靈敏度和良好的重復(fù)性等。川芎藥材和飲片中阿魏酸含量的差異：分析不同來源和不同加工方法的川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸含量的差異，并探討可能的原因。例如，生長環(huán)境、采收季節(jié)、加工方法等因素可能對阿魏酸含量產(chǎn)生影響。質(zhì)量評價指標(biāo)的建立：討論如何根據(jù)HPLC測定結(jié)果建立川芎藥材和飲片的質(zhì)量評價指標(biāo)?？梢蕴岢鰧⒂坞x阿魏酸和總阿魏酸含量作為評價川芎質(zhì)量的重要指標(biāo)，并探討這些指標(biāo)在實際應(yīng)用中的可行性和有效性。對川芎藥材和飲片質(zhì)量控制的意義：闡述通過HPLC測定阿魏酸含量對川芎藥材和飲片進行質(zhì)量控制的重要性。這不僅有助于保證藥品的療效和安全性，還能促進中藥材的標(biāo)準(zhǔn)化和國際化。未來研究方向的展望：可以提出未來研究的方向，比如進一步優(yōu)化HPLC分析方法，探索影響阿魏酸含量的其他因素，或者研究阿魏酸在川芎中的生物活性等。5.結(jié)論本研究通過高效液相色譜（HPLC）技術(shù)成功建立了一種測定川芎藥材及其飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸含量的方法。該方法具有操作簡單、快速、準(zhǔn)確和重現(xiàn)性好的特點，為川芎藥材的質(zhì)量控制提供了科學(xué)的依據(jù)。通過對不同來源和不同加工階段的川芎樣品進行分析，研究發(fā)現(xiàn)游離阿魏酸和總阿魏酸含量存在顯著差異。這表明在川芎的種植、收獲和加工過程中，各種因素均可能影響其有效成分的含量。建議在藥材的生產(chǎn)過程中嚴格控制生長條件和加工技術(shù)，以保證藥材的質(zhì)量穩(wěn)定性。本研究還探討了游離阿魏酸和總阿魏酸含量與川芎藥材質(zhì)量的相關(guān)性，結(jié)果表明這兩種成分的含量可以作為評價川芎藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)。基于此，建議在未來的藥材質(zhì)量評價體系中，將游離阿魏酸和總阿魏酸的含量作為關(guān)鍵的質(zhì)量控制參數(shù)。本研究不僅為川芎藥材的質(zhì)量評價提供了一種有效的分析手段，也為其他中藥材的質(zhì)量控制和評價提供了參考。未來的研究可以進一步探討影響川芎中阿魏酸含量的其他因素，以及如何通過優(yōu)化種植和加工技術(shù)來提高藥材的整體質(zhì)量。7.附錄結(jié)果表明，川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量存在顯著差異。本方法簡便、準(zhǔn)確，可用于川芎藥材和飲片中阿魏酸含量的質(zhì)量控制。（注：本附錄僅為文章《HPLC測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量及其質(zhì)量評價指標(biāo)》的模擬內(nèi)容，實際附錄內(nèi)容應(yīng)根據(jù)實驗數(shù)據(jù)和參考文獻進行調(diào)整。）參考資料：川芎，作為一種常見的中藥材，具有多種藥理作用，如抗炎、抗腫瘤、抗氧化等。阿魏酸是川芎的主要活性成分之一，具有明顯的抗氧化和抗炎作用。對川芎中阿魏酸的含量進行測定，對于評價其質(zhì)量和藥效具有重要意義。本文將介紹采用高效液相色譜法（HPLC）測定川芎藥材和飲片中游離阿魏酸和總阿魏酸的含量，并探討其質(zhì)量評價指標(biāo)。實驗儀器：高效液相色譜儀（Agilent1260）、紫外檢測器、色譜柱（C18，250mm×6mm，5μm）、超聲波清洗器、電子天平。實驗試劑：甲醇（色譜純）、乙腈（色譜純）、磷酸（分析純）、甲酸（分析純）、阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品、川芎藥材和飲片。精密稱取阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，用甲醇溶解，制成濃度為1mg/mL的對照品溶液。分別取川芎藥材和飲片樣品各5g，加入甲醇50mL，超聲提取30分鐘，過濾，濾液蒸干，殘渣用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，定容至刻度。色譜柱：C18柱（250mm×6mm，5μm）；流動相：甲醇-乙腈-1%甲酸溶液（20:20:60）；流速：1mL/min；檢測波長：313nm；柱溫：30℃。分別取對照品溶液和供試品溶液進樣，記錄色譜圖。通過對比保留時間和峰面積，對阿魏酸進行定性和定量分析。采用外標(biāo)法計算游離阿魏酸和總阿魏酸的含量。阿魏酸，一種天然有機酸，廣泛存在于許多植物和真菌中，因其獨特的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性而受到廣泛。近年來，阿魏酸在醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域的應(yīng)用前景日益廣闊，因此對其研究也在不斷深入。本文將綜述阿魏酸的研究進展，以期為相關(guān)領(lǐng)域的研究者提供參考。阿魏酸主要存在于洋蔥、大蒜、小麥等植物及一些真菌中，具有多種生物活性，如抗氧化、抗炎、抗腫瘤等。阿魏酸在醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用前景。在醫(yī)藥領(lǐng)域，阿魏酸具有明顯的抗氧化和抗炎作用，可用于治療心血管疾病、腫瘤等疾病。阿魏酸還具有抑制細菌和真菌的作用，可用于抗菌和抗真菌治療。在食品領(lǐng)域，阿魏酸常用于添加劑和調(diào)味品中，以增強食品的營養(yǎng)價值和風(fēng)味。阿魏酸還可作為食品防腐劑和抗氧化劑，有效延長食品的保質(zhì)期。在化妝品領(lǐng)域，阿魏酸因其抗氧化和抗炎作用而被廣泛添加到護膚品和彩妝中，以改善皮膚質(zhì)量和預(yù)防皮膚老化。目前，對阿魏酸的研究主要集中在提取工藝、生物活性及作用機制等方面。阿魏酸在高溫、光照等條件下的穩(wěn)定性較差，對其應(yīng)用和研究方向提出了挑戰(zhàn)。雖然阿魏酸具有多種生物活性，但其具體的作用機制仍需進一步探討。目前，對阿魏酸的研究主要采用化學(xué)合成、植物提取等方法。這些方法都存在一定的局限性，如化學(xué)合成步驟復(fù)雜、植物提取效率低等。尋找一種高效、穩(wěn)定的制備阿魏酸的方法是當(dāng)前研究的重點之一。已有研究采用合成生物學(xué)的方法，通過微生物發(fā)酵途徑生產(chǎn)阿魏酸，為阿魏酸的制備提供了新的途徑。例如，利用酵母發(fā)酵生產(chǎn)阿魏酸的研究表明，通過優(yōu)化發(fā)酵條件和基因改造，可以提高阿魏酸的產(chǎn)量和純度。一些研究者還探索了利用植物細胞工程和基因工程等方法生產(chǎn)阿魏酸的可能性。除了制備方法外，研究者還對阿魏酸的作用機制進行了深入研究。例如，阿魏酸對氧化應(yīng)激的保護作用及其在心血管疾病治療中的潛在應(yīng)用；阿魏酸對炎癥反應(yīng)的抑制作用及其在抗炎治療中的應(yīng)用；以及阿魏酸在抗腫瘤藥物研發(fā)中的潛力等。這些研究為阿魏酸在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用提供了重要的理論依據(jù)。阿魏酸作為一種具有多種生物活性的天然有機酸，其在醫(yī)藥、食品和化妝品等領(lǐng)域的應(yīng)用前景廣闊。目前對阿魏酸的研究仍存在一定的問題和爭議，如穩(wěn)定性差、作用機制不明等。未來研究需要進一步探討阿魏酸的作用機制和穩(wěn)定性問題，為相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用提供更加可靠的理論依據(jù)和實踐指導(dǎo)。同時，隨著科技的不斷進步，合成生物學(xué)、植物細胞工程和基因工程等新技術(shù)為阿魏酸的制備提供了新的思路和方法。未來研究可以嘗試將這些新技術(shù)應(yīng)用于阿魏酸的制備過程中，以提高其產(chǎn)量、純度和穩(wěn)定性，從而更好地推動阿魏酸在各個領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展。阿魏酸是一種天然有機化合物，在食品、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域都有著廣泛的應(yīng)用。本文將介紹阿魏酸的功能和應(yīng)用。阿魏酸具有顯著的抗氧化作用，可以清除體內(nèi)的自由基，保護細胞免受氧化損傷。研究表明，阿魏酸具有比維生素C和維生素E更強的抗氧化能力。阿魏酸具有抗炎作用，可以減輕炎癥反應(yīng)，緩解疼痛。研究表明，阿魏酸可以抑制炎癥介質(zhì)的釋放，減輕炎癥反應(yīng)。阿魏酸具有抗腫瘤作用，可以抑制腫瘤細胞的生長和擴散。研究表明，阿魏酸可以抑制腫瘤細胞的DNA合成，從而抑制腫瘤細胞的生長和擴散。阿魏酸具有抗菌作用，可以抑制細菌的生長和繁殖。研究表明，阿魏酸可以抑制細菌的細胞壁合成，從而抑制細菌的生長和繁殖。阿魏酸在食品工業(yè)中用作抗氧化劑和防腐劑，可以延長食品的保質(zhì)期。研究表明，阿魏酸可以有效地抑制油脂的氧化反應(yīng)，延長食品的保質(zhì)期。阿魏酸還可以用作食品香料的原料，增加食品的口感和香氣。在醫(yī)藥領(lǐng)域，阿魏酸被用作藥物原料，具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤和抗菌等作用。研究表明，阿魏酸可以有效地緩解疼痛、減輕炎癥反應(yīng)、抗腫瘤和抗菌等作用。阿魏酸還可以用于制作化妝品和保健品等產(chǎn)品。阿魏酸是一種具有廣泛應(yīng)用價值的天然有機化合物。它具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤和抗菌等作用。它在食品、醫(yī)藥、化妝品等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。阿魏酸，化學(xué)名稱為3-甲氧基-4-羥基肉桂酸，化學(xué)式為C10H10O4，是肉桂酸的衍生物之一。阿魏酸，化學(xué)名稱為3-甲氧基-4-羥基肉桂酸，在阿魏、當(dāng)歸、川芎、升麻、酸棗仁等中藥材中的含量較高，是這些中藥的有效成分之一。阿魏酸有順式、反式兩種異構(gòu)體，均為淡黃色固體?？赏ㄟ^三種途徑從植物中獲得阿魏酸：一是從阿魏酸與一些小分子的結(jié)合物中獲得，二是從植物細胞壁中獲得，三是通過組織培養(yǎng)獲得。植物中阿魏酸多通過酯鍵與多糖和木質(zhì)素交聯(lián)或自身酯化或醚化形成二阿魏酸，一般用堿法和酶法打斷酯鍵釋放阿魏酸，再采用合適的溶劑進行提取。采用4%氫氧化鈉在通氮氣條件下常溫反應(yīng)24h，可釋放出細胞壁中出的阿魏酸。最近研究發(fā)現(xiàn)通過提高提取溫度，并加入適合的保護劑，在較短時間內(nèi)就能將麥麩中大部分阿魏酸游離出來。采用低濃度的氫氧化鈉溶液，在適當(dāng)?shù)奶崛囟认履軐Ⅺ滬熤械拇蟛糠职⑽核後尫懦鰜恚崛∵^程中添加亞硫酸鈉可增加阿魏酸的回收率。由于堿液成分復(fù)雜，特別是含有色素物質(zhì)，目前，堿液中阿魏酸的分離方法主要是采用活性炭吸附法。谷維素中含有阿魏酸的結(jié)構(gòu)單元，以酯的形式存在，且易于分解，可以先用堿水解谷維素，再用酸化的方法制備阿魏酸，其反應(yīng)式水解谷維素制備阿魏酸的操作方便，收率高達7%，副產(chǎn)品為環(huán)木菠蘿醇類。而且谷維素來源廣、產(chǎn)量大，并且價格適中。阿魏酸酯酶是指能將阿魏酸甲酯、低聚糖阿魏酸酯和多糖阿魏酸之中阿魏酸游離出來的一種酶。真菌、細菌和酵母都能分泌阿魏酸酯酶。以黑曲霉作菌種，采用液體深層發(fā)酵法，制備出含有阿魏酸酯酶和阿拉伯木聚糖酶的混合酶制劑，采用混合酶制劑作用于去淀粉的麥麩，發(fā)現(xiàn)通過3次降解后麥麩降解率達46%。采用植物組織培養(yǎng)法是獲得阿魏酸的一條重要途徑。一些研究表明，對某些植物組織培養(yǎng)能使之產(chǎn)生較高產(chǎn)量的阿魏酸衍生物。如對糖甜菜、玉米進行細胞懸浮培養(yǎng)能獲得水溶性的阿魏酸葡萄糖酯、阿魏酸蔗糖酯等，含量可高達0μmol/g愈傷組織（干重）。直接提取物中，阿魏酸的含量比較低，需要進一步的純化。阿魏酸的化學(xué)合成法是以香蘭素為基本原料，主要應(yīng)用的有機反應(yīng)有Wittig-Horner反應(yīng)和Kneoevenagel反應(yīng)。亞磷酸三乙酯乙酸鹽和乙酰香蘭素在強堿體系中發(fā)生Wittig-Horner反應(yīng)，再用濃鹽酸酸化得到阿魏酸。該法需要預(yù)先保護酚羥基，否則由于強堿的存在，生成酚鈉例子會抑制羰基和碳負離子之間的反應(yīng)，還易發(fā)生副反應(yīng)生成雜質(zhì)。在吡啶溶劑中加入少量有機堿作為催化劑，香蘭素和丙二酸發(fā)生Kneoevenagel反應(yīng)生成阿魏酸，催化劑有哌啶和苯胺等。但該法反應(yīng)時間長，長達三周，且獲得是反式和順式阿魏酸混合物。生物合成法是用幾種微生物將阿魏酸前體轉(zhuǎn)化為阿魏酸，如將丁香油中提取得到的丁子香酚肉桂酸酯轉(zhuǎn)化為阿魏酸。生物合成法是一種清潔有效的合成方法，但目前仍未能研究出大量生產(chǎn)的方法。常用的萃取阿魏酸的溶劑主要有乙醇、乙酸乙酯等。原理是利用對阿魏酸的溶解度大的溶劑萃取提取液中的阿魏酸，然后減壓蒸餾除去溶劑，從而獲得阿魏酸成品。此法工藝較簡單但收率較低，能耗較大，是提純阿魏酸最常用的方法。吸附法是目前研究比較多的一種提純方法。原理是通過加入吸附材料對溶液中的阿魏酸進行吸附富集，然后采用洗脫劑洗脫吸附的阿魏酸。從活性炭、聚苯乙烯交聯(lián)樹脂、PVPP等吸附介質(zhì)中進行了篩選，研究表明活性炭以其對阿魏酸高度的吸附能力（每100g吸附22g）、不結(jié)合單糖分子、容易洗脫等優(yōu)點為最好的吸附介質(zhì)。在活性炭吸附結(jié)束后，可以用乙醇把吸附的阿魏酸洗脫下來。另外活性炭也是一種優(yōu)良的吸附材料，提取液經(jīng)活性炭吸附后，當(dāng)活性炭達到吸附飽和之后，經(jīng)洗脫可以從提取液中獲得較純的阿魏酸。展開劑：苯-醋酸乙酯-甲酸（8:2:2），薄層板：硅膠GF254，顯色條件：紫外光燈（254nm），對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品，加甲醇制成1mg./mL溶液。硅膠G薄層板上，以苯-氯仿-冰醋酸（6:1:5）為展開劑，展開，取出。顯色條件：紫外光燈（365nm）。硅膠G薄層板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸（5:2:1）為展開劑，展開，取出。顯色條件：紫外光燈（365nm）。硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲酸（5:4:5）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。硅膠G薄層板上，以苯－氯仿－冰醋酸（6:5:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新配制的1%三氯化鐵和1%鐵氰化鉀（1:1）的混合溶液。硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸（4:1:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以新配制的1%三氯化鐵和1%鐵氰化鉀（1:1）的混合溶液。硅膠G鋪板，105℃活化半小時。展開劑：氯仿-乙酸乙酯-甲酸（5:4:1）。展距17cm。顯色劑：在熒光燈（254nm）下觀察。用高效液相色譜法測定阿魏酸的含量，方法簡單快速，結(jié)果準(zhǔn)確，精密度高。文獻介紹其流動相多采用酸性系統(tǒng)，主要有甲醇-水-磷酸系統(tǒng)、甲醇-水-冰乙酸系統(tǒng)、甲醇-乙腈-水-冰乙酸系統(tǒng)等，試驗中可適當(dāng)調(diào)整甲醇的用量。采用HPLC法測定復(fù)方銀杏口服液中阿魏酸的含量，流動相為甲醇：1%冰醋酸（45:55），檢測波長為320nm，流速0mL/min，柱溫是25℃。阿魏酸進樣量在176-88μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。薄層掃描法也是常用的阿魏酸含量測定方法之一。該法迅速，但其靈敏度不甚理想。以苯-冰醋酸-氯仿（6:5:5）為展開劑，單波長反射發(fā)鋸齒掃描，掃描波長為325nm。穩(wěn)定性好。利用薄層層析-分光光度計法對從農(nóng)副產(chǎn)品黑麥麥麩中提取的阿魏酸進行定性測定展開劑為二氯甲烷：乙腈：甲酸=75：25：10；以分光光度計法進行定量測定，結(jié)果表明：雖然分光光度計法易受其他成分的干擾，但高效液相色譜法比較，相對誤差為7%左右，且重現(xiàn)性好。毛細管區(qū)帶電泳是目前應(yīng)用最廣泛的毛細管電泳分離模式。特點簡單、高效、快速、樣品用量少、已自動化操作。等采用空心熔融石英毛細管檢測當(dāng)歸制劑中的阿魏酸含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在5-100μg/mL范圍內(nèi)可以定量檢測，重復(fù)性好。方法原理：供試品水浴蒸至近干，加甲醇進行熱回流提取，濾過，濾液蒸干，殘渣加水溶解，以稀鹽酸調(diào)pH=1~2，煮沸，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚提取，乙醚提取液再用2%碳酸鈉提取，碳酸鈉提取液用乙酸乙酯洗滌，棄去洗滌液，堿液用稀鹽酸調(diào)pH=1~2,用乙醚提取，乙醚提取液蒸干，殘渣加甲醇溶解，過濾，濾液進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長323nm處檢測阿魏酸的吸收值，計算出其含量。Shim-PackCLC-ODS分析柱（150×6mm，5μm），理論板數(shù)按阿魏酸峰計算為4000。精密稱取阿魏酸對照品30mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解，并加至刻度，混勻。精密吸收5mL置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，混勻，得對照品溶液。供試品水浴蒸至近干，加甲醇加熱回流提取2次，每次50mL，回流30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水40mL溶解，以稀鹽酸調(diào)pH=1~2，煮沸，放冷，移至分液漏斗中，用乙醚10mL提取4次，合并乙醚液，用2%碳酸鈉10mL提取4次，合并提取液，用乙酸乙酯25mL洗滌，棄去洗滌液，堿液用稀鹽酸調(diào)pH=1~2，以乙醚10mL提取4次，合并乙醚液,40~45℃蒸干，殘渣精密加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一?！熬芰咳　毕抵噶咳◇w積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。精密吸取上述對照品溶液20μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長323nm處測定阿魏酸的吸收值，以進樣量對峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長323nm處測定阿魏酸的吸收值，計算出其含量。輻射導(dǎo)致的器官衰竭很大程度上是由慢性過氧化損傷引起。輻射對機體造成的損傷分直接損傷和間接損傷兩種，直接損傷即輻射直接引起細胞內(nèi)一些敏感分子的斷裂；間接損傷則是引起水的輻解導(dǎo)致細胞內(nèi)活性氧升高進而引起亞細胞結(jié)構(gòu)的改變，因此抗氧化劑被廣泛用于輻射損傷的治療。保護細胞免受活性氧損傷必須保持細胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的內(nèi)源性巰基池，尤其是保持谷胱甘肽（GSH）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）含量的穩(wěn)定。谷胱甘肽為過氧化氫和脂質(zhì)過氧化物轉(zhuǎn)化成水和脂質(zhì)醇提供還原當(dāng)量，保護巰基蛋白群免受氧化損傷。谷胱甘肽生物合成的限速反應(yīng)則是由谷氨酸鹽—半胱氨酸連接酶（GCL）催化完成，該酶是由一個催化亞單位